常用缓冲液配置.docx

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常用缓冲液配置

实验室常用缓冲液配置方案

1）1MTris-HCl（pH7.4,7.6,8.0）组份浓度：

1MTris-HCl配制量：

1L配制方法：

1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。

2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

PH值

浓HCl

7.4

约70ml

7.6

约60ml

8.0

约42ml

4.将溶液定容至1L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

2）10×TEBuffer（pH7.4,7.6,8.0）组份浓度：

100mMTris-HCl,10mMEDTA配制量：

1L配制方法：

1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

1MTris－HClBuffer（PH7.4，7.6，8.0）

100ml

500mMEDTA（PH8.0）

20ml

2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，均匀混合。

3.将溶液定容至1L后，高温高压灭菌。

4.室温保存。

3）1.5MTris-HCl（pH8.8）组份浓度：

1.5MTris-HCl配制量：

1L配制方法：

1.称量181.7gTris置于1L烧杯中。

2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.用浓盐酸调节pH值至8.8。

4.将溶液定容至1L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

4）3M醋酸钠（pH5.2）组份浓度：

3M醋酸钠配制量：

100ml配制方法：

1.称量40.8gNaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节pH值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后，室温保存。

5）PBSBuffer组份浓度：

137mMNaCl,2.7mMKCl,10mMNa2HPO4,2mMKH2PO4配制量：

1L配制方法：

1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。

NaCl

8g

KCl

0.2g

Na2HPO4

1.42g

KH2PO4

0.27g

2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加浓盐酸将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。

4.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：

上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。

6）10M醋酸铵组份浓度：

10M醋酸铵

配制量：

100ml配制方法：

1.称量77.1g醋酸铵置于100～200ml烧杯中，加入约30ml的去离子水搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至100ml。

3.使用0.22mm滤膜过滤除菌。

4.密封瓶口于室温保存。

注意：

醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

7）苯酚/氯仿/异戊醇（25:

24:

1）配制方法：

1.说明：

从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25:

24:

1）。

氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。

2.配制方法：

将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24:

1）混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

8）10％（W/V）SDS组份浓度：

10％（W/V）SDS配制量：

100ml配制方法：

1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水，68℃加入溶解2.滴加浓盐酸调节pH值至7.23.将溶液定容至100ml后，室温保存。

9）2NNaOH组份浓度：

2NNaOH配制量：

100ml配制方法：

1.量取80ml去离子水置于100～200ml塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。

2.称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。

3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100ml。

4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

10）2.5NHCl组份浓度：

2.5NHCl配制量：

100ml配制方法：

1.在78.4ml的去离子水中加入21.6ml的浓盐酸（11.6N），均匀混合。

2.室温保存。

11）5MNaCl组份浓度：

5MNaCl配制量：

1L配制方法：

1.称取292.2gNaCl置于1L烧杯中，加入约800ml的去离子水后搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。

3.高温高压灭菌后，4℃保存。

11）20％（W/V）Glucose组份浓度：

20％（W/V）Glucose配制量：

100ml配制方法：

1.称取20gGlucose置于100～200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水后，搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至100ml。

3.高温高压灭菌后，4℃保存。

12）SolutionI（质粒提取用）组份浓度：

25mMTris-HCl（pH8.0）,10mMEDTA,50mMGlucose配制量：

1L配制方法：

1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

1MTris-HCl（PH8.0）

25ml

0.5MEDTA（PH8.0）

20ml

20％Glucose（1.11M）

45ml

dH2O

910ml

2.高温高压灭菌后，4℃保存。

3.使用前每50ml的SolutionI中加入2ml的RNaseA（20mg/ml）。

13）SolutionII（质粒提取用）组份浓度：

200mMNaOH，1％（W/V）SDS配制量：

500ml配制方法：

1.量取下列溶液，置于500ml烧杯中10％SDS50ml2NNaOH50ml2.加灭菌水定容至500ml，充分混匀3.室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月注意：

SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌

14）SolutionIII（质粒提取用）组份浓度：

3MKOAc,5MCH3COOH配制量：

500ml配制方法：

1.称量下列试剂，置于500ml烧杯中。

KOAc

147g

CH3COOH

57.5ml

2.加入300ml去离子水后搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至500ml。

4.高温高压灭菌后，4℃保存。

15）0.5MEDTA（pH8.0）组份浓度：

0.5MEDTA配制量：

1L配制方法：

称取186.1gNa2EDTA·2H2O，置于1L烧杯中。

2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌。

3.用NaOH调节pH值至8.0（约20gNaOH）。

注意：

pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。

4.加去离子水将溶液定容至1L。

5.适量分成小份后，高温高压灭菌。

6.室温保存。

16）1MDTT

组份浓度：

1MDTT配制量：

20ml配制方法：

1.称取3.09gDTT，加入到50ml塑料离心管内。

2.加20ml的0.01MNaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22mm滤器过滤除菌。

3.适量分成小份后，-20℃保存。

17）10mMATP组份浓度：

10mMATP配制量：

20ml配制方法：

1.称取121mgNa2ATP·3H2O，加入到50ml塑料离心管内。

2.加20ml的25mMTris-HCl（pH8.0），搅拌溶解。

3.适量分成小份后，-20℃保存。

一.常用贮液与溶液

1mol/L亚精胺（Spermidine）:

溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L精胺（Spermine）：

溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

10mol/L乙酸胺（ammoniumacetate）：

将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。

10mg/ml牛血清蛋白（BSA）：

加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：

在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。

或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。

8mol/L乙酸钾（potassiumacetate）：

溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。

1mol/L氯化钾（KCl）：

溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。

3mol/L乙酸钠（sodiumacetate）：

溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。

0.5mol/LEDTA:

配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。

或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。

1mol/LHEPES：

将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。

1mol/LHCl：

加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。

25mg/mlIPGT：

溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20℃。

1mol/LMgCl2:

溶解20.3gMgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100ml。

100mmol/LPMSF：

溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。

分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20℃。

20mg/ml蛋白酶K（proteinaseK）：

将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－freeRNase）：

溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH5.0）。

溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。

用1mol/L的Tris－HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。

（配制过程中要戴手套）

5mol/L氯化钠（NaCl）：

溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。

10N氢氧化钠（NaOH）：

溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。

10％SDS（十二烷基硫酸钠）：

称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。

用水定容至1L。

2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：

溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。

100％三氯乙酸（TCA）:

在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。

（稀释液应在临用前配制）

2.5％X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：

溶解25mg的X－gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20℃。

100×Denhardt试剂（Denhardt'sregent）

成分及终浓度

配制100ml溶液各成分的用量

2％聚蔗糖（Ficoll，400型）2％聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）2％BSA（组分V）水

2g2g2g加水至总体积为100ml

依照上表称取各组分，溶于水中定容。

过滤除菌及杂质，分装成小份于-20℃贮存。

10×标准DNA连接酶缓冲液（standardDNAligasebuffer）（粘端、平端连接）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分的用量

0.5mol/LTris-HCl100mmol/LMgCl2100mmol/LDTT2mmol/LATP5mmol/L盐酸亚精胺（可选）0.5mg/mlBSA（组分V）（可选）水

5ml1mol/L贮液1ml1mol/L贮液1ml1mol/L贮液200ul100mmol/L贮液50ul1mmol/L贮液0.5ml10mg/mL贮液2.25ml

将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20℃。

100mmol/LdNTP溶液（dNTPsolutions）可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80℃可贮存至少6个月。

10mmol/LdNTP混合液

成分及终浓度

配制20ul溶液各成分的用量

10mmol/LdATP10mmol/LdCTP10mmol/LdGTP10mmol/LdTTP水

2ul100mmol/LdATP贮液2ul100mmol/LdCTP贮液2ul100mmol/LdGTP贮液2ul100mmol/LdTTP贮液12ul

20％PEG8000/2.5MNaCl

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分的用量

质量浓度为20％聚乙二醇2.5mol/L氯化钠水

20g50ml5mol/L氯化钠或14.6g固体氯化钠补足100ml

加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。

20×SSC

成分及终浓度

配制1L溶液各成分的用量

300mmol/L柠檬酸三钠（二水）3mol/L氯化钠水

88.2g175.3g补足1L

溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10NNaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。

DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水加100ulDEPC于100ml水中，使DEPC的体积分数为0.1％。

在37℃温浴至少12h，然后在15psi条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。

DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。

甲酰胺（deionizedformamide）直接购买或加DowexXG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。

经Whatman1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80℃贮存（防止氧化）。

磷酸缓冲液（phosphatebuffer）按照下表所给定的体积，混合1mol/L的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。

配制1mol/L的磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）贮液：

溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:

溶解142g于足量水中使终体积为1L。

1mol/L

磷酸二氢钠（ml）

1mol/L

磷酸氢二钠（ml）

最终pH值

877850815775735685625565510450390330280

123150185225265315375435490550610670720

6.06.16.26.36.46.56.66.76.86.97.07.17.2

TE（用于悬浮和贮存DNA）

成分及终浓度

配制100ml溶液各成分的用量

10mmol/LTris－HCl1mmol/LEDTA水

1ml1mol/LTris-HCl（pH7.4-8.0，25℃）200ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）98.8ml

Tris缓冲液（Tris-HClbuffer）将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25℃下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。

浓盐酸的体积（ml）

pH

8.6142128.53846566671.376

9.08.88.68.48.28.07.87.67.47.2

二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液

电泳缓冲液

50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液

成分及终浓度

配制1L溶液各成分的用量

2mol/LTris碱1mol/L乙酸100mmol/LEDTA水

242g57.1ml的冰乙酸（17.4mol/L）200ml的0.5mol/LEDTA（pH8.0）补足1L

5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液

成分及终浓度

配制1L溶液各成分的用量

445mmol/LTris碱445mmol/L硼酸盐10mmol/LEDTA水

54g27.5g硼酸20ml的0.5mol/LEDTA（pH8.0）补足1L

染料

1％溴酚蓝（bromophenolblue）加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。

1％二甲苯青FF（xylenecyanoleFF）溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。

10mg/ml的溴化乙锭（ethidiumbromide）小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。

用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。

凝胶上样液（gelloadingsolutions）6×碱性凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.3N氢氧化钠6mmol/LEDTA18％聚蔗糖（400型）0.15％溴甲酚绿0.25％二甲苯青FF水

300ul10N氢氧化钠120ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）1.8g15mg25mg补足到10ml

6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.15％溴酚蓝0.15％二甲苯青FF5mmol/LEDTA15％聚蔗糖（400型）水

1.5ml1％溴酚蓝1.5ml1％二甲苯青FF100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）1.5g补足到10ml

6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.25％溴酚蓝0.25％二甲苯青FF15％聚蔗糖（400型）水

2.5ml1％溴酚蓝2.5ml1％二甲苯青FF1.5g补足到10ml

6×甘油凝胶上样液（4℃贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.15％溴酚蓝0.15％二甲苯青FF5mmol/LEDTA50％甘油水

1.5ml1％溴酚蓝1.5ml1％二甲苯青FF100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）3ml3.9ml

6×蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.15％溴酚蓝0.15％二甲苯青FF5mmol/LEDTA40％聚蔗糖水

1.5ml1％溴酚蓝1.5ml1％二甲苯青FF100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）4g补足到10ml

10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.2％溴酚蓝0.2％二甲苯青FF200mmol/LEDTA0.1％SDS50％甘油水

20mg20mg4ml0.5mol/LEDTA（pH8.0）100ul10％SDS5ml补足到10ml

三.常用培养基

1）LB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨

10g

酵母提取物

5g

氯化钠

10g

如果需要用1NNaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。

注：

琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

SOB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨

20g

酵母提取物

5g

氯化钠

0.5g

1mol/L氯化钾

2.5ml

用水补足体积到1L。

分成100ml的小份，高压灭菌。

培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。

2）SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。

3）TB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨

12g

酵母提取物

24g

甘油

4ml

各组分溶解后高压灭菌。

冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。

高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。

4）2×YT培养基将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨

16g

酵母提取物

10g

氯化钠

4ml

如果需要用1NNaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。

注：

琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

5）YPD培养基将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨

20g

酵母提取物

10g

葡萄糖

20g

用水补足体积为1L后，高压灭菌。

建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。

为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。

四.常用抗生素

1）氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

2）羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

3）甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。

4）卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

5）氯霉素（chlor