常用储存液的配制.docx
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常用储存液的配制
一.常用贮液与溶液
1mol/L亚精胺(Spermidine:
溶解2.55g亚精胺于足量的水中,使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺(Spermine:
溶解3.48g精胺于足量的水中,使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺(ammoniumacetate:
将77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA:
加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级,无DNA酶于9.5ml水中(为减少变性,
须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白,盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇(DTT:
在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水,分成小份贮存于-20℃。
或转移100mg的二硫苏糖醇
至微量离心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾(potassiumacetate:
溶解78.5g乙酸钾于足量的水中,加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾(KCl:
溶解7.46g氯化钾于足量的水中,加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠(sodiumacetate:
溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中,用冰乙酸调溶液的pH至5.2,再加水定容到100ml。
0.5mol/LEDTA:
配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L,混合后形成EDTA的三钠盐。
或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。
1mol/LHEPES:
将23.8gHEPES溶于约90ml的水中,用NaOH调pH(6.8-8.2,然后用水定容至100ml。
25mg/mlIPGT:
溶解250mg的IPGT(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷于10ml水中,分成小份贮存于-20℃。
1mol/LMgCl2:
溶解20.3gMgCl2·6H2O于足量的水中,定容到100ml。
100mmol/LPMSF:
溶解174mg的PMSF(苯甲基磺酰氟于足量的异丙醇中,定容到10ml。
分成小份并用铝箔将装液管包裹
或贮存于-20℃。
20mg/ml蛋白酶K(proteinaseK:
将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
10mg/mlRnase(无DNase(DNase-freeRNase:
溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中(pH5.0。
溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。
用1mol/L的Tris-HCl调pH至7.5,于-20℃贮存。
(配制过程中要戴手套
5mol/L氯化钠(NaCl:
溶解29.2g氯化钠于足量的水中,定容至100ml。
10N氢氧化钠(NaOH:
溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中(磁力搅拌器搅拌,氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。
10%SDS(十二烷基硫酸钠:
称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。
用水定容至1L。
2mol/L山梨(糖醇(Sorbitol:
溶解36.4g山梨(糖醇于足量水中使终体积为100ml。
100%三氯乙酸(TCA:
在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。
(稀释液应在临用前配制
2.5%X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷:
溶解25mg的X-gal于1ml的二甲基甲酰胺(DMF,用铝箔包裹装液管,贮存于-20℃。
100×Denhardt试剂(Denhardt'sregent
依照上表称取各组分,溶于水中定容。
过滤除菌及杂质,分装成小份于-20℃贮存。
10×标准DNA连接酶缓冲液(standardDNAligasebuffer(粘端、平端连接
将配制好的缓冲液分装成小份,贮存于-20℃。
100mmol/LdNTP溶液(dNTPsolutions
可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液,-80℃可贮存至少6个月。
10mmol/LdNTP混合液
20%PEG8000/2.5MNaCl
加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中,加水至终体积100ml,用磁力搅拌器搅拌溶解。
20×SSC
溶解柠檬酸三钠(二水和氯化钠于约0.9L水中,加几滴10NNaOH溶液调pH为7.0,用水补足体积至1L。
DEPC(焦碳酸二乙酯处理水
加100ulDEPC于100ml水中,使DEPC的体积分数为0.1%。
在37℃温浴至少12h,然后在15psi条件下高压灭菌20min,以使残余的DEPC失活。
DEPC会与胺起反应,不可用DEPC处理Tris缓冲液。
甲酰胺(deionizedformamide
直接购买或加DowexXG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中,用磁力搅拌器轻轻搅拌1h,可去除甲酰胺中的离子。
经Whatman1号滤纸过滤除去树脂后分成小份,充氮气于-80℃贮存(防止氧化。
磷酸缓冲液(phosphatebuffer
按照下表所给定的体积,混合1mol/L的磷酸二氢钠(单碱和1mol/L磷酸氢二钠(双碱贮液,获得所需pH的磷酸缓冲液。
配制1mol/L的磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O贮液:
溶解138g于足量水中,使终体积为1L;1mol/L磷酸氢二钠(Na2HPO4贮液:
溶解142g于足量水中使终体积为1L。
TE(用于悬浮和贮存DNA
Tris缓冲液(Tris-HClbuffer
将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中,再根据所要求的pH(25℃下加一定量的浓盐酸(11.6N,用水调整终体积至1L。
二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液
电泳缓冲液
50×Tris-乙酸(TAE缓冲液
5×Tris-硼酸(TBE缓冲液
染料
1%溴酚蓝(bromophenolblue
加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中,搅拌或涡旋混合直到完全溶解。
1%二甲苯青FF(xylenecyanoleFF
溶解1g二甲苯青FF于足量水中,定容到100ml。
10mg/ml的溴化乙锭(ethidiumbromide
小心称取1g溴化乙锭,转移到广口瓶中,加100ml水,用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。
用铝箔包裹装液管,于4℃贮存。
凝胶上样液(gelloadingsolutions
6×碱性凝胶上样液(室温贮存
6×聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存
6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存
6×甘油凝胶上样液(4℃贮存
6×蔗糖凝胶上样液(室温贮存
10×十二烷基硫酸钠/
甘油凝胶上样液(室温贮存
三.常用培养基
LB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:
如果需要用1NNaOH(~1ml调整pH至7.0,再补足水至1L。
注:
琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
SOB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:
用水补足体积到1L。
分成100ml的小份,高压灭菌。
培养基冷却到室温后,再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。
SOC培养基
成分、方法同SOB培养基的配制,只是在培养基冷却到室温后,除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外,再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖(18g葡萄糖溶于足够水中,再用水补足到100ml,用0.22um的滤膜过滤除菌。
TB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:
各组分溶解后高压灭菌。
冷却到60℃,再加100ml灭菌的170mmol/L
2×YT培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:
如果需要用1NNaOH(~1ml调整pH至7.0,再补足水至1L。
注:
琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
YPD培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:
用水补足体积为1L后,高压灭菌。
建议在高压灭菌之前,对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸,因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。
为了配制平板,需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。
四.常用抗生素
氨苄青霉素(ampicillin(100mg/ml
溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
羧苄青霉素(carbenicillin(50mg/ml
溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
甲氧西林(methicillin(100mg/ml
溶解1g甲氧西林钠于足量的水中,最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。
卡那霉素(kanamycin(10mg/ml
溶解100mg卡那霉素于足量的水中,最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
氯霉素(chloramphenicol(25mg/ml
溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以12.5ug/ml~25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
链霉素(streptomycin(50mg/ml
溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
萘啶酮酸(nalidixicacid(5mg/ml
溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
四环素(tetracyyline(10mg/ml
溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中,或者将无碱的四环素溶于无水乙醇,定容至10ml。
分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光,于-20℃贮存。
常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。