MMFSCNG食品添加剂酪蛋白酸钠.docx
《MMFSCNG食品添加剂酪蛋白酸钠.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《MMFSCNG食品添加剂酪蛋白酸钠.docx（19页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。
MMFSCNG食品添加剂酪蛋白酸钠
MM_FS_CNG_0484食品添加剂酪蛋白酸钠
MM_FS_CNG_0484
食品添加剂酪蛋白酸钠
1.适用范围
本方法适用于以鲜奶脱脂，用酸点制的凝乳或由干酪素经氢氧化钠或碳酸钠处理，干燥制得的产品。
在食品工业上做乳化、增稠用。
2.技术要求
.外观和感官要求
本品为乳白色粉末，无嗅、无味。
.项目和指标
项目
指标
蛋白质（以干基计），％
≥
脂肪，％
≤
乳糖，％
≤
灰分，％
≤
水分，％
≤
pH值
～
砷（以As计），％
≤
重金属（以Pb计），％
≤
细菌总数，个／g
≤
30
大肠菌群，个／100g
≤
40
致病菌
不得检出
3.试验方法
.外观和感官检查
目视法观察其颜色，嗅其味。
.理化试验
鉴别
.溶解性：
缓慢分散于水，稍有混浊，可溶于沸水，不溶于乙醇。
.灼烧试验：
取样品灼烧时冒烟，并发出特异的臭气，所余残渣溶于水，对石蕊试纸呈碱性。
.沉淀反应：
取样品，溶于10mL1mol／L氢氧化钠溶液中，加乙酸使成弱酸性，产生白色絮状沉淀。
.颜色反应
取样品，溶于10mL1mol／L氢氧化钠溶液中，加1滴％硫酸铜溶液，摇匀，产生蓝色沉淀，液体呈紫色。
取样品，加水5mL，摇匀，加10滴％硝酸汞溶液和1滴10％亚硝酸钠溶液，在水浴中加热3min，膨润后在样品表面呈现褐红-紫红色。
蛋白质
.试剂
硫酸；
硫酸铜；
硫酸钾；
硼酸：
4％溶液；
氢氧化钠：
30％溶液；
蔗糖；
盐酸：
／L（）标准溶液；
混合指示液：
％的甲基红乙醇溶液（95％，V／V）和％的甲烯蓝（次甲基蓝）乙醇溶液（95％，V／V）等体积混合。
.试验程序
称取样品（准确至），置于500mL凯氏烧瓶中，然后加入约15g无水硫酸钾、硫酸铜和20mL硫酸，摇匀后，于瓶口放一小漏斗，使瓶倾斜成约45°角，置于有小圆孔的石棉板上，小火加热，待内容物全部炭化并停止起泡后，加大火力，保持瓶内液体微沸，直至液体呈蓝绿色，澄清透明，并使整个加热沸腾时间保持90min，在加热期间应注意摇动烧杯避免过热。
样品消化后，冷却至室温，小心加约200mL水混合并再次冷却至室温。
向500mL锥形瓶中加入4％硼酸溶液50mL和4滴混合指示液，混匀，将锥形瓶置冷凝管下并使其出口端浸入硼酸溶液中，用量筒向凯氏烧瓶中加30％氢氧化钠溶液80mL，在此期间应将烧瓶保持倾斜，并使氢氧化钠溶液沿壁流入形成一底层，立即将凯氏烧瓶与冷凝管相连，用小火加热煮沸蒸馏避免起泡，使大约在30min内收集150mL馏出液，此馏出液的温度应在25℃以下，在蒸馏结束前2min移动锥形瓶，使冷凝管口离开液面，用少量蒸馏水冲洗管口，停止加热，并将洗涤水收集在锥形瓶内，用／L标准盐酸进行滴定。
按上述方法不加样品改加蔗糖进行空白试验。
.计算
X＝
100×（V1－V2）×C×
×
…………………………
（1）
m（100－A）
式中：
X——蛋白质的含量（以干基计），％；
V1——滴定样品消耗标准盐酸溶液的体积，mL；
V2——滴定空白消耗标准盐酸溶液的体积，mL；
C——标准盐酸摩尔浓度，mol／L；
m——样品的质量，g；
A——样品中水分的含量，％；
平行试验结果的允许误差为％。
脂肪
.试剂
稀盐酸：
取盐酸27mL，加水稀释至40mL；
无水乙醇；
乙醚；
石油醚。
.仪器和设备
骆立氏脂肪浸油管。
.试验程序
取充分混匀的样品（准确至），置于50mL烧杯中，加15mL稀盐酸，小心加热溶解，静置冷却后加10mL乙醇，小心转移至骆立氏脂肪浸油管中，加25mL乙醚剧烈振摇1min，然后加25mL石油醚，振摇30s，放置分层后从侧管放出上面液层，用干燥滤纸过滤，将滤液置已知重量的烧杯中，再用乙醚15mL及石油醚15mL重复提取2次，把上层液体合并到前面的烧瓶中，在水浴上蒸去乙醚及石油醚，其残留物在98～100℃干燥4h后称量。
.计算
X1＝
m1－m0
×100
……………………………………
（2）
m2
式中：
X1——脂肪的含量，％；
m1——烧瓶和脂肪的质量，g；
m0——烧瓶的质量，g；
m2——样品的质量，g。
平行试验结果允许误差为％。
乳糖
.试剂
盐酸：
／L；
冰乙酸：
10％（m／V）溶液；
乙酸钠：
1mol／L；
苯酚：
80％（m／m）溶液，取8g苯酚和2g水混合加热混匀；
硫酸；
乳糖：
％（m／V）溶液，称量±一水乳糖（相当于无水乳糖），置于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀于0℃保存。
.试验程序
称取充分混匀的样品1g（准确至2g），置于100mL锥形瓶中，加25mL水，置60～70℃水浴上，使其完全溶解（一般约10～15min），冷却后再加15mL水，／L盐酸溶液8mL和10％乙酸溶液1mL（每加一种溶液后应充分混匀）静置5min，再添加1mol／L乙酸钠溶液1mL，混匀，使酪蛋白迅速下沉，用干滤纸过滤，弃去最初几毫升滤液后收集滤液。
用移液管吸取滤液，置于50mL烧杯中，再用微量移液管添加80％苯酚溶液，置磁力搅拌器上混匀，并在1s内加入5mL浓硫酸，使充分混匀，静置15min后在20℃水浴中冷却5min，用空白溶液作对比，在490nm处测定溶液的吸光度。
若吸光度超出标准曲线的上限，则取适当稀释的2mL滤液重复上述操作（注意：
若用稀释滤液，则计算公式需相应变动）。
.空白溶液的制备
不进行样品的溶解和过滤等操作，其余均按上述样品的测定，用同一仪器设备和同样数量的试剂，进行同样的操作制得空白溶液。
.标准曲线的制作
吸取％乳糖溶液10mL，置100mL容量瓶中，用水稀释至刻度（溶液A），取A液1mL、2mL和3mL分别置3个100mL容量瓶中，并用水稀释至刻度以制备3种标准溶液，所得标准溶液的无水乳糖浓度分别为20、40和60μg／mL。
取4个50mL烧杯，向其中3个分别加入以上三种标准溶液各2mL，向第4个加2mL水，然后按样品滤液的测定方法进行同样操作，最后用第4个作为参比液测定其他三种标准的吸光度，并以吸光度对无水乳糖液的浓度（μg／mL）作图。
.计算
X2＝
C1×50
×100
………………………………………（3）
m3×106
式中：
X2——样品的乳糖含量（以无水乳糖计），％；
C1——由标准曲线查得的样品溶液中无水乳糖浓度；
m3——样品的质量，g。
平行试验结果的允许误差为％。
水分
.试验程序
称取样品2g（准确至），置于102±1℃下干燥3h，冷却，称重，反复至恒重。
.计算
X3＝
m4－m5
×100
………………………………………（4）
m4－m6
式中：
X3——水分的含量，％；
m4——称量瓶和样品的质量，g；
m5——称量瓶和样品干燥后的质量，g；
m6——称量瓶的质量，g。
平行试验结果的允许误差为％。
灰分
.试验程序
称取样品约1g（准确至），置于已干燥恒重的瓷坩埚内，先置电炉上炭化，再于高温炉内维持温度825±25℃，完全灰化至恒重。
.计算
X4＝
m7－m8
×100
………………………………………（5）
m9－m8
式中：
X4——灰分的含量，％；
m7——坩埚和灰分的质量，g；
m8——坩埚的质量，g；
m9——坩埚和样品的质量，g。
平行试验结果的允许误差为％。
值
取样品1g，加水稀释至50mL，在温度约20℃时，用酸度计测定。
砷砷斑法
.原理概要
在碘化钾和氯化亚锡存在下，将样品液中的高价砷还原为三价砷，三价砷与锌粒和酸产生的新生态氢生成砷化氢气体，通过乙酸铅棉花除去硫化氢干扰，再与溴化汞试纸生成黄色至橙色的色斑，与标准砷斑比较作限量试验。
.主要试剂与仪器
.1.主要试剂
硝酸、硫酸、盐酸；
硫酸（1mol/l）溶液：
量取28mL浓硫酸，慢慢加入水中，用水稀释到500mL；
氧化镁、三氯甲烷、吡啶、无砷金属锌；
20％氢氧化钠溶液；
15％硝酸镁溶液；
15％碘化钾溶液（临用前配制，贮于棕色瓶内）；
40％氯化亚锡溶液：
称取20g氯化亚锡（SnCl2·2H2O），溶于50mL盐酸中；
乙酸铅棉花：
将脱脂棉浸于10％乙酸铅溶液中，2h后取出晾干；
吸收液A：
称取二乙氨基二硫代甲酸银，研碎后用适量三氯甲烷溶解，加入三乙醇胺，再用三氯甲烷稀释至100mL。
静置后过滤于棕色瓶中，贮存于冰箱内备用；
吸收液B：
称取二乙氨基二硫代甲酸银，研碎后用吡啶溶解，并用吡啶稀释至100mL。
静置后过滤于棕色瓶中，贮存于冰箱内备用。
1％酚酞乙醇溶液；
砷标准溶液：
称取于硫酸干燥器中干燥至恒重的三氧化二砷（As2O3）），溶于5mL20％氢氧化钠溶液中。
溶解后，加入25ml1mol/l硫酸，移入1L容量瓶中，加新煮沸冷却的水稀释至刻度。
此溶液相当于砷。
临用前取，加1mL1mol／L硫酸于100mL容量瓶中，加新煮沸冷却的水稀释至刻度。
此溶液相当于μg砷。
溴化汞试纸：
将剪成直径2cm的圆形滤纸片，在5％溴化汞乙醇溶液中浸渍1h以上，保存于冰箱中，临用前取出置暗处阴干备用。
.2.仪器
测砷装置：
见图2
100ml锥形瓶；
橡皮塞：
中间有一孔；
玻璃测砷管：
全长18cm，上粗下细，自管口向下至14cm一段的内径约为，自此以下逐渐狭细，末端内径约为（1～3）mm，近末端1cm处有一孔，直径2mm，狭细部分紧密插入橡皮塞中，使下部伸出至小孔恰在橡皮塞下面。
上部较粗部分装入乙酸铅棉花，长（5～6）cm，上端至管口处至少3cm，测砷管顶端为圆形扁平的管口，上面磨平，下面两侧各有一钩，为固定玻璃帽用；
图2
1—锥形瓶；2—橡皮塞；3—测砷管；
4—管口；5—玻璃帽
玻璃帽：
下面磨平，上面有弯月形凹槽，中央有圆孔，直径。
使用时将玻璃帽盖在测砷管的管口，使圆孔互相吻合，中间夹一溴化汞试纸，用橡皮圈或其他适宜的方法将玻璃帽与测砷管固定。
.过程简述
.1.样品处理
干灰化法：
本法用于不适合于湿法消解的样品。
称取样品1g（准确至），于瓷坩埚中，加10mL15％硝酸镁溶液，再于上面覆盖1g氧化镁粉末，混匀，浸泡4h，于低温或置水浴上蒸干，用小火加热至炭化完全，将坩埚移至高温炉中，在550℃以下灼烧至灰化完全，冷却后取出，加适量水湿润灰分，再缓缓加入盐酸（1＋1）溶液至酚酞红色褪去，然后将溶液移入50mL容量瓶中（必要时过滤），用少量水洗涤坩埚3次，洗液并入容量瓶中，加水至刻度，混匀。
每10mL样品液相当于样品。
取相同量的氧化镁，硝酸镁，按上述方法做试剂空白试验。
.2.测定
吸取一定量的样品液和砷的限量标准液（含砷或μg），分别置于锥形瓶中，加5mL盐酸（样品
液中如含硫酸或盐酸，则要减去样品液中所含酸的毫升数），加水至30mL，再加5mL15％碘化钾溶液，5滴40％氯化亚锡溶液，混匀，室温放置10min。
向上述锥形瓶中，各加入3g无砷金属锌，并立即塞上预先装有乙酸铅棉花及溴化汞试纸的测砷管，于25℃放置1h，取出砷斑进行比较，样品的砷斑不得深于砷的限量标准的砷斑。
若样品经处理，则砷的限量标准也须同法处理。
重金属
.原理概要
在弱酸性（pH3～4）条件下，试样中的重金属离子与硫化氢作用，生成棕黑色，与同法处理的铅标准溶液比较，做限量试验。
.主要试剂和仪器
.1主要试剂
硝酸、硫酸、盐酸\氨水；
6mol／L盐酸：
量取50mL盐酸，用水稀释至100mL；
1mol／L盐酸：
量取盐酸，用水稀释至100mL；
6mol／L氨水：
量取40mL氨水，用水稀释至100mL；
1mol／L氨水：
量取氨水，用水稀释至100mL；
的乙酸盐缓冲液：
称取乙酸铵溶于25mL水中，加45mL6mol／L盐酸，用稀盐酸或稀氨水调节pH值至，用水稀释至100mL；
酚酞指示液：
1％乙醇溶液；
饱和硫化氢水：
将硫化氢气体通入不含二氧化碳的水中，至饱和为止（此溶液临用前制备）；
铅标准溶液：
称取高纯硝酸铅，溶于10mL1％硝酸中，定量移入100mL容量瓶中，用水稀释至刻度。
此溶液1mL相当于铅。
临用前用水稀释100倍，使成相当于10μg铅；
1％硝酸：
取1mL硝酸加水稀释至100mL。
.2.仪器
50mL纳氏比色管；
所用玻璃仪器需用（10～20）％硝酸浸泡24h以上，用自来水反复冲洗，最后用水冲洗干净。
.过程简述
.1.样品处理
一般样品可直接按“测定”进行测定，如A管的色度深于C管的色度，应先经样品处理。
..干法消解：
本法适用于不适合用湿法消解的样品。
称取样品2g（准确至），置于坩埚中，加入适量硫酸浸润样品，小火炭化后，加2mL硝酸和5滴硫酸，小心加热，直到白色烟雾挥尽，移入高温炉中，于550℃灰化完全，冷却后取出，加2mL6mol／L盐酸湿润残渣，于水浴上慢慢蒸发至干。
用1滴浓盐酸湿润残渣，并加10mL水，于水浴上再次加热2min，将溶液移入50mL容量瓶中，如有必要须过滤，用少量水洗涤坩埚和滤器，洗滤液一并移入容量瓶中，混匀，每10mL该溶液相当于样品。
在样品灰化同时，另取一坩埚，按上述方法做试剂空白试验。
.2测定
A管：
吸取含铅量相当于指定的重金属限量的铅标准溶液（不低于10μg铅）于50mL纳氏比色管中（如样品经处理，须同时吸取与样品液等量的试剂空白液），加水至25mL，混匀，加1滴酚酞指示液，用稀盐酸或稀氨水6mol／L或1mol／L调节pH至中性（酚酞红色刚褪去），加入的乙酸盐缓冲液5mL，混匀，备用。
B管：
取一支与A管所配套的纳氏比色管，加入（10～20）mL（或适量）样品液，加水至25mL，混匀，加1滴1％酚酞指示液，用稀盐酸或稀氨水6mol／L或1mol／L调节pH至中性（酚酞红色刚褪去），加入的乙酸盐缓冲液5mL，混匀，备用。
c管：
取一支与A、B管所配套的纳氏比色管，加入与B管等量的相同的样品液，再加入与A管等量的铅标准溶液，加水至25mL，混匀，加1滴1％酚酞指示液，用稀盐酸或稀氨水（6mol／L或1mol／L）调节pH至中性（酚酞红色刚褪去），加入的乙酸盐缓冲液5mL，混匀，备用。
向各管中加入10mL新鲜制备的硫化氢饱和液，并加水至50mL刻度，混匀，于暗处放置5min后，在白色背景下观察，B管的色度不得深于A管的色度，C管的色度应与A管的色度相当或深于A管的色度。
.微生物检验
细菌总数：
见附录1。
大肠杆菌：
见附录2。
致病菌：
按GB～进行测定。
4.验收规则
.本产品应由生产质量检验部门进行检验，生产厂应保证所有出厂的产品均符合本标准的要求。
每批出厂的产品都应附有质量证明书。
.使用单位可按照本标准规定的检验规则和试验方法，对所收到的产品进行检验。
.取样方法：
应从每批件数的10％中选取试样，小批时不得少于三件，每件取出的样品不少于100g，迅速将所选取的样品混匀，取化验所需的三倍量进行化验分析。
.如果检验中有一项指标不符合本标准时，应重新自二倍量的包装中选取样品进行核验，产品重新检验的结果，即使只有一项指标不符合本标准要求时，则整批不能验收。
.如供需双方对产品质量发生异议时，应由仲裁单位进行仲裁。
5.标志、包装、运输、贮存
.本产品分20kg和5kg二种包装。
.每种包装，均先将产品装入食品用聚乙烯袋，封口，外套塑料编织袋，并注明“食品添加剂”字样、产品名称、商标、批号、净重、生产日期及生产厂名称。
.装卸运输时应防止日晒雨淋，轻拿轻放，禁止与有毒物品混装、混运，一起堆放。
.本品应贮存于阴凉、干燥的地方，并垫离地面10cm以上避免受潮受热。
.本品保质期半年。
6.来源：
GB10797—89
附录1食品卫生微生物学检验菌落总数测定
1.适用范围
本方法适用于食品中菌落总数的测定。
2.主要仪器和试剂
.仪器
温箱（36±1℃）、冰箱（0～4℃）、恒温水浴：
46±1℃、灭菌刀或剪子与镊子。
电炉、放大镜、菌落计数器、均质器或乳钵、、平皿（直径为90mm）。
广口瓶或三角瓶（容量为500mL）、玻璃珠（直径约5mm）。
.主要试剂
营养琼脂培养基；
磷酸盐缓冲稀释液；
生理盐水、75％乙醇。
3.检验程序
菌落总数的检验程序如下：
4.过程简述
.检样稀释及培养
以无菌操作，将检样25g（或25mL）剪碎放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1:
10的均匀稀释液。
固体检样在加入稀释液后，最好置均质器中以8000～10000r/min的速度处理1min，做成1:
10的均匀稀释液。
用1mL灭菌吸管吸取1:
10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液），振摇试管，混合均匀，做成1:
100的稀释液。
另取1mL灭菌吸管，按上条操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1mL灭菌吸管。
根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。
稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基（可放置于46±1℃水浴保温）注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀。
同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。
待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h。
.菌落计数方法
做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。
在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
.菌落计数的报告
平板菌落数的选择
选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。
一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。
平皿内如有链状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链，可视为一个菌落；如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。
稀释度的选择
.应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之（见表中例1）。
.若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视两者之比如何来决定。
若其比值小于或等于2，应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数字（见表中例2及3）。
.若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表中例4）。
.若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表中例5）。
.若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之（见表中例6）。
.若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表中例7）。
菌落数的报告
菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。
为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示（见表中“报告方式”栏）。
稀释度选择及菌落数报告方式
例次
稀释液及菌落数
两稀释液之比
菌落总数个/g或mL
报告方式个/g或mL
10-1
10-2
10-3
1
多不可计
164
20
—
16400
16000或×104
2
多不可计
295
46
37750
38000或×104
3
多不可计
271
60
27100
27000或×104
4
多不可计
多不可计
313
—
313000
310000或×105
5
27
11
5
—
270
270或×102
6
0
0
0
—
<1×10
<10
7
多不可计
305
12
—
30500
31000或×104
附录2食品卫生微生物学检验大肠菌群测定
1.适用范围
本方法适用于食品中大肠菌群的测定。
2.主要设备和材料
温箱（36±1℃）、冰箱（0～4℃）、恒温水浴（±℃）、天平、显微镜；
均质器或乳钵、载玻片、平皿（直径为90mm）、玻璃珠（直径约5mm）、玻璃仪器
3.主要试剂
乳糖胆盐发酵管；
伊红美蓝琼脂平板；
乳糖发酵管；
EC肉汤；
磷酸盐缓冲稀释液；
生理盐水；
革兰氏染色液。
4.检验程序
大肠菌群检验程序如下：
5．过程简述
.检样稀释
以无菌操作将检样25mL（或g）放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内予置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1:
10的均匀稀释液。
固体检样最好用均质器，以8000～10000r/min的速度处理1min，做成1:
10的均匀稀释液。
用1mL灭菌吸管吸取1:
10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1:
100的稀释液。
另取1mL灭菌吸管，再做10倍递增稀液，每递增稀释一次，换1支1mL灭菌吸管。
根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种3管。
乳糖发酵试验
将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1mL以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1mL及1mL以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。
每一稀释度接种3管，置36±1℃温箱内，培养24±2h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，则按下列程序进行。
.分离培养
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃温箱内，培养18～24h，然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。
.证实试验
在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1～2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36±1℃温箱内培养24±2h，观察产气情况。
凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。
.报告
根据证实为大肠菌群阳性管数，查MPN检索表，报告每100mL（g）大肠菌群的MPN值。
6.粪大肠菌群
.用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物（见条）转种于EC肉汤管内，置±℃水浴箱内（水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面），培养24±2h，经培养后，如所有EC肉汤管均不产气，则可报告为阴性；如有产气者，则将所有产气的EC肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃培养18～24h，凡平板上有典型菌落者，则证实为粪大肠菌群阳性。
.结果报告
根据证实为粪大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告每100mL（g）粪大肠菌群的MPN值。
大肠菌群最可能数（MPN）检索表
阳性管数
MPN100mL（g）
95％可信限
1mL（g）×3
（g）×3
0．01mL（g）×3
下限
上限
0
0
0
<30
<5
90
0
0
1
30
0
0
2
60
0
0
3
90
0
1
0
30
<5
13
升级会员 