中药化学实验内容.docx

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中药化学实验内容

实验一黄藤中掌叶防己碱的提取、氢化、和鉴定1

1、巴马汀的提取1

2、巴马汀粗品的精制2

3、巴马汀氢化物的制备3

4、鉴定4

实验二大黄中大黄素的提取、分离和鉴定5

1、大黄粉酸水解5

2、总羟基蒽醌苷元的提取6

3、PH梯度萃取7

4、柱色谱精制大黄素9

实验三槐类中芦丁的提取、分离与鉴定10

1、芦丁的提取10

2、芦丁的精制和酸水解11

3、槲皮素五乙酰化物的制备12

4、糖鉴定13

5、芦丁、槲皮素的鉴定14

实验一黄藤中掌叶防己碱的提取、氢化、和鉴定

（一）巴马汀的提取

一、实验目的

1、掌握渗漉提取方法

2、得到巴马汀粗品

3、学习生物碱的定性鉴别方法

二、实验原理

黄藤中巴马汀（掌叶防己碱，Palmatine）的含量为4%，是季铵型生物碱，可溶于水、醇中，盐酸盐的溶解度低，有机酸盐的溶解度高，因此，用1%的醋酸溶液渗漉提取巴马汀。

用盐析的方法，使巴马汀在水中溶解度降低而沉淀出来。

Palmatine

三、实验方法

50g黄藤粉

25ml1%HAc湿润15min

500ml1%HAc渗漉（1-2d/s）

渗漉液

10ml渗漉液其余渗漉液

10%NaCl，搅拌溶解

沉淀反应6NNaOH调pH10，

静置，抽滤

巴马汀粗品

反应试剂：

碘化铋钾

碘-碘化钾沉淀

鞣酸

硅钨酸

苦味酸

（1）碘化铋钾试剂：

取滤液1ml，加入试剂1~2滴，如有砖红色沉淀产生，可能存在生物碱。

（2）碘-碘化钾试剂：

取滤液1ml，加入试剂1~2滴，如有红棕色沉淀产生，可能存在生物碱。

（3）硅钨酸试剂：

取滤液1ml，加入试剂1~2滴，如有浅黄色或类白色沉淀产生，可能存在生物碱。

（4）苦味酸试剂：

取滤液1ml，加碱调中性，加入试剂1~2滴，如有黄色沉淀产生，可能存在生物碱。

（5）鞣酸试剂：

取滤液1ml，加碱调中性，加入试剂1~2滴，如有白色沉淀产生，可能存在生物碱。

四、实验注意事项

1、湿润

目的：

避免干药材吸水后溶胀，在渗漉筒中膨胀而使渗漉液难流出；

方法：

溶剂量为药材的1/2，放置15分钟；

程度：

湿润后的药材手握成团，放开后松散。

2、装筒方法：

（1）两层小纱布湿润后盖于渗漉筒小孔上，避免紧、大；

（2）湿润后的药粉均匀地倒入渗漉筒里，避免松紧不匀；

（3）药粉上盖一层滤纸，压上瓶盖，以防药粉翻出，影响提取得率；

（4）渗漉筒下端活塞打开，加提取溶剂至满，排出气泡；

（5）将活塞关闭5-10分钟，浸泡药粉，再打开渗漉；

（6）保持液面高于药粉。

3、判断提取完毕的方法

（1）渗漉液颜色很浅；

（2）渗漉液沉淀反应呈阴性；

（3）渗漉液为药粉体积的10倍时，基本渗漉完毕。

4、盐析量：

固体，为渗漉液体积的10%量。

5、调PH：

调至PH10，由于有有机酸共存，放置后又回到PH9。

6、抽滤：

放置一天以上再抽滤，尽量将上清液倒去，否则影响抽滤时间。

7、干燥：

抽滤物放入小干燥皿中，写上姓名、班级，统一干燥。

8、称重，计算粗制率。

五、思考题

1、还可用什么方法提取黄藤中生物碱？

请设计提取流程。

2、渗漉用的酸水，除醋酸外，还可用什么酸水？

3、分离黄藤中的季铵型生物碱，除盐析外还可用什么方法？

请设计分离流程。

（2）巴马汀粗品的精制

一、实验目的

1、学习结晶方法

2、得到氯化巴马汀精品

二、实验原理

利用混合物中各化合物对某种溶剂溶解度的差别，而使单一成分以结晶状态析出的方法。

巴马汀的盐酸盐在水和醇中溶解度小，易析出黄色针状结晶（

三、实验方法

巴马汀粗品

40ml80%EtOH，加热溶解15min,

趁热抽滤

滤渣滤液

20ml80%EtOH

加热溶解，趁热抽滤

重复数次至滤液无色

滤液

6mol.LHCl调PH2，放置析晶，抽滤

氯化巴马汀

四、注意事项

1、含巴马汀粗品的滤纸撕碎后同巴马汀放入圆底烧瓶中加热溶解；

2、80%EtOH溶剂量以巴马汀粗品量定，3g巴马汀粗品约75ml80%EtOH，溶剂量多，则不易析晶；溶剂量少，则结晶杂质多。

3、滤液要趁热抽滤；

4、滤液调PH前若有析晶，需加热溶解；

5、待析晶溶液，应将瓶壁边有沉淀的部分溶解；

6、析晶时间应为一天以上。

五、促进析晶的方法

1、将瓶盖打开，挥去部分溶剂；

2、用玻棒擦瓶壁，加速析晶；

3、加晶种加速析晶；

4、延长放置时间或低温放置。

六、思考题

1、为什么用HCl调PH值？

2、如何判断结晶的纯度？

3、滤液有析晶时调PH前，会出现什么结果？

（3）巴马汀氢化物的制备

一、目的

1、学习方法；

2、得到四氢巴马汀

二、原理

巴马汀四氢巴马汀（延胡索乙素

三、方法1g氯化巴马汀

30ml50%MeOH加热溶解

溶液

0.8~1.0gNaBH4（边加边摇至无色、无气泡产生时）6molHCl

调PH2至无气泡产生,NH4OH调PH9，静置，抽滤

沉淀

95%EtOH加热（回流）溶解，趁热抽滤

滤液

加2~3倍量的水，摇匀静置，抽滤

延胡索乙素

四、注意事项

1、NaBH4为强还原剂，避免长时间接触空气及用手接触；

2、加NaBH4时充分摇匀，使反应充分；

3、四氢巴马汀在碱液中易氧化成巴马汀。

五、思考题

1、加入NaBH4后，颜色由黄变无色、溶液变混浊的原因？

2、用6molHCl调反应液PH2至无气泡产生的原因？

此时的溶液呈什么现象？

3、用NH4OH调PH9原因、现象？

4、重结晶时，加入水的原因？

（4）鉴定

一、实验目的

1、学习生物碱的TLC检识方法

2、巴马汀、四氢巴马汀的定性鉴别（TLC、m.p.）

二、实验原理

用硅胶板进行巴马汀、四氢巴马汀的TLC检识，选用氨薰的方法避免生物碱在硅胶板上易拖尾的现象。

三、实验方法

1、TLC

点板→氨缸中放5min→展开槽展开→取出察看（可见光、荧光、显色剂）

样品：

巴马汀、四氢巴马汀的样品及对照品，用乙醇溶解

展开剂：

氯仿-甲醇（9：

1）

显色剂：

碘化铋钾

2、m..p.：

显微熔点仪，记录初始熔化时温度及完全溶化时温度。

四、注意事项

1、氨水有刺激性，操作时注意；

2、熔点测定时，样品量要少。

五、思考题

1、生物碱在硅胶板上展开为什么会拖尾？

2、避免生物碱在硅胶板上拖尾的方法有哪些？

3、如何选择生物碱TLC展开剂？

4、本实验在可见光和荧光下检识有什么现象？

为什么？

5、熔点测定时，样品量多会对测定结果有什么影响？

6、从鉴定结果如何判断样品的纯度？

实验二大黄中大黄素的提取、分离和鉴定

（1）酸水解

一、实验目的

1、学习酸水解的方法

2、得到大黄粉酸水解药渣

二、实验原理

大黄中蒽醌类化合物有结合态和游离态两种形式存在，为得到游离蒽醌类化合物，先酸水解，使蒽醌类化合物以苷元的形式游离出来。

三、方法

10g大黄粉

20%H2SO4直火回流加热1小时，抽滤

滤渣

水洗中性，干燥

滤饼

四、注意事项

1、药粉在水洗中性过程中尽量避免损失；

2、药渣干燥前要松散；

3、水解液酸性强，避免用手直接接触。

五、思考题

1、酸水加热为什么要用回流装置？

2、要得到大黄中的蒽醌苷元，还有什么办法？

（2）总羟基蒽醌苷元的提取

一、实验目的

1、学习连续回流提取方法

2、得到大黄中总羟基蒽醌苷元提取物

二、实验原理

苷元为亲脂性成分，用乙醚提取。

三、实验方法

滤饼

置索氏提取器中，加150mlEt2O,

提2.5hr（提取液无色）

Et2O液（大黄中总羟基蒽醌苷元）

四、注意事项

1、纸筒的包法：

原则是药粉不漏出

2、提取器的装法

（1）纸筒的高度不超过侧管的高度；

（2）药粉的高度不超过虹吸管的高度；

（3）线头在管内，保持提取器闭封。

3、溶剂的倒法

50ml由提取器上端倒入，浸泡药粉；100ml倒入平底烧瓶中。

4、温度的控制

溶剂蒸气至冷凝管第二个球处，水浴温度约60℃。

5、实验室禁止明火，实验过程中保持通风，尽量避免乙醚挥出。

6、平底烧瓶要干燥。

五、思考题

1、同回流提取相比，该方法的优点？

2、还可选用哪些溶剂提取？

3、若平底烧瓶中有水，将会有什么结果？

4、为什么温度控制在溶剂蒸气至冷凝管第二个球处？

（3）PH梯度萃取

一、实验目的

1、学习PH梯度萃取的方法和原理

2、得到大黄素粗品

二、实验原理

依据大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的酸性强弱不同，采用强弱不同的碱水萃取，得到大黄素。

三、实验方法

1、分离方法

乙醚液（T）

↓120ml（40mlX3）2.5%NaHCO3

↓-------------------------↓

乙醚液

（1）NaHCO3液

↓120ml（40mlX3）2.5%Na2CO3

↓--------------------------↓

乙醚液

（2）Na2CO3液

↓120ml（40mlX3）2.5%Na2CO3↓调pH3

↓－－－－－－－－↓沉淀　　

Na2CO3液乙醚层（3）

↓100ml（25mlX4）0.5%NaOH

↓－－－－－－↓

NaOH乙醚层（4）

2、TLC跟踪检查

硅胶-CMC-Na

展开剂：

Pet-EtOAc（7:

3）

样品：

乙醚液（T，1-4）

四、注意事项

1、分液漏斗使用前检查是否漏。

2、乙醚提取液倒入分液漏斗中，若有沉淀留在瓶中，用待萃取的碱液洗后再倒入分液漏斗中，直至沉淀全部被溶解。

3、产生乳化层，解决的方法是：

（1）轻摇；

（2）长时间静置；

（3）用电吹风加热

（4）玻棒搅动

（5）抽滤

4、待完全静置分层后放出水层。

五、思考题

1、萃取时碱水层的颜色？

2、比较五种蒽醌类化合物极性大小、酸性大小。

3、在TLC中，五种蒽醌类成分Rf值的大小顺序？

4、萃取大黄素时，碱水中若含少量乙醚，酸化后能得到沉淀吗？

5、判断各种蒽醌类成分分离的依据是什么？

6、你能设计出比该方法更完善的实验条件吗？

写出实验方法及验证方案。

（4）柱色谱精制大黄素

一、实验目的

1、学习硅胶柱色谱分离方法

2、得到大黄素精品

二、实验原理

依据大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚极性差异分离。

三、实验方法

1、装柱方法：

100~200目硅胶10g，用脱脂棉填柱子底端。

要求：

均匀，柱面平整紧密无气泡。

干法装柱：

小漏斗法，下端活塞打开，硅胶均匀地倒入柱中；

湿法装柱：

硅胶用洗脱剂拌均匀至无气泡，下端活塞打开，倒入柱中。

2、加样方法

要求：

原始色带小，均匀。

干法上样：

样品用少量丙酮溶解后，加少许（半牛角匙）硅胶拌匀，将丙酮挥尽后上于柱顶端。

湿法上样：

样品用少量（<1ml）洗脱剂溶解，用吸管移入柱顶端。

3、洗脱收集：

加洗脱剂洗脱，待色带冲下时，用瓶子分段收集。

分段标准：

（1）色带颜色

（2）10~15ml/瓶

洗脱剂：

Pet-EtOAc（7:

3）

4、合并浓缩：

TLC跟踪检查，合并大黄素液，回收至5ml左右。

5、放置析晶

四、注意事项

1、玻璃器皿干燥，无水；

2、装柱时，下端活塞应打开；

3、洗脱剂不能低于柱平面。

五、思考题

1、比较湿法装柱与干法装柱的特点？

2、比较湿法上样与干法上样的特点？

（5）鉴定

一、实验目的

1、蒽醌类化合物的颜色反应

2、大黄素熔点的测定

二、实验内容

1、熔点：

大黄素（256~257℃）

2、颜色反应：

比较大黄素与茜草素的颜色区别（纸片反应）

试剂：

%NaOH，0.5%MgAc2

三、思考题

1、大黄素、茜草素定性反应后的颜色？

结构与呈色的关系？

2、其它鉴别方法

实验三槐类中芦丁的提取、分离与鉴定

（1）芦丁的提取

一、实验目的

1、学习苷类化合物的提取方法

2、得到芦丁粗品

二、实验原理

芦丁在热水中的溶解度为1：

200，冷水中的溶解度为1：

10000，因此，采用热水提取，冷水析出的方法提取得到芦丁。

三、实验方法

20g槐米

400ml沸水，煮1hr，过滤

滤液滤渣

300ml水煮30min，过滤

滤液

放置，抽滤，干燥

芦丁粗品

四、注意事项

1、开始用沸水提取

2、提取液要趁热过滤

3、提取时要不断补充水分

五、思考题

1、苷类化合物提取时应注意什么？

2、提取液为什么要趁热过滤？

3、槐米中的芦丁还能用什么方法提取？

各有什么特点？

请设计方法验证。

（2）芦丁的精制和酸水解

一、实验目的

1、芦丁粗品重结晶，得到芦丁精品；

2、芦丁酸水解，得到苷元槲皮素精品及糖水解液。

二、实验原理

根据芦丁在热水中溶解度大、冷水中溶解度小的性质重结晶；

三、实验方法

芦丁粗品

其余芦丁1g芦丁

水（1：

200）加热溶解2%H2SO4直火回流

趁热抽滤加热30min,抽滤

滤液

放置析晶，抽滤沉淀滤液（PC）

芦丁水洗中性，95%EtOH重结晶

滤液

加2-3倍量水，静置析晶，抽滤

槲皮素

四、思考题

1、芦丁精制时为什么要按1：

200加水？

2、芦丁酸水解时溶液会呈现什么变化？

为什么？

3、槲皮素重结晶时，为什么加2-3倍量水？

（3）槲皮素五乙酰化物的制备

一、实验目的

学习五乙酰化物的制备方法，得到槲皮素的五乙酰化物。

二、原理

试剂：

无水吡啶、乙酸酐

三、方法

200mg槲皮素

4ml吡啶溶解，5ml乙酸酐

空气冷凝管回流加热30min

100ml冷水

搅拌至油滴消失，白色沉淀产生，抽滤

滤饼

95%乙醇重结晶

槲皮素五乙酰物

四、注意事项

1、反应在无水条件下进行，玻璃仪器干燥；

2、反应液迅速倒入冷水中搅拌；

3、注意溶剂的挥发性。

五、思考题

1、该反应为什么在无水条件下进行？

2、反应过程中会出现什么现象？

为什么？

3、加入冷水中的目的？

4、还有什么试剂能用于槲皮素五乙酰化物的制备？

请设计方案并验证。

（4）糖鉴定

一、实验目的

学习纸层析鉴定糖种类的方法，确定糖水解液中糖的种类。

二、实验原理

1、用Ba（OH）2或BaCO3将酸水解液SO4-去除，调PH7；

2、糖的极性差异，Rf值不同，与标准品对照鉴别。

三、实验方法

1、糖水解液的前处理

20ml上清液

加Ba（OH）2或BaCO3，调PH7，抽滤

滤液

直火加热浓缩

1ml浓缩液

2、PC（圆形滤纸法）

展开剂：

n-BuOH-HAc-H2O（4:

1:

1）

显色剂：

苯胺-邻苯二甲酸钠，110C加热至呈色

标准品：

葡萄糖、鼠李糖

四、注意事项

1、加Ba（OH）2或BaCO3调PH值时，注意不要过量，Ba（OH）2或BaCO3在溶液中有溶解的过程；

2、PC时，注意滤纸不能有折痕，不能用圆珠笔标记。

五、思考题

1、比较葡萄糖、鼠李糖Rf值的大小？

2、鉴别苷类化合物的种类还有什么方法？

（5）芦丁、槲皮素的鉴定

一、实验目的

1、学习黄酮类化合和的颜色反应

2、黄酮苷及苷元的聚酰胺层析方法

3、芦丁、槲皮素五乙酰化物熔点测定

二、方法

1、m.p.：

芦丁、槲皮素五乙酰化物

2、芦丁、槲皮素的试管反应：

HCl-Mg反应

Molicsh反应

1%AlCl3

3、芦丁、槲皮素的溶解性

1%NaHCO3

2.5%Na2CO3

0.5%NaOH

4、聚酰胺薄层

展开剂：

95%EtOH

标准品：

芦丁、槲皮素

显色剂：

1%AlCl3

三、思考题

1、芦丁、槲皮素在聚酰胺薄层上的色谱行为？

如果用氯仿-甲醇为展开剂，色谱行为？

2、芦丁、槲皮素在硅胶薄层、PC上的色谱行为？

3、苷类结构的研究内容还有哪些？

用什么方法？

天然药物化学实验

供药学、药物制剂、生物制药专业用

南京中医药大学药物化学教研室