第五章 实验动物设施与设备.docx
《第五章 实验动物设施与设备.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《第五章 实验动物设施与设备.docx(37页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
![第五章 实验动物设施与设备.docx](https://file1.bdocx.com/fileroot1/2023-1/3/71cc600a-bc77-4368-9479-f36562254a10/71cc600a-bc77-4368-9479-f36562254a101.gif)
第五章实验动物设施与设备
第五章实验动物设施与设备
内容提要:
本章主要介绍了实验动物设施的分类和实验动物设施的组成,重点讨论开
放环境、屏障环境和隔离环境的结构特点和实验动物设施使用特点,以及生物安全和感
染实验设施的使用特点。
关键词:
设施;开放环境;屏障环境;隔离环境;特殊环境设施。
实验动物科学一个重要的研究目标是控制实验动物的环境。
环境因素的变化常常引
起实验动物生物学特征的改变,进而有可能影响研究结果,同时,实验动物环境的问题
也不可避免涉及到动物福利问题。
合理设计和建造实验动物标准设施有利于高效管理,
使实验动物生产和动物实验条件达到最优化。
第一节实验动物的设施分类
一、实验动物设施的概念
实验动物设施是指实验动物和动物实验设施的总和。
一个设施可以大到动物中心或
生产繁殖机构,小至某一实验动物室。
总体的原则是提供实验动物最适宜的环境,保障
实验动物的质量和为动物实验的准确性提供可靠保障。
二、实验动物设施分类
(一)、按其功能分类
1.动物生产设施(AnimalProductionFacility)指用于实验动物的饲育繁殖、生产
的建筑物、设备以及运营管理在内的总和。
2.动物实验设施(AnimalExperimentalFacility)指用于研究、试验、教学、
生物制品、药品生产、检定等为目的进行实验动物饲育、试验的建筑物、设备以及运营
管理在内的总和。
3.特殊动物实验设施(SpecialAnimalExperimentalFacility)指用于感染、毒理动
物实验、病原微生物和细胞培养、重组DNA、转基因动物实验、克隆和胚胎干细胞、
细胞实验和应用特殊化学物质等进行实验的建筑物、设备以及包括运营管理在内的总
和。
(二)按微生物控制程度分类
1.普通环境(OpenSystem)实验动物的生存环境直接与外界大气相通,是饲养
普通级实验动物的场所。
饲料、饮水要符合卫生要求,垫料要消毒,饲养室内要有防鼠、
防昆虫等措施。
2.屏障环境(BarrierSystem)实验动物的生存环境与外界隔离,是饲养清洁级动
1
物和SPF级动物的设施。
进入实验动物生存环境的空气须经过滤净化处理,其洁净度相
对于10000级,进入屏障内的人、动物和物品如饲料、水、垫料及实验用品等均需有严
格的微生物控制。
(图5-1)
经初、中、
具无害化
空
高三级过滤
处理功能
气后进入
的密封排
动气系统
高压消毒锅
物
、
物
品
进渡槽
出
人
通
淋浴
传递窗
员
路
进
出
图5-1屏障环境
3.隔离环境(IsolationSystem)实验动物生存在与外界环境完全隔离的环境内。
工作人
员通过隔离器上组装的无菌手套进行操作,不直接接触动物。
饲料、饮水,垫料,笼具
等都应高压、高温灭菌。
进入隔离器内的一切物品均需通过传递舱灭菌。
适合饲养SPF、
无菌动物、动物的保种育种或同等级的动物实验。
(三)、按设施的平面布局分类
根据饲养和使用实验动物微生物等级要求,建筑设施中又分为无走廊式、单走廊式、
双走廊式和三走廊式。
1.无走廊式(NoCorridors)此类设施一般面积比较小,能最大限度利用空间,主要
用于饲养品种单一或以实验为主的设施。
由于人流和物流交叉,进出路线交叉,而且污
染物品容易影响洁净物品的清洁度,一般饲养普通级动物。
2.单走廊式(SingleCorridors)为了有效地利用洁净区内的面积和节约能源,一
般的研究机构在进行中、短期动物实验时常采用此种模式。
大多是利用原有的建筑进行
改造而成的实验动物设施。
相对于双走廊其优点是占用空间小,设施利用率较高,维护
费用低。
缺点为清洁笼具和污染材料之间常常存在污染的危险,走廊相对拥挤。
(图
5-2)。
3双走廊式(DoubleCorridors)是常用的一种实验动物屏障设施类型。
可以有效
分割为清洁区和污染区。
作为屏障设施使用,比较容易控制微生物污染。
缺点是有效利
用面积减少(图5-3)。
2
4.三走廊式(ThreeCorridors)三走廊式压力梯度从中间的洁净走廊、前室、动
物饲养室、污物走廊逐渐降低,是目前常用的动物实验设施。
图5-2单走廊单元
图5-3双走廊单元
第二节实验动物设施的建筑要求
一、选址
为新建实验动物设施选址,可参照GBJ73-84洁净厂房的规范要求。
考虑外部环境
如下因素:
(1)选择大气含尘浓度及化学污染程度较低,自然环境较好的区域(图5-4)。
(2)选址地的空气含菌水平低,可降低设施中微生物污染的风险。
(3)选址地应能保证水电供应,并应有道路到达,交通方便。
(4)选址应远离有严重震动和噪声干扰的铁路、码头、飞机场、交通要道。
(5)设施应布置在院区内环境清洁、人流、货流不穿越或少穿越的地段。
(6)选址应避开自然疫源地。
二、设施面积的分配和布局原则
(1)繁育饲养区和动物实验区分开,各成独立系统,专区(室)专用。
(2)在规模较大的实验动物楼,从微生物控制以及实验动物使用管理方便考虑,应将
低级别实验动物与高级别动物所在的楼层尽量分开。
(3)同等级、且性情亦较温顺的动物可安排在同一套设施或同一楼层内,但对环境易
造成较大影响的动物,如犬会制造巨大噪声,应作特别处理。
3
(4)洁净设施布局设计时,应保证人员、物品和净化空气单向移动,以避免交叉污染。
(5)实施布局要方便日常工作和实验操作,并有足够的空间放置必需物品。
三、实验动物设施的布局
(一)区域布局
1.前区的设置包括办公室、维修室、库房、饲料室和一般走廊。
2.饲育区的设置
(1)繁育、生产区。
包括隔离检疫室、缓冲间、育种室、扩大群饲育室、生产群
饲育室、待发室、清洁物品贮藏室、清洁走廊、污物走廊。
(2)动物实验区。
包括缓冲间、实验饲育间、清洁物品贮藏室、清洁走廊、污物
走廊。
(3)辅助区。
包括仓库、洗刷间、废弃物品存放处理间(设备)、密闭式实验动物
尸体冷藏存放间(设备)、机械设备室、沐浴间、工作人员休息室。
(二)其它设施设置
屏障环境和隔离环境均应在压力变化相交接处设有缓冲设置。
动物实验区的设施应
与饲养繁育系统分开设置。
有关放射性实验操作应参照GB4792实施。
带烈性传染性、
致癌、使用剧毒物质的动物实验,均应在负压隔离设施或有严格防护的设备内操作。
此
类设施(设备)须具有特殊的传递系统,确保在动态传递过程中与外环境的绝对隔离,
排出气体和废物须经无害化处理,应体现“人、动物、环境”的三保护原则。
图5-4实验猴建筑设施
(三)各个分区设施的功能
1.饲养室饲养动物的生存环境,是设施的主体部分,其生产设施应分设有育种
4
室、扩大群饲育室、生产群饲育室、待发室等。
2.隔离检疫室外部引进的动物需隔离1-2周。
3.动物实验室供作动物实验用,如手术室,实验处理室,实验观察室,动物监
测室,大型生产单位应建立包括微生物寄生虫、病理、遗传等项目实验室。
4.洗刷消毒室对饲养用笼具,鼠盒、水瓶等进行清洗和消毒。
不同环境要求不
同,在开放环境里,动物室所用器具可集中洗刷消毒。
楼内饲养动物,应在每层楼设
置洗刷室,房间大小依动物数量而定,房间不宜狭小,应有足够空间堆放待洗刷物品及
消毒后物品,地面有一定坡度并有通畅的排水管道。
笼具清洗后可采用化学消毒,用
1:
200的次氯酸钠溶液消毒效果良好。
在屏障系统里,所用物品必须经高压灭菌后方可
应用,一般使用双扉高压灭菌器,其洗刷消毒后室与动物室相连,物品经灭菌后直接移
入屏障(图5-5)。
5.库房贮存各种消耗品,如饲料、垫料、笼具、用具等,屏障设施内应设清洁
库房(图5-6)。
图5-5消毒室图5-6清洁库房
6.工作人员用房包括办公室、休息室、淋浴室、厕所等。
繁育设施屏障环境每
个单元宜单独设立,淋浴设备包括更衣、淋浴、换消毒衣几个相连的小间,形成一个通
道,不经过此通道不能进入屏障,屏障设施内一般不设卫生间以减少废物。
7.废物处理间废物处理间是实验动物设施中不可缺少的部分,废弃污物包括动物
粪尿污染的垫料、死亡、淘汰及动物实验后的尸体等。
污染垫料应密封运送至专门堆集
场所,做到日清日洗。
尸体装于塑料袋中密封,可先暂存在冰柜内,然后送焚尸炉焚烧。
(四)屏障环境的人流和物流控制
洁净区压力梯度一般遵守:
洁净走廊>动物生产(实验)区>非洁净区顺序的原
则。
清洁区严格地控制微生物的侵入,无论人员、动物、物品和空气都需经过相应的处
理才能进出清洁区,保证屏障内不被污染。
5
人的移动路向:
更衣→淋浴→二次更衣→清洁走廊→饲养室或动物实验室→污染走
廊→外部区域。
物品的移动路向:
物品→高压蒸汽消毒锅(已包装的消毒物品可经传递窗,笼具经
泡有消毒液的渡槽)→清洁准备室→清洁物品储存室→饲养室或动物实验室→污物走廊
→外部区域。
实验动物的移动路向:
外来实验动物→传递窗→检疫室(经检疫后)→清洁走廊→
饲养室或动物实验室→污染走廊(包装)→外部区域。
屏障设施内必须安装空气净化器,过滤空气以除去粉尘土和微生物;过滤脱臭器除
去臭气。
往往将初、中效过滤器和控温、控湿装置集中在一起,每个饲养室设立独立的
高效过滤器,将调控好温、湿度的洁净空气送入动物室。
室内排风口也应装有初效过滤
器。
四、实验动物设施的建筑要求
(一)房间面积
2
地面面积应该在15-20m之间,最小宽度在3m左右,天花板高度至少为2.5m。
门位
于房间狭窄端,沿墙壁长端安置笼具、设备和工作区。
设计上力求多种动物通用。
动物
室和实验室涂料一般可选用草绿色,走廊为灰色,表面平滑、耐磨、耐压、耐酸、碱、盐、
化学溶剂,无渗漏,自流平厚3mm,有一定弹性,使用年限为15年。
(二)地面
平整而不平滑,耐水磨和腐蚀,拐角处做成圆角弧面设计。
地面可采用聚氨酯自流
地坪、卷材加焊地面。
也可采用司米克地板砖拼缝镶嵌深色环氧树脂涂料。
在材料的使
用上要特别注意其放射性指标、采用高级环氧树脂加优质固化剂自流坪,
(三)墙面
外墙首选混凝土、钢筋和砖,其次为空心黏土砖填充墙,内部为土建墙。
也可采用
水泥砂浆墙体,外涂3遍环氧树脂墙漆,表面光滑、平整、无反光、无缝隙、不脱落、耐
冲击、耐腐蚀。
阴阳角均为圆弧形,易于清洗和消毒。
(四)天花板
采用能承重、气密性好、保温性能好优质彩钢板制成。
金属圆踢脚,隔墙与隔墙之
间、隔墙与吊顶之间均有金属圆弧连接件。
(五)无菌水池和地漏
设不锈钢密封式水池,防污染。
地漏为不锈钢特制,可水封,防堵,防回水、回气。
(六)门和窗
门一般情况向内开,在屏障环境内,门向压力高的方面开启(即正压),上面设计观察
窗,门宽不小于1m。
门采用特制铝合金净化门型材制作,耐腐蚀,易清洗。
为工作车过
6
往方便,不设门槛,门下装密封条,气密性好,安装闭门器。
为了防止污染,节约能源,屏障
区一般不设窗。
(七)传递窗和内走廊
传递窗为不锈钢板制作,耐消毒液,内设4个紫外线灯,双门互锁。
走廊宽度不应小于
1.5m。
(八)药液渡槽
用3mm厚不锈钢制作,下设排水开关,上盖可用水密封。
(九)配电及通讯
设施内的配电线暗装,由非洁净区进入洁净区的电气管线、管口应严格密封。
电源插
座带盖,开关均有防水膜。
(十)野鸟和昆虫控制
在门、窗等部位,要有防止野鸟和昆虫进入的设施。
包括纱窗、过滤器或风门片等,
同时在管道系统使用风门片或隔栅,在地面排水口覆盖纱网。
(十一)噪声控制
实验动物对声波的灵敏度和范围比人高,噪音引起动物躁动和惊恐,影响正常生活规
律,影响实验结果。
因此,一是防止外界干扰,远离噪音源;二是对空调及送风设备进行隔
音和消音处理。
第三节实验动物与动物实验环境国家标准
一、国家标准的制定
由于各种环境因素影响动物实验的效果和动物繁育的质量,我国技术监督局1994年
批准颁布了动物实验环境及设施标准(GB/T14925-94)。
2001年又进行了重新修订。
二、2001年版国家标准
国家标准(GB14925—2001)对实验动物和动物实验环境指标做出了详细规定,本
次国标修订的主要特点是:
对环境条件分类作出了调整;区分了动物繁育、生产设施和
动物实验设施的环境指标,并根据不同种类动物的生物学特性,提出不同的环境要求;
新增了各类动物居所密度和动物照度指标;对循环空气的使用提出了具体要求,总之各
项技术指标的制定更为科学合理,操作性加强,具体内容见表5-1至表5-4。
表5—1实验动物繁育、生产设施环境指标(静态)
指标
小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠犬、猴、猫、兔、小型猪鸡
项目
屏障环普通环屏障环
普通环境隔离环境隔离环境屏障环境
境境境
16~2
温度,℃18~2920~2620~2616~28
8
日温差,℃≤-4-44
相对湿度(%)40~70
10~20~510~20~5
换气次数(次/h)8~108~1010~20**
20*0*20*0*
气流速度(m/s)0.1~0.2
20~20~
压强梯度(Pa)-100~150-100~15020~50**
50**50**
空气洁净度,级-10000100-1000010010000
落下菌数(个/皿)≤303无检出303无检出3
3
氨浓度(mg/m)≤14
噪声(dB)≤60
工作照度150~300
照度(lx)
动物照度15~20100~2005~10
昼夜明暗交替时间(h)12/12或10/14
注:
表中氨浓度指标为动态指标。
*一般采用全新风,保证动物室有足够的新鲜空气。
如果先期去除了粉尘颗粒物和有毒有害气体,
不排除使用循环空气的可能,但再循环空气仅限于同一单元,新鲜空气不得少于50%,并保证供风的
温、湿度参数。
**单走廊设施必须保证饲育室、实验室压强最高。
***此处动物实验设备系指动物饲养和实验时,保障动物所处的局部环境应达到本环境指标的设备。
8
表5—2动物实验设施(设备***)环境指标(静态)
指标
项目小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠犬、猴、猫、兔、小型猪鸡
普通环境屏障环境隔离环境普通环境屏障环境隔离环境隔离环境
温度(℃)19~2620~2516~2618~2216~26
日温差(℃)≤43433
相对湿度(%)40~70
换气次数(次/h)8~1010~20*20~50*8~1010~20*20~50*20~50*
气流速度(m/s)0.1~0.2
压强梯度(Pa)-20~50**100~150-20~50**100~150**100~150
空气洁净度(级)-10000100-10000100100
落下菌数(个/皿)≤303无检出303无检出无检出
3
氨浓度(mg/m)≤14
噪声(dB)≤60
工作照度150~300
照度(lx)
动物照度15~20100~2005~10
昼夜明暗交替时间(h)12/12或10/14
注:
表中氨浓度指标为动态指标。
*一般采用全新风,保证动物房有足够的新鲜空气。
如果先期去除了粉尘颗粒物和有毒有害气体,
不排除使用循环空气的可能,但再循环空气应取自于无污染区域或同一单元,新鲜空气不得少于50%,
并保证供风的温、湿度参数。
**单走廊设施必须保证饲育室、实验室压强最高。
***此处动物实验设备系指动物饲养和实验时,保障动物所处的局部环境应达到本环境指标的设备。
表5-3各类动物所需居所最小空间
小鼠(g)大鼠(g)豚鼠(g)地鼠(g)
项目
<20>20<150>150<350>350<100>100
2
单养(m)0.00650.010.0150.0250.030.0650.010.012
2
群养(m)(母+同窝仔)0.0160.080.09/只0.09
最小高度(m)0.130.150.180.180.180.220.180.18
表5-4各类动物所需居所最小空间(续)项目
兔(kg)猫(kg)犬(kg)猴(kg)小型猪(kg)鸡(kg)
项目<2.10-2
<2.5>2.5>2.5<10>20<44-6>6<20>20<2>2
50
单养
0.200.460.280.370.601.01.50.50.60.750.961.20.120.15
2
(m)
群养
0.93(母+同窝仔)----
2
(m)
最小高
度0.400.450.76(栖木)0.80.91.50.60.70.80.60.80.40.6
(m)
9
第四节动物设施中的主要设备
(一)空气净化系统设备
空调机房设计时要考虑节能、环保等的特殊要求,确保设施运转后,能耗较低,同时
应有足够的运行可靠性,必须保证无论设施出现何种情况,都有方法或措施避免设施停
止运行或者使其影响降低到最低限度。
设施利用全新风系统,有初、中、亚高、高效滤
材对气流进行处理,确保空气净化,所有机组都一备一用,配备一定功率的发电机组,确
保送、排风机组任何时间都能运转。
屏障系统内必须安装空气净化器,过滤空气以除去粉尘土和微生物;过滤脱臭器除
去臭气。
将初、中效过滤器和控温、控湿装置集中在一起,每个饲养室设立独立的高效
过滤器,将调控好温度、湿度的洁净空气送入动物室。
室内排风口也应装有初效过滤器。
根据过滤的效果分为以下初效过滤器、中效过滤器和高效过滤器装置。
初效过滤器主要
阻挡10μm以上的异物或尘粒。
中效过滤器主要阻挡1-10μm的悬浮性尘粒。
高效过
滤器(或亚高效过滤器)主要阻挡粒径在1μm以下的尘粒(表5-5)。
表5-5各种空气过滤器性能
适应粉尘过滤效
分类形式压力损失保养方法适应范围
粒径(μm)率(%)
除去粗尘或保护
低效过滤器无纺织布5以上70-903-20水洗
中、高效过滤器
棉纤维或
医药、食品工厂、
玻璃纤维更换
中效过滤器1以上40-958-25医院维持清洁度
的袖珍单滤器
用的最终过滤器
元式
亚高效亚高效过更换低水平的清洁房
1以下95以上15-25
过滤器滤器单元间
更换
超HEPA99.99以无菌动物隔离器
高效过滤器1以下25-50单元
过滤器上等
普通级动物房应有通风设备,以保证换气次数的要求,其它级别要安装净化通风设
备。
一般是顶送风(图5-7),四角回风,注意减少涡流。
二、电源、照明、通讯设备
设有报警器和故障显示装置。
清洁级以上动物应用备用电源,以保证不间断供电,
凡没有双路供电能力的单位,应安装备用发电机。
普通动物室的照明度分为工作照度和动物照度。
工作照度150-300lx,采用特制嵌
入式净化灯,进口镜面铝反光罩,有机透明灯片。
工作照明开关在清洁走廊和污物走廊双
控。
图5-7空气流通图5-8无菌水生产系统
动物照度依动物类别不同,啮齿类动物只需15-20lx;犬、猴、猫、兔、小型猪
100-200lx。
对无采光房间,设置明暗各12h的自动动物照度明暗开关。
紫外线灯与工
作照明连锁,并集中控制,防止对工作人员造成伤害,工作后启动自动消毒30min以上。
由于实验动物设施的特殊性,人员进入后内外联系非常重要。
安装电话程控交换机,
分设在洁净区内各室、洁净走廊,与洁净区外部相通。
三、安全和报警系统
为了加强管理,在屏障区内每个房间、走廊都设置了摄象机,可以对内部操作管理进
行检查、指导,对动物实验操作和实验期间的动物反应进行观察和录像,也方便教学、学
习和参观。
实验动物设施要求全天24h不能停止送风,如果停电或出现故障,不能及时发现和
处理,很可能造成设施污染和动物死亡,造成重大损失。
因此在中央控制室设置风机故障
报警,温湿度、压差异常报警及闭门报警系统,保证设施运行的安全。
四、消毒与灭菌设备
(一)压力蒸气灭菌器
洁净动物设施使用的物料均应经过消毒灭菌。
双扉压力蒸气灭菌器的主体跨过屏障
墙,并有两个门,一个开启在非洁净空间内,物料由此门进入作蒸汽灭菌;另一个门开
启在洁净控制区内,灭菌后的物料可从中取出使用。
一些大型的双扉压力蒸气灭菌器可
对笼具甚至笼架作灭菌处理。
而不耐高温高压和(或)不能水浸的物料,则可通过渡槽
或传递窗进入洁净区。
(二)渡槽
渡槽是内放消毒药液的水槽,在非洁净区及洁净区各开一口,不耐高温高压的器
械物料从非洁净区一侧放入,浸泡消毒后从洁净区取出使用。
(三)无菌水生产系统
大型实验动物设施耗用大量无菌水,须安装无菌水生产系统。
这种系统通常先以超
滤膜滤去0.5μm以上的悬浮微粒,可滤去细菌和真菌,然后以紫外线照射,可杀灭病
毒,并进一步杀灭细菌和真菌,获得净化水(图5-8)。
实验动物的饮用水无需蒸馏、离子交换等,这样更有利于动物对微量元素的需求。
五、微生物控制设备与饲养设备
(一)隔离器
隔离器能有效防止传染性病原微生物的扩散,不仅为隔离器中的动物提供屏障,同
时保护感染设施内的大环境不被有害微生物污染。
隔离器通常包括容易折叠的膜式隔离
器和硬壁隔离器。
最早的硬壁是不锈钢材料,现在采用透明的聚碳酸酯材料。
薄膜式隔
离器主要由塑料薄膜室、橡胶皮手套、过渡仓、空气过滤器、操作台(架)、内帽、外帽、
空气压缩机、喷枪、灭菌罐、连接袖、黏胶带、橡皮圈、气压计、风机等组成。
聚乙烯
薄膜室是隔离器主体部分,是实验动物的饲育区。
隔离器内的操作都要经过橡胶长袖手
套进行,笼具、饲料、垫料、饮用水及必要的仪器设备经严格灭菌后送入隔离器中(图
5-9)。
图5-9P3实验室隔离器
(二)独立通风换气笼盒
随着科学技术的发展,饲养大、小鼠的笼具经历了木盒、陶罐、金属笼盒、塑料盒
四个阶段。
20世纪80年代,意大利Theniplas公司,在带空气过滤帽的塑料盒的盒帽
上加了一个进风口,希望促进盒内的通风换气,从而出现了第一个独立通风换气笼盒
(IndividuallyVentilatedCages,I