微生物实训教案.docx
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微生物实训教案
苏州农业职业技术学院教案
教师姓名
刘文如
授课时数
6
授课形式
实训
授课班级
农业环保11-1
授课日期
节次
环境监测11-1
授课日期
节次
环境工程11-1
授课日期
节次
环境监测11-2
授课日期
节次
城环11-1
授课日期
节次
授课章节
名称
实训一 马铃薯葡萄糖琼脂培养基的配制
教学目标
掌握马铃薯葡萄糖琼脂培养基的配制步骤
了解马铃薯葡萄糖琼脂培养基的适用菌种
教学重点
马铃薯葡萄糖琼脂培养基的配制过程
教学难点
无
更新、补充及删节
内容
无
使用教具
微生物实验室
课外作业
实验报告；每组上交一份培养基
课后体会
授课主要内容或板书设计
实训一、马铃薯葡萄糖琼脂培养基的配制
一、实训目的：
掌握马铃薯葡萄糖琼脂（PotatoDextroseAgar）培养基的配制原理和过程
二、实训材料及用具
1、材料与试剂：
马铃薯100g、蔗糖10g、琼脂10g、H2O500ml、pH值自然
2、仪器与用品：
天平、高压蒸汽灭菌锅、搪瓷杯、量杯、玻棒、锥形瓶、药匙、称量纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、报纸等。
三、实训步骤
1、称取所需去皮马铃薯100g，切成小块，置于搪瓷杯中，再加入500ml水，小火煮沸30min，用纱布过滤，补足失水，即制成20%马铃薯浸汁；
2、称取10g蔗糖加入马铃薯浸汁，煮沸后加入10g琼脂，继续加热溶化，补足失水；
3、分装：
将完全融化后的液体平均分装在4个锥形瓶中，并加塞、包扎；
4、0.1MPa高压蒸汽灭菌20min。
5、将已经灭菌的培养基放在370C恒温箱中培养24h，观察灭菌是否彻底。
四、作业
每组上交一份已经灭菌的马铃薯琼脂培养基。
注：
马铃薯葡萄糖琼脂培养基主要适用于酵母、霉菌检测的培养基。
苏州农业职业技术学院教案
教师姓名
刘文如
授课时数
6
授课形式
实训
授课班级
农业环保11-1
授课日期
节次
环境监测11-1
授课日期
节次
环境工程11-1
授课日期
节次
环境监测11-2
授课日期
节次
城环11-1
授课日期
节次
授课章节
名称
实训二 牛肉膏蛋白胨培养基的配制
教学目标
掌握牛肉膏蛋白胨培养基的配制步骤
了解牛肉膏蛋白胨培养基的适用菌种
教学重点
牛肉膏蛋白胨培养基的配制步骤
教学难点
无
更新、补充及删节
内容
牛肉膏蛋白胨培养基的适用菌种
使用教具
微生物实验室
课外作业
实验报告，每组上交一份培养基
课后体会
授课主要内容或板书设计
实训二、牛肉膏蛋白胨培养基的配制
一、实训目的：
掌握牛肉膏蛋白胨（Nutrient Agar）培养基的配制原理和过程。
二、实训材料及用具
1、材料与试剂：
牛肉膏1.5g、蛋白胨5g、琼脂10g、Nacl2.5g、H2O500ml、pH7.4～7.6。
1mol/lNaOH、1mol/lHCl。
2、仪器与用品：
天平、高压蒸汽灭菌锅、搪瓷杯、量杯、玻棒、锥形瓶、药匙、称量纸、pH精密试纸（pH值5.0～9.0）、电炉、记号笔、棉花、纱布、线绳、报纸等。
三、实训步骤
1、称量及溶化按培养基配方逐一称取牛肉膏蛋白胨等营养成分依次加入搪瓷杯中，再加定量无菌水，用玻棒搅匀，加热溶解，待全部溶解后，䃼足失水。
注意：
在加热溶解时要不断搅拌，避免琼脂糊底烧焦。
2、调节pH值 用精密pH试纸测培养基的pH值，按pH值的要求用1mol/lNaOH或1mol/lHCl调整到所需的pH值，边加边搅拌，并随时有pH试纸测试其pH值。
3、分装：
将培养基分装于3个锥形瓶中（注意防止培养基沾污瓶口，避免浸湿棉塞引起杂菌污染）、加塞、包扎。
4、高压蒸汽灭菌0.1MPa灭菌20min。
5、将已经灭菌的培养基放在370C恒温箱中培养24h，观察灭菌是否彻底。
四、作业
每组上交一份已经灭菌的马铃薯琼脂培养基。
注：
牛肉膏蛋白胨培养基用于食品、奶制品及水中细菌总数的测定。
苏州农业职业技术学院教案
教师姓名
刘文如
授课时数
4
授课形式
实训
授课班级
农业环保11-1
授课日期
节次
环境监测11-1
授课日期
节次
环境工程11-1
授课日期
节次
环境监测11-2
授课日期
节次
城环11-1
授课日期
节次
授课章节
名称
实训三 干热灭菌和湿热灭菌
教学目标
掌握干热灭菌和湿热灭菌的原理和操作过程
教学重点
干热灭菌和湿热灭菌的原理和操作过程
教学难点
湿热灭菌的原理和操作过程
更新、补充及删节
内容
消毒与灭菌的区别，常见的消毒方法
使用教具
微生物实验室
课外作业
对自己所配的培养基和所需的培养基皿进行灭菌
课后体会
授课主要内容或板书设计
实训三、干热灭菌和湿热灭菌
一、实训目的
掌握干热灭菌和湿热灭菌的原理和方法
二、实训内容
1、干热灭菌：
干热灭菌主要指火焰灼烧法和干热空气灭菌法。
将已包装好的培养皿、移液管、试管及其他玻璃器皿放入恒温箱中，关好恒温箱门，打开电源，将温度设定为1600C，等温度上升到1600C后，维持2h，然后把恒温箱的调节旋钮调回零处，等温度降到500C左右，才可将物品取出。
注意：
灭菌时温度不得超过1700C，以免包装纸烧焦；灭菌好的器皿就保存好，切勿弄破包装纸，否则会染菌。
2、湿热灭菌：
（1）高压蒸汽灭菌：
此法是将物品放在密闭的高压蒸汽灭菌锅内灭菌。
在密闭的系统中，蒸汽压力升高，温度也随着升高，加之热蒸汽穿透力强，可迅速引起蛋白质凝固变性，从而起到杀菌的目的。
目前高压蒸汽灭菌已成为湿热灭菌法中效果最佳、应用最广的一种灭菌方法，适用于培养基、工作服、生理盐水等缓冲溶液玻璃器皿等的灭菌。
常采用0.105MPa气压、1210C灭菌15～30min，时间的长短可根据灭菌物品的种类和数量的不同而有所变化，对体积大、热传导性差的物品，加热时间应当适当长延长。
过程：
a、向高压灭菌锅内加水到适当水位；b、将欲灭菌的培养基放入锅内，盖严；c、打开放气阀，关闭安全阀，将压力旋钮调到0.1MPa，定时器调到20min；d、打开电源加热，待锅内冷气都排出后，关闭放气阀；
（2）常压蒸汽灭菌：
将灭菌培养基放入灭菌器内，每天加热1000C，30min，连续3天，第一天加热后，其中的营养体被杀死，将培养基取出放在370C下培养24h，使其中的芽孢发育成营养体，第二天再加热1000C，30min，发育的营养体又被杀死，但可能仍留有芽孢，故应再重复一次，达到彻底灭菌。
灭菌与消毒两者概念不同，灭菌是指杀死或消灭环境中的所有微生物（包括芽孢与孢子）；消毒是指消灭病原菌和有害微生物营养体。
但对于同一种方法来说，不同的作用强度和作用时间也可达到灭菌或消毒不同目的。
灭菌与消毒方法有多种，可分为物理法和化学法两大类。
物理法包括加热灭菌（干热灭菌和湿热灭菌）、过滤除菌、紫外线辐射灭菌等。
化学方法主要是利用无机或有机化学药剂进行消毒与杀菌。
人们可根据微生物的特点、待灭菌材料于是眼目的和要求选用灭菌和消毒方法。
三、思考题
1、干热灭菌设定的温度是多少，为什么？
2、高压蒸汽灭菌时，为什么要将灭菌锅内的冷空气排放干净？
苏州农业职业技术学院教案
教师姓名
刘文如
授课时数
2
授课形式
实训
授课班级
农业环保11-1
授课日期
节次
环境监测11-1
授课日期
节次
环境工程11-1
授课日期
节次
环境监测11-2
授课日期
节次
城环11-1
授课日期
节次
授课章节
名称
实训四 棉塞的制作技术
教学目标
掌握棉塞的制作技术
了解为何选用棉花作为材料
教学重点
棉塞的制作技术
教学难点
无
更新、补充及删节
内容
无
使用教具
微生物实验室
课外作业
实训报告
课后体会
授课主要内容或板书设计
实训四、棉塞的制作技术
一、实训目的
掌握棉塞的制作技术
二、材料准备
1、材料：
试管或三角瓶,棉花,纱布,棉线,木棒或玻璃棒,剪刀等。
2、准备：
根据试管或三角瓶大小,将纱布剪成一定尺寸的正方形块,如制作16mm×160mm、18mm×180mm试管用棉塞,可将纱布分别剪成10cm、12cm的方块,三角瓶塞用的纱布需大些。
将棉线剪成15cm长的小段。
三、棉塞制作过程
1、根据所制作棉塞的大小选试管（三角瓶）和纱布。
将纱布块放于试管（瓶）口上,使纱布块中央与管口相对,然后将纱布向下反包,左手握住纱布和试管。
2、右手取小块棉花放于纱布和管口之上,再用木棒或玻璃棒将棉花捅入试管中,这样反复几次,边捅边放松纱布,应尽量将棉花压实使之成棉柱状。
3、在捅入棉花过程中,纱布在棉柱和管壁之间会有折叠或皱折,所以当棉柱长1～1.5cm时,左手食指压紧棉花柱,右手在左手的配合下将纱布向上和两边拉展。
4、继续捅入棉花直到棉柱的长度达到要求为止。
例如16mm×160mm试管以315～415cm为宜,18mm×180mm试管以410～415cm为宜。
当捅入棉花结束时,再一次按上述操作将纱布拉展。
5、将尾部纱布收拢并压紧棉花,用棉线将尾部扎起,尾部多余纱部分距捆扎部位0.15cm左右处剪去,这样棉塞即成。
四、作业：
为什么要选用棉作为塞子的材料？
苏州农业职业技术学院教案
教师姓名
刘文如
授课时数
10
授课形式
实训
授课班级
农业环保11-1
授课日期
节次
环境监测11-1
授课日期
节次
环境工程11-1
授课日期
节次
环境监测11-2
授课日期
节次
城环11-1
授课日期
节次
授课章节
名称
实训五、环境中微生物的分离与纯化
教学目标
1、了解微生物分离和纯化的原理；
2、掌握常用的分离纯化微生物的方法；
3、学习掌握微生物的几种接种技术
4、建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节。
教学重点
常用的分离纯化微生物的方法
教学难点
1、分离纯化微生物的方法；
2、微生物的几种接种技术
更新、补充及删节
内容
无
使用教具
微生物实验室
课外作业
实验报告
课后体会
授课主要内容或板书设计
实训五、环境中微生物的分离与纯化
一、实训目的
1、了解微生物分离和纯化的原理；2、掌握常用的分离纯化微生物的方法；
3、掌握菌落特征的观察。
4、学习掌握微生物的几种接种技术
5、建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节。
二、实训材料
1培养基和菌种
淀粉琼脂培养基（高氏I号培养基），牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。
普通琼脂斜面和平板。
大肠杆菌、金黄色葡萄球菌。
2溶液或试剂：
盛9ml无菌水的试管，盛90ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶。
3仪器或其它用具
无菌玻璃涂棒，无菌吸管，接种环，无菌培养皿，链霉素和土样，显微镜，血细胞计数板、涂布器等。
酒精灯，玻璃铅笔，火柴，试管架、接种环、接种针、接种钩、滴管、移液管、三角型接种棒等接种工具。
三、实训步骤
1、流程：
倒平板→制备梯度稀释液→涂布（或划线法）→培养→挑单菌落→保存。
2、步骤
（1）倒平板
将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基分别倒平板，共倒十皿。
（2）制备细菌混合液稀释液
取池水500ml，视为稀释10-2倍，然后用无菌吸管从此试管中吸取lml加入另一盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此类推制成10-3、10-4、10-5、10-6、10-7不同稀释度的混合液溶液，注意：
操作时管尖不能接触液面，每一个稀释度换一支试管。
（3）涂布
将上述每种培养基的三个平板底面分别用记号笔写上10-5、10-6和10-7三种稀度，然后用无菌吸管分别由10-5、10-6和10-7，从三管活性污泥混合液稀释液中各吸取0.1或0.2ml，小心地滴在对应平板培养基表面中央位置。
用无菌玻璃涂棒，右手拿无菌涂棒平放在平板培养基表面上，将菌悬液先沿同心圆方向轻轻地向外扩展，使之分布均匀。
室温下静置5～l0min，使菌液浸入培养基。
（4）培养
将肉膏蛋白胨平板倒置于37℃温室中培养2～3d。
（5）观察并挑菌落
将培养后长出的单个菌落根据其大小、颜色、形状等特征进行观察，之后根据菌落不同特征分别挑取少许细胞接种到上述三种培养基斜面上，分别置28℃和37℃温室培养。
若发现有杂菌，需再一次进行分离、纯化，直到获得纯培养。
四、思考题
在恒温箱里培养时，为什么要将平板倒置？
苏州农业职业技术学院教案
教师姓名
刘文如
授课时数
2
授课形式
实训
授课班级
农业环保11-1
授课日期
节次
环境监测11-1
授课日期
节次
环境工程11-1
授课日期
节次
环境监测11-2
授课日期
节次
城环11-1
授课日期
节次
授课章节
名称
实训六、水中细菌总数的检测
教学目标
1.复习以前所学实训内容，巩固微生物实验基本操作技能；
2.综合考察学生学以致用的能力。
教学重点
无
教学难点
无
更新、补充及删节
内容
无
使用教具
微生物实验室
课外作业
实验报告
课后体会
授课主要内容或板书设计
实训六、水中细菌总数的检测
一、实训目的
1、复习以前所学实训内容，巩固微生物实验基本操作技能；2、综合考察学生学以致用的能力。
二、实训材料
1、高压蒸汽灭菌锅、恒温箱、冰箱、无菌接种间。
2、消毒酒精、消毒水。
3、试管、三角瓶、平皿、刻度吸管、涂布器等（实验前包扎灭菌处理好备用）
4、培养基
蛋白胨10g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂10~20g蒸馏水1000ml
制备方法：
按照实际的需要量，按上述配方称取各成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4~7.6，，分装于玻璃容器中，用高压蒸汽灭菌锅121℃灭菌20min，倒制成平板后储存于冷处备用。
5、水样：
自来水、中水。
三、实训步骤
（一）、培养基的制备：
实验前事先准备好培养基平板（方法见上），每小组2-4个平板。
（二）、取水样：
自来水的取样：
先将自来水龙头用酒精棉擦拭，再用酒精灯火焰灭菌，打开龙头放水1-2分钟，用无菌空三角瓶接取水样200毫升。
（三）、接种培养：
（要求无菌操作）
用无菌吸管吸取1毫升水样，加入平板中（每个水样平行做两个平板），用无菌涂布器涂抹均匀，在培养皿侧面标注清楚后，置于37℃恒温箱内经24h-48小时培养后，统计细菌菌落的总数。
（四）、菌落记数：
菌落计数及报告方法
作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查以防遗漏。
在记下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。
在求同稀释度的平均数时，若其中一个平皿有较大片状菌落产生时，则不宜采用，而应以无片状菌落产生的平皿作为该稀释度的平均菌落数。
若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数。
然后再求该稀释度的平均菌落数。
四、思考题
（1）从自来水的细菌总数结果来看，是否合乎饮用水的标准？
（2）你所测的水样污秽程度
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