当不采用子读点时，为终点法，采用最大时间吸光度和空白吸光度进行计算。
说实话，真不知道这个方法是做什么项目的，中文没有解释，英文的解释很少，也没发现实例。
图7CRP固定点法示意图
IMA反应方法：
也就是免疫比浊法。
是采用最小二乘法计算的速率法。
对于R1的加入量太少，无法进行E2计算时，这个方法就变得有用了。
也就是说，在很多免疫比浊项目里，R1的加入量往往小于R2的量，所以引发了一系列的计算和判别上的困难，IMA就是为了解决这个难题的。
样本和第一试剂加入量太少，就无法进行E2的计算，没有E2就无法进行前带监测和底物耗尽的监测，所以在IMA方法中R2之后插入监测点CheckD.P.I,用于弥补R1和S的不足。
采用IMA方法设置检查点后，系统自动计算limitvalues值（设备默认0.003），此法对浑浊样本的处理很有成效，所以用在免疫比浊项目上。
图8IMA免疫比浊法示意图
图9IMA应用示意图
IMA的其它使用方法与速率法一样，仅限于R1+S低于反应杯最小容量的测试项目里。
如果不存在这样的项目，那么即便是免疫比浊项目，也应该采用常规速率法或终点法。
定标方法：
因数定标、线性定标和非线性定标；
在参数界面里的Calcmthd，也就是计算方式里，有ABS和STD/MSTD选择，表示吸光度和单点定标/多点定标计算。
在ADVIA的所有机型里，定标中的零浓度点用试剂空白替代，所以在定标之前要做试剂空白，如果不做试剂空白，仪器会认为试剂空白就是原点。
注意这个差别，与奥林巴斯的不同。
奥林巴斯的试剂空白和零浓度校准点是两个概念，而在adiva里合二为一。
参数界面里的Formula，也就是公式才是选择定标方法的地方。
因数定标：
如果在Calcmthd里选择ABS，那就意味着你要采用因数定标，那么在Formula里只有一个可以选择，那就是Linear,因数定标只能用于线性定标。
因数定标也就是直线方程里的Y=KX+B中的K，所以也叫K值定标法。
而B的确定则需要试剂空白，所以因数定标法必须做试剂空白，然后结合给出的K值进行定标曲线的绘制，然后依据这个曲线进行浓度计算。
在Advia中，K值的给出是在参数界面的Standardssetting中的FV中。
线性定标：
线性定标需要两个点才能决定一条直线，我们一般给出一个零浓度点，一个带有浓度的标准点，这样仪器就会自动进行计算。
而Advia中零浓度点在试剂空白里给出了，所以对于两点线性定标来说，只需要在给出一个校准点就可以了。
所以在Advia的手册里，线性定标叫做一点线性。
而且Advia的所有校准点，无论是线性还是非线性，零浓度点都不计算在内，只数带有浓度的校准点，比如5点定标，加上零浓度点其实就是6点；而6点定标，加上零浓度点就是7点。
不过，要指出的是，Advia的试剂空白并不是强制性的，这一点与奥林巴斯不同。
不进行试剂空白检查的项目，默认试剂空白也就是零浓度点的值是通过原点的。
下面给出两张图，一张做过试剂空白的线性定标，一张是没有做过试剂空白的线性定标。
图10没有做试剂空白的线性定标
由于假设所有没有做过试剂空白的线性定标的零浓度点都通过原点，所以图中的蓝线则是默认的校准曲线，但实际上并非如此。
如果提前没有做试剂空白，仪器也会自动做上，这样就会出现两个点，图中的两个红点就是。
左下角是零浓度点，右上角是标准店。
但蓝色的定标曲线却是右上角的红点和原点的连接，而不是与零浓度点连接。
这样的结果我们都知道会有错误，因为真正计算的是按照蓝色直线计算，而红色的我自己画上去的示意线条才是真正的计算直线。
要解决这个问题，只有重测试剂空白重新执行定标才行。
下图是做过试剂空白的线性定标图例
图11做过试剂空白的线性定标示意图
而在statisticalData里的FV就不是因数了，而是定标点的浓度。
上面两张图很清楚的告诉我们，一点线性定标，有一个Blank试剂空白，FV为0.00，而STD值只有一个，就是标准点的值。
图12Advia一点线性定标示意图
在线性定标中也有多点定标，例如同工酶法。
在Advia中，线性多点定标多是用来拟合一元三
（二）次直线方程。
对此有三种方法，由于很少使用，所以仅仅图示，不做解释。
图13无变换一元三次直线方程定标
图14对数线性变换的一元三次线性方程定标
图15对数变换的一元三次线性方程定标
同时，Advia还提供一元二次线性方程定标。
非线性定标：
Advia的非线性定标有Logit-Log1、Logit-Log2、Logit-Log3和Spline样条曲线、Iinegraph折线五种。
图16Logit-Log1非线性定标示意图
图17Logit-Log2非线性定标示意图
图18Logit-Log3非线性定标示意图
图19Iinegraph折线非定标曲线示意图
图20Spline样条非定标曲线示意图
在多点定标中，由于试剂随着使用时间的推移性能会发生改变，其中包括颜色的改变。
所以每天开机画面中会提供简单定标（Simplifiedcalibration）这个选项，原理是根据前后试剂空白修正整条定标曲线。
图21Simplifiedcalibration简单定标示意图
在图11中，左侧是定标细则的选项，其中，Calc.mthd表示计算方法，有ABS（因数法）、1-Point（1点定标）和Multi-Point（多点定标）三个选项；
在AxisConv.轴线变换中，有NoConv.（不变换）、Log.-Linear（对数线性）和Log.-Log.（对数）三种选择；
在MultipointFormula（多点公式）中，有Linear（线性定标）、quadratic（一元二次直线方程定标）、Cubic（一元三次直线方程定标）、Spline（样条曲线）、LineGraph（折线）、Logit-Log1、Logit-Log2和Logit-Log3等8种方式；
在#calStds里，要填写包括试剂空白在内的校准点数量。
图22多点非线性定标示意图
从图中我们看到，四个校准品的数值成梯度倍比关系，但无法做出满意的样条曲线，是否需要改为对数曲线还需要观察。
图23原厂试剂多点非线性定标示意图
这是原厂的IgM定标曲线，没有做试剂空白。
定标浓度并非梯度倍比稀释，但只有这样才能保证Logit-Log3曲线的完美。
好像国外很少使用样条曲线定标。
而这个项目恰恰是样条曲线。
如果用最高浓度倍比梯度稀释，就会得到一幅漂亮的样条曲线。
三、读点前移：
前面说过，Advia的读点前移技术是为了应对底物耗尽的速率反应，采用样本吸光度限制Sampleu/d和试剂空白限制Blanku/d来进行计算和判断。
要知道是，底物耗尽有时并不是因为样本的浓度或活性太高导致的，试剂污染或失效也有可能。
所以读点前移技术和底物耗尽判断，从另一个方面讲，也是对试剂性能的一个监测。
由于底物耗尽仅仅存在于速率法的反应当中，所以这里描述的均为速率法。
下面两张图就是超过Sampleu/d限制后的底物耗尽图例：
图24间接或相反反应超过Sampled限制的底物耗尽反应图示
图25直接反应超过Sampleu限制的底物耗尽反应图示
注意图25中27点出现的拐点，这已经是不明显的底物耗尽的表现。
样本吸光度限制和试剂空白的配合使用，加上检查点checkD.P.I的介入，可以很容易的判断试剂性能。
下图是极端情况下的试剂空白限制的图例
图26试剂空白图例
通过试剂空白计算出来的Blanku/d值与样本测试时主读点区主波长吸光度值进行比较，如果超出这个范围将会用U/D来标示结果，以提示操作人员该结果不可靠。
检查点checkD.P.I的选择一般在R2也就是启动反应物加入之前或之后的一个点，而E2的吸光度计算点则选择在6、7、8这三个读点上。
注意这仅仅是用来监测底物耗尽的，如果用E2来监测LIH样本，则读点应该在2、3、4、5这些地方。
在直接反应中，也就是单试剂项目里：
当checkD.P.I的主波长吸光度值大于Blanku的值时，结果用u标示；
当checkD.P.I的主波长吸光度值小于Blankd的值时，结果用D标示；
在间接反应中，也就是双试剂项目里：
当checkD.P.I的主波长吸光度值大于Blanku的值时，结果用U标示；
当checkD.P.I的主波长吸光度值小于Blankd的值时，结果用d标示；
这就是结果里“U/u/D/d”这四种旗标的来历。
下面举例说明读点前移技术的使用：
图27读点前移举例1
图27中的三个曲线：
红色是试剂空白，蓝色是正常样本曲线，绿色是异常样本曲线。
图中有两天竖线，一个E2，一个是checkD.P.I，那么根据图示可以得到以下数据：
E2吸光度值试剂空白修正E2（E2-试剂空白）
试剂空白0.10-
正常样本0.500.40
异常样本0.600.50
那么经过体积修正过的E2是要计算修正系数的，而修正系数=（R1+S）/（R1+S+R2）。
这里假设R1是80，S是16，R2也是16，这样修正系数就是0.875。
那么经过体积修正过的正常样本E2就是0.343，异常样本E2就是0.429。
同时我们也知道，CheckD.P.I在R2之后，其正常样本为0.55，异常样本为1.00。
那么体积修正过的CheckD.P.I-E2的值是：
正常样本是0.207，异常样本是0.571。
根据试剂空白的原则，Blanku应该是0.40，Blankd应该是0.05。
那么我们用CheckD.P.I和E2的差值与Blanku值的0.40进行比较，正常样本的差值0.207小于Blanku值的0.40，而异常样本的差值0.571大于Blanku值的0.40，又是间接反应，所以结果报告U。
图28读点前移举例2
图28的例子里，红色为试剂空白，绿色为异常标本2，蓝色为异常标本1。
很明显，异常标本1是典型的底物耗尽反应，而异常标本2貌似没有问题，但R2加入之前就过高了。
E2吸光度值试剂空白修正E2（E2-试剂空白）
试剂空白-0.0041-
正常样本2.61192.6160
异常样本1.71541.7195
经过体积修正后的E2分别是：
异常样本1为2.242，异常样本2为1.474；
CheckD.P.I值为：
异常样本1为2.4665，异常样本2为1.4670；
E2和CheckD.P.I的差值为：
异常样本为0.224，异常样本2为-0.007；
Blanku值设为0.20，Blankd值设置为0.01。
异常样本1的差值0.224大于Blanku的0.20，又是间接反应，所以结果报告U；
异常样本2的差值-0.007，小于Blankd的0.01，又是间接反应，所以结果报告d。
这是两个利用试剂空白限制和E2以及CheckD.P.I检查点进行底物耗尽判断的例子。
在这两个例子中，试剂空白放的很宽，并不是严格按照150%和50%最高最低计算公式计算的，但即便是这样，例子中还是判断为底物耗尽。
而在参数设置里，Blanku/d往往被设置成±9.9999，这也就意味着不进行底物耗尽判断和试剂空白判断，那么CheckD.P.I和M.DET.P.l的设置也就变得毫无意义了。
样本吸光度限制Sampleu/d在底物耗尽中的用途呢？
其与试剂空白Blanku/d可以同时，也可以单独使用，监测底物耗尽依然有一定的作用。
图29样本吸光度限制Sampleu/d在底物耗尽判断中的示意图
图29的上图是选择点吸光度值大于Sampleu，下图是选择点吸光度值小于Sampled，所以都被判断为底物耗尽。
下面举例说明计算方法：
图30Sampleu/d判断底物耗尽的例子
图中红色为试剂空白，蓝色为异常样本。
试剂空白的E2为-0.004，样本的E2为0.6127；
Sampleu/d=1.25-[0.6127-（-0.004）]*{[16（S）+80（R1）]/[16（S）+80（R1）+16（R2）]}=0.7215；
经过修正后的曲线就是蓝色虚线部分，那么主读点区的最后两个点的吸光度也就是选择点的吸光度值只有0.250，远远小于Sampled的0.7215（图中放宽到0.750），所以判定为底物耗尽。
（下降反应是Sampled，上升反应是Sampleu）。
判断底物耗尽后，就需要读点前移。
而采用读点前移，还需要一个M.DET.P.l读点。
图31读点前移的各种可能图示
在这个图示中，主读点M.DET.P.m和M.DET.P.n之间出现底物耗尽现象，读点前移就是读取M.DET.P.l和M.DET.P.m之间的吸光度速率。
图中给出的M.DET.P.m正好在拐点上，这种可能性太小了。
红色箭头才是更多的M.DET.P.m可能性之一。
当然最理想的状况是左侧的红色箭头，如果是右侧的红色箭头，即便是读点前移也毫无意义。
由此可知，Advia的读点前移技术相当的复杂，并不是那么容易掌握，而且在前移点的选择上也很令人抓狂，远不如东芝的弹性速率法简单。
不过，利用这种技术不仅可以判断试剂问题，也可以判断反应过程中的问题，还是很有帮助的。
我们要清醒的知道，利用读点前移技术，必须进行试剂空白检测，并且计算出Blanku/d和Sampleu/d，还要知道检查点CheckD.P.I的设置和前移点M.DET.P.l的设置，否则无法使用这一技术。
四、前带监测：
Prozone前带监测功能是几乎所有生化仪都拥有的，Advia系列也不例外。
更何况Advia强调免疫比浊功能，所以前带监测的设置与IMA的设置在一起，同在参数界面的一个区域里。
图32前带监测界面示意图
前带现象可能会导致实际结果偏低，这与底物耗尽类似，
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