检验医学SOP文件4免疫室作业指导书教材.docx
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检验医学检验医学SOP文件文件4免疫室作业指导书教材免疫室作业指导书教材免疫室作业指导书文件编号：
ABCD-3-MY-0152第A版编制：
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2015年4月8日ABCD人民医院检验科目录序号主题内容代号页号1血清乙型肝炎病毒表面抗原检测ABCD-3-MY-0162血清乙型肝炎病毒表面抗体检测ABCD-3-MY-0293血清乙型肝炎病毒e抗原检测ABCD-3-MY-03124血清乙型肝炎病毒e抗体检测ABCD-3-MY-04155血清乙型肝炎病毒核心抗体检测ABCD-3-MY-05186甲型肝炎病毒-IgM检测ABCD-3-MY-06217血清丙型肝炎病毒抗体检测ABCD-3-MY-07248血清麻疹IgM抗体试验ABCD-3-MY-08289人类免疫缺陷病毒抗体检测ABCD-3-MY-093110梅毒甲苯胺红不加热血清试验ABCD-3-MY-103411梅毒螺旋体特异性抗体检测ABCD-3-MY-113612免疫球蛋白A（IgA）测定ABCD-3-MY-123913免疫球蛋白M（IgM）测定ABCD-3-MY-134214免疫球蛋白G（IgG）测定ABCD-3-MY-144515补体C3测定（免疫比浊法）ABCD-3-MY-154816补体C4测定（免疫比浊法）ABCD-3-MY-165117类风湿因子（RF）测定ABCD-3-MY-175418抗链球菌溶血素O（ASO）测定ABCD-3-MY-185619C反应蛋白（CRP）测定ABCD-3-MY-195820C反应蛋白（CRP）定量测定ABCD-3-MY-206021支原体肺炎血清学试验ABCD-3-MY-216322D二聚体检测（胶乳凝集法）ABCD-3-MY-226523甲胎蛋白（AFP）定量测定ABCD-3-MY-236824癌胚抗原（CEA）定量测定ABCD-3-MY-247225糖链抗原125（CA125）定量测定ABCD-3-MY-257626CA153定量测定ABCD-3-MY-268027糖链抗原199（CA199）定量测定ABCD-3-MY-278428F-PSA定量测定ABCD-3-MY-288829T-PSA定量测定ABCD-3-MY-299230B12定量测定ABCD-3-MY-309631铁蛋白定量测定ABCD-3-MY-3110032叶酸（Folate）定量测定ABCD-3-MY-3210433人绒毛膜促性腺激素定量测定ABCD-3-MY-3310834血（尿）b2-MG微球蛋白定量测定ABCD-3-MY-3411235肌红蛋白定量测定ABCD-3-MY-3511636肌钙蛋白-I定量测定ABCD-3-MY-3612037CK-MB定量测定ABCD-3-MY-3712438HBsAg半定量测定ABCD-3-MY-3812839HBsAb定量测定ABCD-3-MY-3913140HBeAg半定量测定ABCD-3-MY-4013541HBeAb半定量测定ABCD-3-MY-4113842HBcAb半定量测定ABCD-3-MY-4214143HBcAb-IgM半定量测定ABCD-3-MY-4314444CMV-IGM半定量测定ABCD-3-MY-4414745RUBELLA-IGM半定量测定ABCD-3-MY-4515046微量加样器的质控ABCD-3-MY-4615447酶标分析仪操作维护规程ABCD-3-MY-4715748全自动酶标洗板机操作维护规程ABCD-3-MY-4815949特种蛋白测定仪操作维护规程ABCD-3-MY-4916050AxSYM免疫分析仪操作维护规程ABCD-3-MY-5016551免疫学室内质量控制操作程序ABCD-3-MY-5116952免疫学检验室间质量评价（EQA）ABCD-3-MY-52174修订页序号文件编号页码需更改的内容更改内容批准人批准日期123456789101112131415161718192021血清乙型肝炎病毒表面抗原检测（ELISA）1.原理在微孔条上预包被被纯化乙肝表面抗体，配以酶标记抗体（HBsAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗（HBsAg）。
2.标本采集2.1采集前病人准备：
受检者应空腹2.2标本种类：
血清或血浆2.3标本要求：
采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。
3.标本储存：
2-8保存不应超过1周，-20不应超过3个月，-70长期保存，应避免反复冻融。
4.标本运输：
密封，室温运输。
5.标本拒收标准：
污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
6.试剂6.1试剂名称：
乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒6.2试剂生产厂家：
英科新创（厦门）科技有限公司。
6.3包装规格：
96Test/Kit6.4试剂盒组成：
HBsAg微孔板，HBsAg酶标记抗体，HBsAg阳性对照血清，HBsAg阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。
6.5试剂储存条件及有效期：
2-8避光保存，有效期9个月。
7.仪器设备7.1仪器名称：
自动酶标仪7.2仪器厂家：
Rayto7.3仪器型号：
RT-21008.操作步骤8.1平衡：
将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。
8.2配液：
浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：
19稀释后使用。
8.3编号：
将微孔条固定于支架，按序编号。
8.4加样：
分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50l于相应孔中。
8.5加酶：
分别在每孔中加入酶标记抗体50l，轻拍混匀。
8.6温育：
置37温育60分钟，室温平衡5分钟。
8.7洗涤：
用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
8.8显色：
每孔加入底物A、B各50l，轻拍混匀，置37暗处15分钟。
8.9终止：
每孔加终止液50l，混匀。
8.10测定：
用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。
9.结果判断与分析9.1临界值（C.O.）的计算：
临界值=阴性对照孔OD值N2.1，阴性对照OD均值大于0.1时应重新试验，小于0.05时以0.05计算。
9.2结果判定：
样品OD值S/C.O=1者为HBsAg阳性样品OD值S/C.O=1者为HBsAb阳性样品OD值S/C.O=1者为HBeAg阳性样品OD值S/C.O1者为HBeAg阴性10.质量控制：
每次试验用含量为2NCU/ml的HBeAg质控血清同步检测，S/CO值应在控制范围内；如失控，则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。
11.参考范围：
阴性或阳性12.临床意义：
HBeAg阳性可作为体内HBV处在复制状态及血清具有传染性的一个标志；持续阳性则揭示转为慢性。
13.操作性能：
灵敏度高，特异性好。
14.方法局限性：
样品显色深浅与样品中抗原的含量没有一定正相关。
15.注意事项15.1每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。
15.2洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。
15.3加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。
如果滴加，滴加前应弃去12滴。
滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。
注意勿将试剂滴在孔壁上。
15.4所有样品都应按传染源处理。
15.5封口膜使用说明15.5.1微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。
在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。
15.5.2微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。
15.6不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。
16.当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：
应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。
17.参考文献：
中华人民共和国卫生部医政司编。
全国临床检验操作规程（第二版）412-413页。
18.其它：
必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。
血清乙型肝炎病毒e抗体检测（ELISA）1.原理在微孔条上预包被被纯化乙肝e抗体（HBeAb），配以酶标记抗原（HBeAb-HRP）、中和抗原（HBeAg）及TMB等其它试剂，采用竞争法原理检测人血清（或血浆）中乙肝e抗体（HBeAb）。
2.标本采集2.1采集前病人准备：
受检者应空腹。
2.2标本种类：
血清或血浆。
2.3标本要求：
采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。
3.标本储存：
2-8保存不应超过24小时，-20不应超过3个月，-70长期保存，应避免反复冻融。
4.标本运输：
密封，室温运输。
5.标本拒收标准：
污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
6.试剂6.1试剂名称：
乙型肝炎病毒e抗体诊断试剂盒6.2试剂生产厂家：
英科新创（厦门）科技有限公司。
6.3包装规格：
96Test/Kit6.4试剂盒组成：
HBeAb微孔板，HBeAb酶标记抗原，中和抗原，HBeAb阳性对照血清，HBeAb阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。
6.5试剂储存条件及有效期：
2-8避光保存，有效期9个月。
7.仪器设备7.1仪器名称：
自动酶标仪7.2仪器厂家：
Rayto7.3仪器型号：
RT-2100C8.操作步骤8.1平衡：
将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。
8.2配液：
浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：
19稀释后使用。
8.3编号：
将微孔条固定于支架，按序编号。
8.4加样：
分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50l于相应孔中。
8.5加酶：
分别在每孔中加入酶标记抗体50l，轻拍混匀。
8.6中和：
分别在每孔中加入中和抗原（HBeAg）50l，轻拍混匀。
8.7温育：
置37温育60分钟，室温平衡5分钟。
8.8洗涤：
用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
8.9显色：
每孔加入底物A、B各50l，轻拍混匀，置37暗处15分钟。
8.10终止：
每孔加终止液50l，混匀。
8.11测定：
用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。
9.结果判断与分析9.1临界值（C.O.）的计算：
待测样品为原倍血清时，临界值阴性对照孔OD值N0.2，待测样品为非原倍血清时，临界值阴性对照孔OD值N0.5，（非原倍血清是指稀释血清、质控血清等）。
9.2结果判定：
样品OD值S/C.O1者为HBeAb阴性10.质量控制：
每次试验用含量为2NCU/ml的HBeAb质控血清同步检测，S/CO值应在控制范围内；如失控,则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。
11.参考范围：
阴性12.临床意义：
HBeAb阳性可作为体内HBV处在复制状态及血清具有传染性的一个标志。
阳性表示机体已产生免疫力，病毒活力降低，传染性减弱，预后好。
13.操作性能：
灵敏度高，特异性好。
14.方法局限性：
样品显色深浅与样品中抗体的含量没有一定相关。
15.注意事项15.1每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。
15.2洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。
15.3加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。
如果滴加，滴加前应弃去1-2滴。
滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。
注意勿将试剂滴在孔壁上。
15.4所有样品都应按传染源处理。
15.5封口膜使用说明15.5.1微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。
在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。
15.5.2微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。
15.6不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。
16.当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：
应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。
17.参考文献：
中华人民共和国卫生部医政司编。
全国临床检验操作规程（第二版）412-413页。
18.其它：
必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。
血清乙型肝炎病毒核心抗体检测（ELISA）1.原理在微孔条上预包被被纯化乙肝核心抗原（HBcAg），配以酶标记抗体（HbcAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用竞争抑制法原理检测人血清（或血浆）中乙肝核心抗体（HBcAb）。
2.标本采集2.1采集前病人准备：
受检者应空腹。
2.2标本种类：
血清或血浆。
2.3标本要求：
采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。
3.标本储存：
2-8保存不应超过1周，-20不应超过3个月，-70长期保存，应避免反复冻融。
4.标本运输：
密封，室温运输。
5.标本拒收标准：
污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
6.试剂6.1试剂名称：
乙型肝炎病毒核心抗体诊断试剂盒6.2试剂生产厂家：
英科新创（厦门）科技有限公司。
6.3包装规格：
96Test/Kit6.4试剂盒组成：
HBcAb微孔板，HBcAb酶标记抗原，HBcAb阳性对照血清，HBcAb阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。
6.5试剂储存条件及有效期：
2-8避光保存，有效期9个月。
7.仪器设备7.1仪器名称：
自动酶标仪7.2仪器厂家：
Rayto7.3仪器型号：
RT-2100C8.操作步骤8.1平衡：
将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。
8.2配液：
浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：
19稀释后使用。
8.3编号：
将微孔条固定于支架，按序编号。
8.4加样：
每测定孔加入50l样品。
对照孔中加入阴、阳性对照血清各50l。
作为临床诊断依据，必须将原倍血清样品按1：
30稀释后再检验，稀释液应采用生理盐水或10mMPBS；作为流行病学调查依据，使用原倍血清检验。
8.5加酶：
每孔加入酶标记抗体50l，轻拍混匀。
8.6温育：
置37温育60分钟，室温平衡5分钟。
8.7洗涤：
用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
8.8显色：
每孔加入底物A、B各50l，轻拍混匀，置37暗处15分钟。
8.9终止：
每孔加终止液50l，混匀。
8.10测定：
用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。
9.结果判断与分析9.1临界值（C.O.）的计算：
临界值阴性对照孔OD值N0.29.2结果判定：
样品OD值S/C.O1者为HBcAb阴性10.质量控制：
每次试验用含量为2NCU/ml的HBcAb质控血清同步检测，S/CO值应在控制范围内；如失控，则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。
11.参考范围：
阴性12.临床意义：
高效价阳性表示现实感染，低效价阳性表示既往感染。
13.操作性能：
灵敏度高，特异性好。
14.方法局限性：
样品显色深浅与样品中抗体的含量没有一定相关。
15.注意事项15.1每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。
15.2洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。
15.3加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。
如果滴加，滴加前应弃去1-2滴。
滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。
注意勿将试剂滴在孔壁上。
15.4所有样品都应按传染源处理。
15.5封口膜使用说明15.5.1微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。
在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。
15.5.2微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。
15.6不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。
16.当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：
应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。
17.参考文献：
中华人民共和国卫生部医政司编。
全国临床检验操作规程（第二版）413页。
18.其它：
必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。
甲型肝炎病毒-IgM检测（ELISA法）1.原理本法是用抗人链捕获待测血清中特异性IgM，然后用HAV与特异性IgM抗体反应，再加酶标记抗M抗体，最后加底物显色。
2.标本采集2.1采集前病人准备：
受检者应空腹。
2.2标本种类：
血清或血浆。
2.3标本要求：
采集病人静脉血2ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。
3.标本储存：
2-8C保存不应超过1周，-20C不应超过3个月，-70C长期保存，应避免反复冻融。
4.标本运输：
密封，室温运输。
5.标本拒收标准：
污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
6.试剂6.1试剂名称：
抗HAVIgM检测ELISA试剂盒6.2试剂生产厂家：
郑州博赛生物技术研究所6.3包装规格：
48Test/Kit6.4试剂盒组成：
包被反应板，样品稀释液，酶标记抗体，阳性对照血清，阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，密封袋。
6.5试剂储存条件及有效期：
2-8C避光保存，有效期6个月。
7.仪器设备7.1仪器名称：
自动酶标仪7.2仪器厂家：
Rayto7.3仪器型号：
RT-2100C8操作步骤8.1平衡：
将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25C），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。
8.2配液：
浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：
19稀释后使用。
8.3编号：
将微孔条固定于支架，按序编号。
8.4加样品稀释液：
用加样器在微孔反应条板孔中加入样品稀释液，每孔100l，空下四孔准备加对照。
8.5加标本和留空白：
将每份待检标本各5l分别加入已有样品稀释液的各孔中，留下一孔不加标本作空白对照，标好位置。
8.6加对照：
在预先空下的四孔中用加样器分别加入阴性对照一孔，阳性对照三孔，每孔100l，标好位置。
对照应在所有标本加完以后再加，以保证阈值准确性。
8.7温育
（一）：
充分混匀，加上封板膜，置37温育20分钟。
8.8洗涤
（一）：
用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
8.9加酶：
分别在每孔中加入酶标记抗体100l，轻拍混匀。
8.10温育
（二）：
充分混匀，加上封板膜，置37温育30分钟。
8.11洗涤
（二）：
用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
8.12显色：
每孔加入底物A、B各50l，轻拍混匀，置37暗处10分钟。
8.13终止：
每孔加终止液50l，混匀。
8.14测定：
用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。
9.结果判断与分析9.1临界值（C.O.）的计算：
临界值阴性对照孔OD值N2.1，阴性对照OD均值大于0.1时应重新试验，小于0.05时以0.05计算。
9.2结果判定：
样品OD值S/C.O=1者为阳性样品OD值S/C.O=1者为阳性样品OD值S/C.O=1者为阳性样品OD值S/C.O1者为阴性9.3正常时，阴性对照OD值应=0.80，阴性对照若小于0.08以0.08计算。
9.4若阳性对照OD值超出正常范围或其孔间之差大于30%，应重复试验。
9.5初次试验阳性者应重新取样进行双孔复试，按全国HIV检测管理规范的要求，须将血样或重新采血送HIV确认实验室做确认试验，确认报告阴性者，血可以发放使用；凡确认实验阳性和可疑者，血不能发放使用，统一送确认实验室处理。
10.质量控制：
每次测定均做双孔或以上复试；阴阳对照OD值应在要求范围内。
11.参考范围：
阴性12.临床意义：
在血清中HIV抗体的存在表明可能有人类免疫缺陷病毒感染。
13.操作性能：
灵敏度、特异性高。
14.方法局限性14.1只能用作HIV抗体检测的初筛试验。
14.2样品显色深浅与样品中抗体的含量没有一定正相关。
15.病危报警值的处理：
初次试验阳性者应重新取样进行双孔复试，按全国HIV检测管理规范的要求，须将血样或重新采血送HIV确认实验室做确认试验；通知防保科和临床申请医生。
16.注意事项16.1试剂的使用：
整个检测工作必须符合全国艾滋病检测工作规范中应严格防止交叉感染，操作时必须带手套，穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度。
所有样品，洗弃液和各种废弃物都应按传染物处理。
16.2HIV-1/HIV-2抗体测定结果的判定必须以酶标仪读数为准。
16.3样品、酶结合物溶液等应用加液器加注，并经常校对其准确性。
16.4洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗静。
16.5所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
16.6微孔板条从冷藏环境中取出时应在室温中平衡至潮气干尽方可使用；未用完者须放入有干燥剂的密封袋中保存。
16.7用于检测的样品应保持新鲜。
16.8剩余样品及废弃物应经121摄氏度高压蒸汽灭菌30分钟，或用5.0g/l次氯酸钠等消毒剂处理30分钟后废弃。
16.9不同批号的试剂组分不可混用。
16.10本试剂的使用单位必须是经当地卫生行政部门批准的HIV初筛实验室；使用人员必须是经过培训的指定人员。
17.当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：
应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。
18.参考文献：
中华人民共和国卫生部医政司编。
全国临床检验操作规程（第二版）。
19.其它：
必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格“防伪标签的试剂。
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