中药制剂分析复习稿.docx

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中药制剂分析复习稿

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中药制剂分析

第一章绪论

1．中药制剂分析的特点                                                 

（1）中药制剂化学成分的多样性与复杂性                                                        日本学者对浸膏剂质量进行研究， 发现煎剂时生药成分存在五个动态过程：

成分在热水 中的溶解，提取物的析出和生药残渣的再吸附，挥发损失，热不稳定成分分解，成分间的化学反应。

（2）中药制剂原料药材质量的差别                                          （3）以中医理论为指导原则，评价中药制剂质量                              （4）中药制剂工艺及辅料的特殊性                                          （5）中药制剂杂质来源地多途径性                                         （6）中药制剂有效成分的非单一性

2．取样的基本原则：

应具有代表性、真实性、科学性。

一式三份（供检验、复检、备查），贵重药可酌情少取。

3．供试品的制备目的：

（1）将样品中被测成分转化为待测状态

（2）消除影响、干扰成分（3）浓缩、富集待测成分

4．提取方法                                                           

（1）溶剂提取法遵循“相似相容”原则                                   选择溶剂要求：

①对待测成分溶解度大、干扰成分溶解度小②与中药中待测成分不反应③易得、具有安全性。

                                               溶剂提取法中常用的提取方式①冷浸法②连续回流法③超声波提取法           

（2）水蒸气蒸馏法  如挥发油、小分子生物碱                           （3）超临界流体萃取法 原理：

超临界流体兼有气、液两重性的特点，其密度接近液体而粘度和扩散系数又与气体相似。

因而它不仅具有与液体溶剂相当的萃取能力，而且具有优良的传质效果。

                                        （4）升华法  挥发油、游离羟基蒽醌（如大黄）

5．预处理（样品精制）目的是为了最大可能的除去干扰杂质，而不损失待测成分。

（1）液—液萃取法   缺点：

操作繁、易乳化                                 

（2）沉淀法   沉淀杂质：

须注意过量试剂如对待测成分有干扰应去除。

如用PbAc沉淀，最后要脱Pb   沉淀待测成分：

注意洗净沉淀以免吸附的过量试剂干扰测定。

（3）蒸馏法  利用某些欲测定的成分具有挥发性的特点，可采用蒸馏法或某些成分经蒸馏分解生成挥发性成分，利用分解产物进行测定。

主要要求待测成分需结构明确（4）盐析法   （5）色谱法

6．定性鉴别                                                           

（1）定性鉴别 除单方制剂外，复方一般选择其中主药、辅药做为主要对象，其次应鉴别毒剧及贵重药材。

方法有显微鉴别（对含原药粉的制剂）；理化鉴别（应以专属性强灵敏度高的方法、简便结果准确为原则且要空白对照）；薄层色谱法 应用最多

第二章中药制剂的鉴别

1．中药制剂的定性方法主要有性状定性鉴别、显微定性鉴别和理化定性鉴别      理化定性鉴别包括一般化学反应法、升华法、光谱法、色谱法等。

2．显微鉴别特点：

（1）由于制剂药味多，药材与辅料易产生干扰 

（2）药材经加工炮制后其粉末可能发生变化，某些特征可能改变或消失。

（3）装片前应消除某些辅料的干扰

3．显色反应注意事项：

（1）慎用专属性不好的分析反应

（2）在分析前对样品进行分离、精制，除去干扰成分（3）采用阴阳对照的方式（4）控制反应进行条件a.溶液浓度b.溶液温度c.溶液pH值（5）提高反应灵敏度a.显色反应b.沉淀反应

4．升华法   大黄、冰片

5.薄层色谱法应用最广泛的是吸附薄层色谱，主要是利用吸附过程的两个规律：

（1）吸附是可逆的、吸附与解吸附处于一个动态平衡中；

（2）吸附剂对不同物质的吸附行为有差异；主要的吸附剂有硅胶、氧化铝、聚酰胺等。

被吸附物与吸附剂之间的作用力包括色散力、静电力、诱导力和氢键作用力等。

6．薄层色谱实验技术                                                   

（1）吸附剂的选择：

①.硅胶略带酸性，适用于分离酸性和中性物质，商品硅胶分为两类：

硅胶H（不加石膏），硅胶G（加石膏）；②.氧化铝略带碱性，适用于分离碱性和中性物质；③.聚酰胺多用于分离黄酮类成分。

（2）薄层板的制备   干法  湿法                                      （3）上样方式                                                        （4）展开     展开剂的基本要求：

1）能使待测组分很好的溶解；2）使待测组分与杂质分开，而待测各组分之间能达到基线分离，R>1.5；3）使展开后的组分斑点圆而集中，不应有拖尾现象；4）使待测组分的Rf值最好在0.4~0.6；组分多，也可在0.2~0.8之间；5）混合溶剂应临时新配，一般只能使用一次a.低沸点的溶剂容易挥发b.极性大的溶剂优先被吸附剂吸附，使比例变小c.在第一次展开后，吸附剂的杂质可能被带入；6）与组分能发生化学反应或在某些吸附剂上能聚合的溶剂不宜用有些有机溶剂含有少量或微量杂质，会影响色谱行为；7）具有适中的沸点和小的粘度    展开剂的选择：

在吸附薄层色谱中，理想的分离是得到一组Rf值在0.2~0.8之间的清晰斑点。

展开剂的极性愈大，则对同一化合物的洗脱能力也愈大，Rf值增加。

 （5）显色 显色剂的种类1）通用显色剂A.碘B.碳化试剂C.磷钼酸D.三氯化锑或五氯化锑E.罗丹明B   2）专属性显色剂

7．对照品的选择（包括对照品和阴阳对照溶液）                          

（1）对照品   化学成分单体                                           

（2）阴阳对照溶液                                                  （3）对照药材和对照品同时对照   

阳性对照溶液的制备：

取制剂处方中欲鉴定的某单味原药材，按制剂的制法处理后，再以与制备样品供试液相同的比例、方法、条件制成溶液。

阴性对照溶液的制备：

将制剂处方中减去欲鉴定药味后的其它所有各味药材，按制剂方法处理后，再以制备样品供试液相同的比例、方法、条件制成溶液。

第三章中药制剂的检查

1．杂质来源：

中药材原料中带入；在生产制备过程中引入；贮存过程中受外界条件的影响而使中药制剂的理化性质改变而产生。

2．重金属检查法  重金属是指在一定条件下的溶液中，能与硫代乙酰胺或硫化钠作用，生成不溶性硫化物的金属杂质。

   在弱酸性条件下（pH3—3.5）能与硫代乙酰胺生成不溶性硫化物的金属离子有Ag+、As3+、As5+、Bi3+、Cu2+、Cd2+、Co2+、Hg2+、Ni2+、Pb2+、Sb2+、Sn2+、Sn4+等。

 在碱性溶液中能与硫化钠作用生成不溶性硫化物的有Bi2+、Cd2+、Cu2+、Co2+、Fe3+、Hg2+、Ni2+、Pb2+、Zn2+等。

3．砷盐检查法                                                         

（1）古蔡法 原理:

采用锌和酸作用所产生的初生态氢与供试品中微量砷盐化合物反应生成挥发性砷化氢,再与溴化汞或氧化汞试纸作用生成黄色或棕黄色砷斑。

比较供试品与标准品溶液在同一条件下所显砷斑颜色的深浅，以测得供试品的含砷限度。

                                                                  醋酸铅棉花的目的：

若试剂或锌粒中也含有S2- 或供试液中含有S2-、SO42-、S2O32-在酸性条件下可生成硫化氢，也能使溴化汞试纸染色，产生干扰，因此用醋酸铅棉花使硫化氢生成硫化铅除去。

（2）二乙基二硫代甲酸银法（Ag-DDC法）  原理是利用砷化氢与Ag-DDC吡啶溶液作用，使Ag-DDC中银还原为红色的胶态银，与同条件下一定量标准砷溶液所产生的红色胶态银在510nm处测吸收度比较。

4．干燥失重测定法                                                        

（1）常压恒温干燥法：

适用于制剂中组分受热较稳定的情况。

（2）干燥剂干燥法：

适用于受热易分解或挥发的供试品。

                                 常用干燥剂有：

无水氯化钙、硅胶或五氧化二磷、硫酸。

                    （3）减压干燥法：

适用于熔点低，受热不稳定及较难驱除水分的供试品，因为在减压条件下，可降低干燥温度及缩短干燥时间。

5．水分测定法 方法：

有烘干法、甲苯法、减压干燥法、气相色谱法

6．酸不溶灰分：

加10%盐酸处理，得到不溶于10%盐酸的灰分，这就使生理灰分中的钙盐等溶去，而泥土、砂石等主要是硅酸盐等成分，因不溶而残留，可精确表明中药中泥土砂石等杂质的掺杂含量。

7．特殊杂质检查方法                                                      土大黄甙的检查：

正品大黄主要含有蒽苷及其苷元，此外还含有痕量或少量土大黄苷和它的苷元土大黄苷元。

在结构上为二苯乙烯的衍生物。

劣等大黄中土大黄苷的含量较高。

                                                            阿胶膏剂挥发性碱性物质的检查：

驴皮在腐败过程中，由于酶和细菌的作用，使蛋白质分解产生碱性含氮物质，即游离氨和挥发性低链胺、芳香胺类，这些物质对人体有害。

测定方法见P50                                                  乌头酯型生物碱的检查：

乌头中的双酯型生物碱是乌头毒性的主要成分，通常利用双酯型生物碱在碱性条件下与盐酸羟胺反应，生成异羟肟酸，再与三价铁离子反应，生成红色的异羟肟酸铁，在520nm波长处有特征吸收。

8．有机氯、磷的TLC检查                                                

（1）有机氯                                                           常用吸附剂：

硅胶G  氧化铝 GF254                                     常用展开剂：

已烷、庚烷、1%-2%丙酮                                     显色剂：

硝酸银、芳胺类（二苯胺、联邻甲苯胺）、荧光显色剂            

（2）有机磷                                                           常用吸附剂：

硅胶G、氧化铝、硅藻土、纤维素粉、聚酰胺                  常用展开剂：

丙酮、氯仿、乙腈、环已烷                                  显色剂：

刚果红、4-（对硝基苄基）吡啶（NBP）、硝酸银-溴酚蓝法等

9．黄曲霉毒素的检查                                                    

（1）黄曲霉毒素分别有黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2、P1、Q、GM等类型，其中B1的致癌性最强。

（前六种为最重要的毒素）                   

（2）一般采用TLC和微柱色谱法。

先微柱法测定，确定总毒素是否超过允许含量，如超标，再做TLC确证，后若证明含B1，再准确定量。

第四章中药制药的含量测定

1．双波长测定法                                                      

（1）等波长吸收法  原理：

a:

干扰组分,b:

待测组分c:

a、b混合组分             选择λ1λ2使得Aaλ1=Aaλ2，ΔA比较大                                                              ΔA=Aa+bλ2-Aa+bλ1=（Aaλ2+Abλ2）-（Aaλ1+Abλ1） =Abλ2 -Abλ1=（εbλ2-εbλ1）CbL           由△A=（ελ2b-ελ1b）CbL                                                                                         结论：

△A与待测组分浓度Cb成正比，而与干扰组分浓度无关。

（2）系数倍增法  ΔAa+b  =K2Abλ2–Abλ1=（K2εbλ2-εbλ1）CbL                                      ΔAa+b  与被测组分的浓度呈正比，与干扰组分的存在无关。

若K2=1，即为等吸收波长法，换言之，等吸收波长法是系数倍率法的特例。

2．三波长测定法  条件：

找出三个波长使在干扰组分的吸收曲线上，与三个波长相应的点能在一条直线上。

                                                   测定波长的选择                                                        原则：

满足在干扰组分吸收曲线上相应的3点成一直线                             满足待测组分的ΔA值比较大，最好选在待测组分的吸收峰上以减少误差

3．导数光谱法                                                            导数光谱法定量的理论依据：

在一定条件下（特定波长），导数值与被测组分的浓度呈线性关系。

4．差示光谱法：

提供一近似理想的参比溶液；使待测组分发生特征光谱变化，而赋形剂或其它共存组分却不引起变化，因而可消除它们的干扰

5．薄层扫描吸收法：

适用于可见、紫外有吸收的物质，分别以钨灯、氘灯为光源。

透射法：

灵敏度较高，但薄层的不均匀度及厚度对测定都有影响，基线噪音大，故信噪比小，且在短波长测定范围内玻璃板对紫外光有吸收                    反射法：

灵敏度较低，受薄层表面不均匀度的影响较大，但对薄层的厚度要求不高，基线比较稳定，因此信噪比较大，重现性较好。

6.定量分析方法   方法学考察：

工作曲线、精密度、准确度、统计检验         定量方法：

回归曲线定量法、外标法、内标法；外标法；首先做待测成分的标准曲线，确定其线性范围和是否通过原点                                        

（1）外标一点法：

 做标准曲线的目的是为了确定其线性范围（最小点样量与最大点样量间）和是否通过原点。

如通过原点，测定样品时只需点一个量的标准品称为外标一点法                                                                  

（2）外标二点法：

 如不通过原点则需点二个不同量的标准品点，才能决定一条直线

6．气相色谱法                                                         

（1）理论塔板数：

n=5.54（tR/Wh/2）=16（tR/W）2  tR:

保留时间 Wh/2：

半峰宽高。

                                拖尾因子：

T=W0.05h/2d1   W0.05h:

 0.05峰高处的峰宽；d1：

峰极大到峰前沿间距离； T应在0.95---1.05之间                                                 

（2）GC实验条件的选择                                                    载气的选择①分离效能和分析速度（对峰形扩张的影响）②检测器的适应性和灵敏度③载气的物理化学性质（对柱压降的影响）                                        柱温选择的基本原则是：

在使最难分离的组分有尽可能好的分离度的前提下，尽可能采用较低柱温。

                                                           固定液的选择①非极性物质一般用非极性固定液分离，如角鲨烷、阿皮松等，这时固定液和被分离组分间主要是靠色散力起作用，基本上按沸点大小分离，沸点低的先洗脱出柱。

如被分离组分是极性和非极性的混合物，则同沸点的极性组分先被洗脱。

②极性物质的分离，一般选用极性固定液，组分和固定液分子间的作用力主要是静电力，它与两种分子的偶极矩μ成正比。

极性越大，作用力越强，故各组分流出色谱柱的次序按极性顺序排列，极性小的先流出，极性大的后流出柱。

如样品是极性和非极性的混合物，则非极性化合物先流出。

③对于能形成氢键的样品，如醇、酚、胺等的分离，一般选择极性或氢键型的固定液，按组分和固定液分子间的形成氢键的能力大小进行分离，最先流出色谱柱的是最不容易形成氢键的化合物。

               （3）GC检测器类型      ①热导检测器（TCD）   优点:

 构造简单，测定范围广，稳定性好，线性范围宽，样品不被破坏。

   缺点:

 灵敏度低              ②氢火焰离子化检测器（FID）    优点:

操作简便，灵敏度高，响应快线性范围宽。

对温度不敏感、输出信号较大适合不同温度条件下使用。

   缺点:

 专属型检测器只能测定含碳有机物，具破坏性。

                                          （4）气相色谱定量分析方法                                                对内标物的要求：

内标物应是原样中不含有的组分,否则会使峰重叠而无法准确测量内标物的峰面积；内标物的保留时间应与待测组分相近，但能完全分开；内标物必须纯度合乎要求；且能溶于样品溶液中，色谱峰大小、结构与被测物类似。

7．高效液相色谱的实验条件的选择                                       

（1）反相键合相色谱：

分离分析非极性与中等极性的化合物；非极性固定相：

C18（ODS）柱；极性溶剂作为流动相：

一般有甲醇、乙腈、水。

（2）正相键合相色谱：

分离分析溶于有机溶剂的极性和中等极性的分子型物质。

   氰基键合相：

适用于双键异构体或含双键数不等的环状化合物                  氨基键合相：

甾体、强心苷、糖类                                          二醇基键合相：

有机酸、甾体、蛋白质。

                                 （3）流动相的选择                                                       反相键合相色谱：

部分含水溶剂（以水为基础加入甲醇、乙腈、四氢呋喃等）适用于分离中等、弱极性药物；非水溶剂（可在乙腈或甲醇中加入四氢呋喃）用于分离疏水性物质；缓冲溶液（三乙胺磷酸盐、磷酸盐、醋酸盐等）适用于可溶于水并具可解离特性的化合物如蛋白质、肽、弱酸、弱碱类化合物                           （4）几种常用的HPLC检测器

①紫外检测器因其高灵敏度和稳定性，在HPLC中应用最广泛。

但它所能检测的物质必须具有吸收紫外光的生色团，而相应的流动相在检测波长下则应当是无紫外吸收的，这一特性大大限制了其能检测的物质范围和一些良好溶剂的使用。

                ②蒸发光散射检测器ELSD   工作原理：

利用流动相与被测物质间蒸汽压的相对差异，在一定温度下流动相挥发除去的基础上，不挥发性的被测物质散射从激发光源发出的光，该散射光被硅光二级管检测并通过信号输出，因而其响应值与被测物质的官能团和光学性质无关，而取决于被分析物质颗粒的数量和大小。

                   优点：

1、适用于本身不含生色团或吸光系数不大，使用UVD检测时灵敏度很低的物质。

（没有紫外吸收或为紫外末端弱吸收的样品;在天然药物化学成分中常见的有糖类、皂苷类、生物碱、萜类内酯、甾类等）2、对所有样品的检测几乎具有相同的响应因子，对未知物和纯度的测定要比UV检测更容易更准确。

3、在梯度洗脱过程中基线很稳定。

没有低波长UV检测中来自溶剂峰的干扰。

                             缺点：

其灵敏度比较低，尤其低于有紫外吸收的组分；此外，流动相必须是挥发性的，不能含有缓冲盐类。

一般使用挥发性的化合物来调节流动相的pH，例如：

氨、醋酸、三氟乙酸等。

8．荧光分析法：

                                                          本法的优点是灵敏度更高（浓度可低至10-6μg/ml）、选择性好、试样量少等特点，特别适用于体内中药分析。

     不足之处是干扰因素多、实验条件严格。

第五章中药制剂中各类化学成分分析

第一节 生物碱类成分分析

1．含生物碱的中药有三尖杉、麻黄、黄连、黄柏、乌头、延胡索、粉防已、颠茄、洋金花、贝母、百部等。

2．生物碱性质：

多数极性较小，属于亲脂性碱，游离状态下几乎不溶于水。

成盐后则水溶性增加，易溶于水及醇中，不溶或难溶于苯、氯仿、乙醚等。

生物碱和其盐这一相反的溶解性质可以用于它的提取、分离和精制。

                             生物碱结构中含氮，多呈碱性。

能与无机酸、有机酸成盐

3．生物碱定性鉴别：

（1）常用的提取溶剂系统：

非极性溶剂系统：

一般先用10%的氢氧化铵、碳酸氢钠或氢氧化钠碱化，使生物盐游离，后用氯仿或乙醚提取，缺点是不能提出水溶性生物碱。

      极性溶剂系统：

极性较大的生物碱可用中性甲醇、乙醇、酸水（常用