初级检验技师《微生物检验》讲义第13章病原性球菌及检验讲课教案.docx

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初级检验技师《微生物检验》讲义第13章病原性球菌及检验讲课教案

病原性球菌及检验

　　一、葡萄球菌属

（1）分类.......................了解

（2）临床意义...................熟悉

　　（3）生物学特性.................熟练掌握

　　（4）微生物学检验...............熟练掌握

（一）生物学特

　　1.形态与结构

　　本属细菌革兰染色阳性，呈圆球形，直径0.5～1.5μm，不规则排列，形似葡萄串状，在脓汁或液体培养基中，可呈单个、成对或短链排列。

无鞭毛和芽胞，某些菌株能形成荚膜。

　　2.培养特性

　　需氧或兼性厌氧，营养要求不高。

最适pH为7.4，最适温度为35～37℃。

在普通琼脂平板上经37℃24～48h培养，可形成圆形、凸起、表面光滑湿润、边缘整齐、不透明菌落，直径为2～3mm。

可产生不同的脂溶性色素，如金黄色、白色、柠檬色色素。

葡萄球菌可产生α、β、γ和δ溶素。

　　在液体培养基中生长迅速、呈均匀混浊状。

　　3.生化反应

　　本属菌触酶试验阳性，多数能分解葡萄糖、麦芽糖及蔗糖，产酸不产气。

致病性葡萄球菌一般能分解甘露醇产酸、液化明胶和产生血浆凝固酶。

　　4.抗原

　　葡萄球菌的抗原包括蛋白抗原和多糖抗原。

（1）蛋白抗原：

为完全抗原，有种属特异性。

存在于葡萄球菌的表面，具有抗吞噬作用，称葡萄球菌A蛋白（SPA）。

（2）多糖抗原：

是半抗原，具有型特异性。

　　协同凝集试验

　　5.分类

（1）《伯杰系统细菌学手册》（1986）据DNA及表型特征等将葡萄球菌分为19个种。

继之，各国学者又从人和动物中检出数种凝固酶阴性葡萄球菌新种，共27种。

（2）古典分类法：

根据其产生色素的不同分为金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌和柠檬色葡萄球菌。

　　1965年，葡萄球菌国际分类委员会将葡萄球菌分为凝固酶阳性与凝固酶阴性葡萄球菌（CNS），凝固酶阳性葡萄球菌主要为金黄色葡萄球菌。

CNS常包括表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌。

　　6.抵抗力

　　对理化因素抵抗力强，耐热，耐干燥，耐高盐，是抵抗力最强的无芽胞细菌。

（二）致病性

　　1.侵袭性疾病

　　⑴皮肤及软组织感染，如毛囊炎、疖、痈等；

　　⑵全身性感染，如败血症、脓毒血症、骨髓炎、心内膜炎、脑膜炎等；

　　⑶呼吸道感染，如支气管肺炎、肺炎、脓胸等；

　　⑷医院内感染。

　　2.毒素性疾病

　　①食物中毒，急性胃肠炎；

　　②烫伤样皮肤综合征；

　　③中毒性休克综合征；

　　④葡萄球菌性肠炎。

　　（三）检验方法及鉴定

（1）直接镜检：

无菌取脓汁、痰、渗出物和脑脊液（离心后取沉渣）涂片，经革兰染色后镜检，如为革兰阳性球菌呈葡萄串状排列可初步报告为：

“查见革兰阳性葡萄状排列球菌，疑为葡萄球菌”。

（2）分离培养：

血液标本（静脉血约5m1）注入50ml葡萄糖肉汤或含硫酸镁肉汤增菌培养，置35℃，一般于24h后若出现混浊，溶血及胶冻状生长，则接种于血琼脂平板，进一步鉴定，若无细菌生长，于48～72h后（一般以7天为限），接种血琼脂，以确定有无细菌生长。

　　脓汁、尿道分泌物、脑脊液可直接接种血琼脂平板。

35℃18～24h，可见直径2～3mm，产生不同色素的菌落。

金黄色葡萄球菌在菌落周围有透明的溶血环。

　　尿液标本，必要时作细菌菌落计数（CFU/ml）。

　　粪便、呕吐物接种高盐甘露醇琼脂平板，经35℃18～24h培养，可形成细小菌落，48h后形成典型菌落。

　　（3）鉴定试验

　　1）触酶试验：

细菌产生的过氧化氢酶催化H2O2生成水和氧气。

方法：

取营养琼脂上的菌落置于洁净试管内或洁净玻片上，滴加3%H2O2溶液数滴，观察结果，如立即（1min内）有大量气泡产生为阳性，不产生气泡为阴性。

葡萄球菌属为触酶阳性。

　　2）血浆凝固酶试验：

血浆凝固酶是金黄色葡萄球菌所产生的一种与其致病力有关的侵袭性酶，分游离型和结合型两种。

其作用是使血浆中的纤维蛋白在菌体表面沉积和凝固以阻碍吞噬细胞的吞噬。

　　可分别用试管法和玻片法检测。

玻片法用于粗筛，若玻片法为可疑或阴性结果，还需用试管法确证。

　　3）甘露醇发酵试验。

　　4）新生霉素敏感试验：

凝固酶阴性的葡萄球菌的鉴别，采用新生霉素敏感试验。

一般新生霉素耐药者多为腐生葡萄球菌，敏感者为表皮葡萄球菌。

　　金黄色葡萄球菌：

触酶试验阳性、血浆凝固酶试验阳性、甘露醇发酵试验阳性、对新生霉素敏感。

　　表皮葡萄球菌：

触酶试验阳性、血浆凝固酶试验阴性、对新生霉素敏感。

　　腐生葡萄球菌：

触酶试验阳性、血浆凝固酶试验阴性、对新生霉素耐药。

　　报告：

检出“XXX葡萄球菌”。

　　（5）临床意义：

葡萄球菌感染的特点是感染部位组织的化脓、坏死和脓肿形成。

金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌是引起临床感染最常见的葡萄球菌。

　　1）金黄色葡萄球菌常引起疖、痈、外科伤口、创伤的局部化脓性感染，播散入血后可引起深部组织的化脓性感染。

此外，其产生的肠毒素可引起食物中毒，表现为急性胃肠炎。

主要致病物质有血浆凝固酶、葡萄球菌溶素、杀白细胞素、肠毒素、表皮溶解毒素和毒性休克综合征毒素等。

　　2）表皮葡萄球菌是存在于皮肤的正常栖居菌，由于各种导管植入和人造组织的使用，该菌已成为医院感染的重要病原菌，它是导致血培养污染的常见细菌之一。

　　3）腐生葡萄球菌可导致尿路感。

　　二、链球菌属

　　链球菌属为触酶阴性，兼性厌氧，呈圆形或卵圆形的革兰阳性球菌，在液体培养基中生长时易形成长链而表现为沉淀生长（但肺炎链球菌为混浊生长）。

（一）生物学特性

　　1.形态与染色

　　菌体呈圆形，直径为0.8～1.0μm，呈链状排列。

在脓汁标本中为短链，成双或单个散在。

革兰染色阳性。

无鞭毛、无芽胞，某些菌株在血清肉汤中可有荚膜。

　　2.培养特性

　　本属细菌大多为需氧或兼性厌氧菌，少数专性厌氧。

营养要求较高，最适温度为35～37℃，最适pH为7.4～7.6，在5%CO2环境下生长更好。

（1）在液体培养基如血清肉汤中，溶血性菌株呈絮状或颗粒状沉淀生长。

不溶血菌株则浑浊生长。

（2）在血琼脂平板上，经37℃18～24h培养后可形成灰白色、圆形、凸起、直径为0.1～0.75mm细小菌落，菌落周围出现不同溶血环。

　　3.生化反应

　　本属细菌触酶试验阴性，能分解葡萄糖产酸不产气，对其他糖类的分解因不同菌株而异。

有些链球菌分解精氨酸、产氨、水解七叶苷、马尿酸盐及淀粉等。

还有些链球菌可耐受6.5g%NaCl和胆汁。

　　A群链球菌对杆菌肽敏感；

　　B群链球菌CAMP试验阳性，可水解马尿酸钠；

　　七叶苷试验阳性用于鉴定D群链球菌；

　　α-溶血性链球菌对optochin耐药，不被胆汁溶解，不分解菊糖，可与肺炎链球菌相鉴别。

　　4.分类

（1）根据链球菌在血平板上溶血情况分为三类：

　　1）甲型（α）溶血性链球菌：

菌落呈灰色针尖状，菌落周围有1～2mm宽的草绿色溶血环，故又称草绿色链球菌。

本菌为条件致病菌。

　　2）乙型（β）溶血性链球菌：

通称溶血性链球菌，菌落较小，灰白色，菌落周围有2～4mm宽的透明溶血环。

该型细菌致病性最强，常引起人和动物多种疾病。

　　3）丙型（γ）链球菌：

呈灰白色细小菌落，在菌落周围无溶血环。

一般无致病性。

（二）致病性

　　A群、B群及肺炎链球菌是链球菌属的3种重要致病菌。

　　主要的致病物质有链球菌溶血素、致热外毒素、透明质酸酶、链激酶、链道酶及M蛋白等。

　　人类链球菌感染中85%以上由A群链球菌引起，所致疾病主要有三类。

　　A群链球菌引起的所致疾病主要有三类。

　　1.急性化脓性感染

　　如丹毒、痈、蜂窝组织炎、咽炎、鼻窦炎、中耳炎、脑膜炎、产褥热等。

　　2.猩红热

　　多由A群链球菌感染所致。

　　3.链球菌感染后变态反应性疾病

　　主要有风湿热和肾小球肾炎，前者表现为关节炎和心脏病。

　　其他链球菌感染

　　如草绿色链球菌，属条件致病菌，常与亚急性心内膜炎相关。

B群链球菌，是新生儿肺炎、脑膜炎和败血症的病原体。

此外，D群链球菌引起呼吸道和泌尿道感染。

　　（三）微生物检验

　　1.标本采集

　　根据链球菌感染所致疾病不同，可采集脓汁、咽拭、痰、血、尿等标本。

　　2.检验方法及鉴定

（1）直接镜检：

革兰染色，如符合链球菌的形态特征可初报。

（2）直接检测抗原。

　　（3）分离培养：

血液标本，以无菌操作取两份血液各8～10ml，分别注入肉汤培养基，分别置需氧和厌氧环境中增菌有细菌生长，然后分别接种于两个血平板，置需氧和厌氧环境中培养。

脓汁和咽拭标本接种血平板并涂片染色镜检，若形态酷似链球菌，并革兰染色阳性，可初报。

上述的培养物经35℃18～24h培养后，观察菌落特征和溶血情况。

　　链球菌的菌落通常较小，透明或半透明，似针尖大小、凸起，菌落周围可出现α溶血或β溶血，也可不出现溶血。

　　然后取可疑菌落经涂片、染色镜检证实。

甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌可产生α溶血，它们的菌落形态非常相似，应予以区别。

　　（4）鉴定

　　1）胆汁七叶苷试验：

因D群链球菌能在40%胆汁培养基中生长，并可分解七叶苷，使培养基变黑；

　　2）Optochin敏感性试验：

几乎所有的肺炎链球菌菌株都对Optochin敏感，而其他链球菌通常不被其所抑制；

　　3）马尿酸盐水解试验：

B群链球菌具有马尿酸氧化酶，使马尿酸水解；

　　4）CAMP试验：

羊血平板上B群链球菌与金葡菌协同形成箭头状溶血；

　　5）杆菌肽敏感试验：

化脓性链球菌为阳性。

　　经涂片染色，分离培养和鉴定试验后即可报告：

“检出XXX链球菌”。

　　习题

　　腐生葡萄球菌是下列疾病的常见致病菌

　　A.亚急性细菌性心内膜炎

　　B.类风湿关节炎

　　C.尿路感染

　　D.风湿热

　　E.蜂窝织炎

『正确答案』C

『答案解析』腐生葡萄球菌是尿路感染的常见致病菌。

　　链球菌与葡萄球菌可用作属间初步鉴别的试验是

　　A.DNA试验

　　B.触酶试验

　　C.氧化酶试验

　　D.葡萄糖发酵试验

　　E.蔗糖氧化试

『正确答案』B

『答案解析』链球菌触酶试验阴性，葡萄球菌触酶试验阳性。

go去wentgone

　　杆菌肽敏感试验阳性为

　　A.A群链球菌

　　B.B群链球菌

　　C.C群链球菌

　　D.D群链球菌

　　E.F群链球菌

may可以might×  

feed喂fedfedbet赌betbet『正确答案』A

『答案解析』A群链球菌杆菌肽敏感试验阳性。

prove证明provedproved/proven

sow种植sowedsown/sowed　　从混有杂菌标本中分离葡萄球菌的首选培养基是

　　A.巧克力琼脂培养基

　　B.EMB培养基

　　C.卵黄双抗培养基

　　D.高盐甘露醇培养基

　　E.卵黄甘露醇培养基

『正确答案』D

『答案解析』从混有杂菌标本中分离葡萄球菌的首选培养基是高盐甘露醇培养基。

　　CAMP试验阳性结果的溶血特点是

　　A.环状

　　B.球状

　　C.箭头状

　　D.线条状

　　E.点状

steal偷stolestolenswim游泳swamswum『正确答案』C

『答案解析』CAMP试验阳性结果的溶血特点是箭头状。

baby-sit临时照顾baby-satbaby-satswear发誓sworesworn　　链球菌分类的依据是

　　A.能否产生血浆凝固酶

　　B.产生色素颜色的不同

　　C.鞭毛抗原的不同

　　D.在血琼脂培养基中溶血现象

　　E.传播途径的不同

put放置putput『正确答案』D

『答案解析』链球菌分类的依据是在血琼脂培养基中溶血现象。

ride骑roderidden

burn燃烧burnt/burnedburnt/burned　　可与IgGFc段结合的细菌表面蛋白是

　　A.M蛋白

　　B.Vi抗原

　　C.葡萄球菌表面蛋白A

　　D.炭疽杆菌荚膜多糖抗原

　　E.大肠埃希菌K抗原

throw投/扔threwthrown『正确答案』C

『答案解析』葡萄球菌表面蛋白A可与IgGFc段结合。

leave离开leftleft

hold拿住heldheld　　各型链球菌中，致病力最强的是

　　A.甲型溶血性链球菌

　　B.乙型溶血性链球菌

　　C.丙型链球菌

　　D.B群链球菌

　　E.D群链球菌

say说saidsaid  

beat击打beatbeaten

fight作战foughtfought『正确答案』B

『答案解析』乙型溶血性链球菌是致病力最强的链球菌。

make制作mademade

　　风湿热的辅助诊断应采用

　　A.细菌培养

　　B.OT试验

　　C.ASO试验

　　D.串珠试验

　　E.Widal试验

『正确答案』C

『答案解析』ASO试验可辅助诊断风湿热。

　　无芽胞细菌中抵抗力最强的是

　　A.伤寒杆菌

　　B.大肠埃希菌

　　C.志贺菌

　　D.金黄色葡萄球菌

　　E.乙型溶血性链球菌

『正确答案』D

『答案解析』无芽胞细菌中抵抗力最强的是金黄色葡萄球菌。

　　SAP可用于

　　A.凝集反应

　　B.沉淀反应

　　C.补体结合反应

　　D.协同凝集反应

　　E.中和反应

『正确答案』D

『答案解析』SPA可用于协同凝集反应

　　三、肺炎链球菌

　　肺炎链球菌属链球菌科，链球菌属。

（一）生物学特性

　　1.形态与染色

　　本菌为革兰阳性球菌。

呈矛尖状，成双排列，有时呈短链状，直径0.5～1.25μm，有荚膜，无鞭毛，无芽胞。

　　（革兰染色，×1000）痰液中的肺炎链球菌（革兰染色，×1000）

　　2.培养特性

　　需氧或兼性厌氧。

最适的温度为35～37℃，最适的pH7.6～8.0。

营养要求较高，在含3%～5%血清肉浸液中生长良好。

在血琼脂平板上可形成灰色扁平、直径为0.5～1.0mm的菌落，周围有草绿色溶血圈。

　　在液体培养基中培养24h，呈均匀混浊。

但培养时间过长，可因产生自溶，培养液可变澄清，管底沉淀。

　　3.生化反应分解菊糖、胆汁溶解试验、Optochin敏感试验。

上述三种试验可作为肺炎链球菌与草绿色链球菌的鉴别。

（二）致病性

　　所致疾病主要有大叶性肺炎、支气管炎。

可继发胸膜炎、脓胸，也可引起中耳炎、鼻窦炎、脑膜炎及败血症。

　　（三）微生物学检验

　　1.标本采集

　　2.检验方法及鉴定

（1）直接涂片检查：

除血液标本，其他标本均可作直接涂片检查。

经革兰染色，镜检见革兰阳性矛尖状双球菌。

（2）分离培养：

血液、脑脊液需增菌培养，经葡萄糖硫酸镁肉汤增菌后，肺炎链球菌可呈均匀混浊，而且有绿色荧光。

无须增菌培养的脓汁或脑脊液沉渣接种于血琼脂，置5%～10%CO2环境中，经35℃18～24h培养后观察菌落，并取可疑菌落作进一步鉴定。

　　（3）鉴定试验

　　1）胆汁溶解试验：

阳性。

　　2）菊糖发酵试验：

阳性。

　　3）动物试验：

小白鼠对肺炎链球菌极为敏感。

　　4）荚膜肿胀试验：

阳性。

　　5）Optochin敏感试验：

阳性。

　　经涂片染色，分离培养和鉴定试验后即可报告：

　　“检出XXX链球菌”。

　　Optochin试验阳性Optochin试验阴性

　　结果：

抑菌圈直径大于14mm为敏感，小于或等于14mm为阴性。

　　四、肠球菌属

　　肠球菌属是肠道的正常菌群。

对营养要求较高。

在血平板上主要表现为γ-和α-溶血。

触酶阴性。

与同科链球菌的显著区别在于肠球菌能在高盐（6.5%NaCl）、高碱（pH9.6）、40%胆汁培养基上和10～45℃环境下生长，并对许多抗菌药物表现为固有耐药。

　　目前，肠球菌是革兰阳性菌中仅次于葡萄球菌属的重要医院感染病原菌，最常见的为尿路感染，其次为腹部和盆腔等部位的创伤和外科术后感染。

临床上分离率最高的是粪肠球菌，其次是屎肠球菌。

粪肠球菌的某些菌株在马血、兔血平板上出现β溶血环。

（一）生物学形状

　　为革兰阳性，成双或短链状排列的卵圆形球菌，无芽胞，无荚膜，部分肠球菌有稀疏鞭毛，营养要求高，需氧及兼性厌氧，触酶阴性，在胆汁七叶苷和含6.5%NaCl培养基中可以生长，此点可与链球菌鉴别。

（二）微生物检验

　　合理采取相应标本，如尿液、脓汁、胆汁、分泌物或血液等，以直接涂片进行初步检查。

分离培养后，挑取可疑菌落，进行涂片、染色、镜检、触酶试验、胆汁七叶苷试验和6.5%NaCl耐受试验，可鉴定到属。

如鉴定到种还需进行必要的生化试验。

　　对具有临床意义的肠球菌应进行体外药敏试验，一般要测试对β-内酰胺类尤其是青霉素类、万古霉素和氨基糖苷类（如庆大霉素）的敏感性。

根据对庆大霉素的敏感性水平，可将庆大霉素耐药的肠球菌分为庆大霉素高水平耐药株和庆大霉索低水平耐药株。

　　（三）临床意义

　　常可引起尿路感染，其中大部分为医院感染，还可以引起老年人及有严重基础病患者败血症。

另外也可以引起腹腔感染、胆管炎及心内膜炎，脑膜炎少见。

　　五、奈瑟菌属

　　奈瑟菌属为一大群革兰阴性双球菌，无鞭毛，无芽胞，有菌毛。

专性需氧，氧化酶阳性。

本属主要有9个种。

其中对人致病的是脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌。

（一）脑膜炎奈瑟菌

　　脑膜炎奈瑟菌简称脑膜炎球菌，是引起流行性脑脊髓膜炎（简称流脑）的病原体。

菌有稀疏鞭毛，营养要求高，需氧及兼性厌氧，触酶阳性，在胆汁七叶苷和含6.5%NaCl培养基中可以生长，此点可与链球菌鉴别。

　　1.生物学特性

（1）形态与染色：

为革兰阴性双球菌，菌体呈肾形，成对排列，坦面相对。

在患者的脑脊液中位于中性粒细胞内。

（2）培养特性：

营养要求高，必须在含有血清或含有多种氨基酸，无机盐等物质的培养基上生长良好。

　　（3）生化反应：

绝大多数菌株能分解葡萄糖和麦芽糖，产酸不产气（因淋病奈瑟菌不分解麦芽糖，借此与之鉴别），不分解乳糖、甘露醇、半乳糖和果糖，硝酸盐还原试验阴性。

不分解尿素、不产生H2S和靛基质，触酶试验阳性，氧化酶试验阳性。

　　（4）抗原及分型：

主要有四种抗原：

荚膜多糖群特异性抗原、外膜蛋白型特异性抗原、脂多糖抗原及核蛋白抗原。

根据群特异性荚膜多糖抗原不同，采用凝集反应和琼脂扩散试验可将本菌分为A、B、C、D、X、Y、Z、29E、W135等。

　　目前，对人致病的主要是A群，偶见B群、C群引起散发病例。

　　2.微生物检验

（1）标本采集：

因本菌能产生自溶酶，易自溶，故采集的标本不宜置冰箱，应立即送检。

（2）检验方法及鉴定

　　1）直接涂片检查：

标本涂片、干燥固定后革兰染色，若发现中性粒细胞内（或胞外）革兰阴性双球菌，呈肾形成对排列，可初报。

　　2）分离培养：

将标本葡萄糖肉汤增菌培养液直接接种子血琼脂平板、巧克力琼脂或EPV琼脂，置5%～10%CO2环境中，35～37℃培养18～24h后可见圆形、灰褐色、湿润、光滑、边缘整齐、直径1～2mm的小菌落，经涂片证实为革兰阴性双球菌，并迸一步根据相应的生化反应等试验予以鉴定。

　　卵黄双抗培养基（EPV）：

含万古霉素（革兰阳性菌）和多黏菌素（革兰阴性杆菌）。

用于分离脑膜炎奈瑟菌

　　3）鉴定：

①细菌染色形态；②氧化酶试验阳性；③触酶试验阳性；④分解葡萄糖、麦芽糖、产酸不产气；⑤荚膜多糖抗原直接凝集试验。

　　直接镜检形态为革兰染色阴性双球菌时可初报，经分离培养后见菌落特征典型、生化反应能力弱，只分解葡萄糖、麦芽糖、产生少量酸，氧化酶试验阳性。

血清凝集试验阳性，即可报告“检出脑膜炎奈瑟菌”。

　　3.临床意义

　　脑膜炎奈瑟菌是流行性脑脊髓膜炎的病原菌。

存在于携带者或病人的鼻咽部，借飞沫经空气传播，冬未春初为流行高峰。

　　4.治疗原则

　　青霉素G为首选，三代头孢对脑膜炎奈瑟菌也具有很强的抗菌活性。

青霉素过敏的病人可考虑选用三代头孢或氯霉素。

（二）淋病奈瑟菌

　　淋病奈瑟菌简称淋球菌，是淋病的病原体，人类是其唯一的天然宿主。

　　1.生物学特性

（1）形态与染色：

本菌的形态与脑膜炎奈瑟菌很相似。

在脓汁标本中，此菌通常位于中性粒细胞内，而在慢性淋病时常位于细胞外。

从患者体内新分离的菌株可有荚膜和菌毛。

（2）培养特性：

本菌最适pH为7.5，最适温度为35～37℃。

营养要求较高，须在含有血液、血清或多种氨基酸和无机盐类物质的培养基上生长良好。

国内常用血液琼脂、巧克力琼脂、EPV琼脂等培养基。

初次分离时，须置5%～10%CO2条件下才能生长发育。

经24～48h培养后，可见表面光滑、凸起、半透明、露滴状菌落。

　　（3）生化反应：

对糖类生化活性最低，本菌可发酵葡萄糖、产酸，但不酵解麦芽糖（常借此与脑膜炎奈瑟菌相鉴别）、蔗糖和乳糖。

氧化酶和触酶试验均阳性。

主要有三种抗原：

菌毛蛋白抗原、脂多糖抗原和外膜蛋白抗原。

对外界抵抗力极低。

　　2.微生物检验

（1）标本采集：

脓性分泌物，尿道拭子，宫颈口分泌物，眼结膜分泌物，血液。

（2）检验方法及鉴定

　　1）直接涂片检查：

收集标本后立即涂片、革兰染色，镜检时见中性粒细胞内数对革兰阴性双球菌，可初诊。

　　2）分离培养：

所采集的标本应及时接种含有两种以上抗生素（万古霉素和多黏菌素等）的营养培养基上。

淋球菌对培养基的营养要求很高，且对冷、热、干燥和消毒剂抵抗力低，故采样后须立即接种于预温的选择性培养基和非选择性培养基中，如巧克力平板，置于含5%～10%的CO2中，35℃培养48h，取小而透明似水滴状、无色素易乳化菌落进一步鉴定。

　　3）鉴定：

取可疑菌落进行涂片，革兰染色镜检，若见革兰阴性双球形，进一步鉴定试验有①生化反应：

氧化酶阳性，仅分解葡萄糖产酸；②免疫学方法：

荧光抗体染色法、协同凝集试验；③核酸探针杂交法。

氧化酶试验阳性，可初判，并进行相关的生化反应，如仅发酵葡萄糖而不发酵麦芽糖，可与脑膜炎奈瑟菌等相鉴别。

　　3.临床意义

　　淋病奈瑟菌是常见的性传播疾病淋病的病原菌，如单纯性淋病，淋菌性结膜炎。

　　4.治疗原则

　　对青霉素和四环素耐药的淋病奈瑟菌越来越多，目前一线用药一般为三代头孢菌素，氟喹诺酮类、壮观霉素可作为替代药物。

对氟喹诺酮类、壮观霉素的耐药也有报道，目前尚未发现对头孢三嗪耐药。

　　六、卡他布兰汉菌

　　本菌为革兰阴性双球菌，形态上不易与脑膜炎奈瑟菌鉴别，营养要求不高，在普通培养基上18～20℃即可生长，借此可与脑膜炎奈瑟菌鉴别。

需氧，菌落光滑，直径约1～3mm，不透明，灰白色，菌落易从培养基上刮下。

产生DNA酶，大部分菌株还原硝酸盐和亚硝酸盐，借此可与奈瑟菌属相鉴别。

　　本菌可存在于健康人群的上呼吸道，仅十年来报到该菌是导致中耳炎、鼻窦炎、慢性阻塞性肺炎的病原体。

　　EPV琼脂用于培养

　　A.链球菌

　　B.葡萄球菌

　　C.肺炎链球菌

　　D.脑膜炎奈瑟菌

　　E.肠球菌

『正确答案』D

『答案解析』EPV琼脂用于培养脑膜