食品中微生物的检验方法.docx
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食品中微生物的检验方法
食品中微生物的检验
一、概念和分类
微生物并不是生物学分类学上的专门名词,而是对所有形体微小,单细胞的或个体结构较为简单的多细胞的、甚至没有细胞结构的低等生物的统称。
微生物群体非常庞杂,种类繁多,包括细胞型和非细胞型两类。
凡具有细胞形态的微生物称为细胞型微生物。
细胞型微生物按细胞结构又分为原核微生物和真核微生物。
原核生物的主要特点:
细胞内有明显的核区,但没有核膜包围;核区内含有一条双链DNA构成的染色体;能量代谢和很多合成代谢均在质膜上进行,核糖体分布在细胞之中;相对于原核微生物,真核微生物的细胞结构有了真正的细胞核,有多种细胞器;而病毒则不具有细胞结构,由核酸和蛋白质组成,可以认为是超显微的、没有细胞结构的、专性活细胞内寄生的实体。
它们在活细胞外具有一般化学大分子的特征,在宿主细胞内又具有生命特征。
可以作为了解的是,病毒可以通过细菌滤器,且对抗生素不敏感,对干扰素敏感。
二、细菌、霉菌、酵母菌和致病菌介绍
细菌的细胞结构在原核生物中具有代表性,主要由细胞壁、细胞膜、细胞质、核质体等部分构成,有的细菌还有夹膜、鞭毛、菌毛等特殊结构。
在自然界中细菌是分布最广、数量最多的一类生物,并与食品关系最为密切。
是食品理论、工业发酵和酿造研究的主要对象,也是导致食品腐败的主要类群。
细菌的基本形态有球状、杆状和螺旋状,分别被称为球菌、杆菌和螺旋菌。
霉菌是一些丝状真菌的统称。
在自然界分布极广,它的营养来源主要是糖类和少量氮、矿物盐等,极易在含糖的食品、饼干、面包和各种谷物、水果上生长。
经常会有食品会因为发生霉变而不能食用,还有些霉菌会产生毒性很大的毒素,比如黄曲霉素、黄米毒素、杂色曲霉素和展青霉素等等,都可能导致癌症,这类霉菌在大米和花生中最多。
由此,对霉菌的检测尤为重要。
霉菌菌体是由分支或不分支的菌丝组成,菌丝细胞均由细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核、线粒体、核糖体以及内含物组成。
在固体培养基上,部分菌丝深入培养基内吸收养料,称为营养菌丝;另一部分则向空气生长,称为气生菌丝;有的气生菌丝发育到一定阶段分化为繁殖菌丝。
霉菌的菌落一般比细菌菌落大几倍到几十倍,同一种霉菌,在不同成分的培养基上形成的菌落特征可能有变化,但各种霉菌,在一定的培养基上形成的菌落大小、形状、颜色等却相对稳定。
菌落特征也是鉴定霉菌的重要依据之一。
酵母菌多数为单细胞,一般呈圆形、椭圆形、圆柱形或柠檬形,也有些酵母菌细胞与其子代细胞连在一起成为链状,形成假菌丝,称为假丝酵母。
酵母菌在适宜的培养基上形成的菌落与细菌相似,但比细菌菌落大而且厚,菌落表面湿润、粘稠、易被调起,有些种因培养时间太长使菌落表面皱缩。
三、培养基(北京陆桥)
1、微生物的营养
微生物同其他生物一样,需要不断地从外部环境中获取营养,才能够维持生命。
微生物细胞主要有水、有机物和无机盐等化学成份组成,不同的微生物种类其细胞的化学组成也不相同,而且含量也有差异。
因此,维持微生物生长所需要的化学元素的种类与含量也不相同。
一般来说细胞含有某种元素的量高则细胞对这种元素的需要量也就大,含量低则需要量也小。
这也是为什么我们不同的微生物培养要选择不同的培养基。
另外,同一种微生物在不同的培养基上的菌落形态也有差别,所以在选择培养基是要注意。
微生物所需要的营养物质按照它们在机体中的生理作用不同,可以分为碳源、氮源、无机盐和生长因子四种类型。
能被微生物用来构成细胞物质的或代谢产物中碳(氮)素来源的营养物质称为碳(氮)原物质;无机盐为微生物机体提供金属元素;有些微生物在含有氮源、碳源、无机盐的培养基上人不能生长,而需要添加某些生长因子,满足生长的需要,比如维生素、氨基酸、嘌呤碱基等。
我们经常用到营养物质:
单糖、淀粉等(碳源);尿素、硫酸铵、蛋白胨、牛肉膏等(氮源);硫酸锌等(无机盐)。
2、培养基配制
培养基是人工配制的合适于不同微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质,是进行微生物培养的基础。
配制培养基需要遵循一定的原则:
第一,根据不同微生物的营养需要配制不同的培养基;
自养型微生物合成能力强,可以利用简单的无机物质合成复杂的细胞物质,其培养基可以由简单的无机物质组成。
而异样型微生物合成能力差,不能以无机物质作为唯一营养源,就要在培养基中添加一些有机物质(比如葡萄糖等)。
另外细菌和酵母菌对培养基的要求也不同,细菌一般用牛肉膏蛋白胨培养基培养,而酵母菌则用麦芽汁培养基培养。
第二,注意各种营养物质的浓度和配比;
微生物生长所需要的营养物往往是在浓度合适的条件下才表现出良好的作用,浓度大时反而对微生物生长期抑制作用。
微生物只有在适合生长的条件下,才表现出应有的形态特征,而不适合的条件下生长,会是微生物的形态特征发生改变。
第三,将培养基的pH控制在一定的范围之内,满足不同类型微生物的生长繁殖或积累代谢产物。
各种微生物生长的最适pH各不相同,一般来说,细菌生长的pH在中性和微碱性之间(pH在7-7.5),酵母菌和霉菌生长的pH值通常是偏酸的(pH在4.5-6)。
另外由于微生物在生长和代谢过程中,由于营养物质的利用和代谢产物的形成与积累,会改变培养基的pH值,如果不及时控制,往往会导致生长停止。
因此,为了维持培养基pH的相对恒定,通常在培养基里加一些缓冲剂或不溶性的碳酸盐。
3、培养基的类型及应用
培养基的种类很多,按培养基组成物质的化学成分分为合成培养基和天然培养基;根据物理状态不同分为固体培养基、半固体培养基和液体培养基(常用凝固剂有琼脂、明胶和硅胶,硅胶是由无几的硅酸钠和硅酸钾被盐酸及硫酸中和时凝聚而成的胶体,不含有机物,因而适合于用来分离和培养自养型微生物);根据培养基的特殊用途,可将培养基分成基础培养基、加富培养基、选择培养基、鉴别培养基等。
基础培养基:
含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物质的培养基。
牛肉膏蛋白胨培养基是最常用的基础培养基;
加富培养基:
在普通培养基上加入其他营养物质,用以培养某种或某类营养要求苛刻的一样微生物;
选择培养基:
根据某种或某一类微生物的特殊营养需求或对某种化合物的敏感性不同而设计出来的一类培养基。
利用这种培养基可以将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来。
比如,我们在培养基中加入青霉素或者四环素等抗生素(生长抑制剂,抑制细菌和放线菌生长),可以分离酵母菌和霉菌;通过在培养基中加入结晶紫或提高培养基中氯化钠的浓度(7.5%),可以从混杂的微生物群体中分别分离出革兰氏阴性菌或葡萄球菌;加孔雀石绿可以分离出革兰氏阳性菌。
鉴别培养基:
在普通培养基内加入某种试剂或化学药品,使得某种微生物在这个培养基上生长后,可以产生某种代谢产物,这种代谢产物可以与培养基中的特定试剂或化学药品起反应,产生某种明显的特征性变化。
根据这种特点来区分微生物。
比如:
大肠菌群测定中,液体培养基中加入溴甲酚紫和发酵管,来指示微生物生长过程中是否产酸产气;伊红美蓝培养基是一种鉴别培养基,常用于检查乳制品和饮用水中是否含有致病性的肠道细菌,伊红为酸性染料,美蓝则为碱性染料。
当大肠杆菌发酵乳糖产生混合酸时,与伊红染色,再与美蓝结合生成紫黑色化合物。
在此培养基上生长的大肠杆菌形成呈紫黑色带金属光泽的小菌落。
而产气杆菌则形成呈棕色的大菌落。
不能发酵乳糖的细菌产碱性物较多,带负电荷,与美蓝结合,被染成蓝色菌落。
还可以加入明胶,看液化明胶的情况。
四、微生物检验
食品中的微生物检验项目主要有四个:
菌落总数、大肠菌群、霉菌和酵母菌、致病菌。
其中致病菌又主要包括沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌。
首先,我们看一下菌落总数的测定。
我们先弄清楚几个概念什么是菌落、菌落总数和细菌总数?
我们都知道单个细菌用肉眼是看不见的,但是,当单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时,便会形成一个肉眼可见的,具有一定形态结构的子细胞群体,这就是菌落。
而菌落总数就是指食品经过检样处理,在一定条件下进行培养后(如培养基成分、培养温度和时间、PH、需氧性质等),所得1mL(g)检样中所含菌落的总数。
更确切地说即在需氧情况下,36℃±1℃培养48h,能在普通营养琼脂平板上生长的菌落总数,所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌,由于现有条件不能满足其生理需求,故难以繁殖生长。
因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数,菌落总数并不能区分其中细菌的种类,所以有时被称为杂菌数,需氧菌数等。
可见把菌落总数就等同于细菌总数是不确切的。
我们可以看看长在营养琼脂平板上最常见的菌落形态,当然并不是所有的菌落都会长的这么规则,而且也不是所有的菌落都会长的这么大,像葡萄酒、水这样的样品长出的菌落就会很小。
这就需要我们借助放大镜来观察,防止漏数菌落数。
弄清这几个概念后,我们就来看一下菌落总数测定的具体操作步骤:
(1)以无菌操作,将检样25g(25ml)剪碎放于含有225ml,灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内,经充分振摇或研磨做成1:
10的均匀稀释液。
固体检样最好用均质器以8000-10000r/min的速度处理1min,做成1:
10的均匀稀释液。
(2)用1ml灭菌吸管吸取1:
10稀释液1ml,沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液),振摇试管,混合均匀,做成1:
100的稀释液。
(3)另取1ml灭菌吸管,按上面操作顺序,做10递增稀释液,如此每增加一次,即换用1支1ml灭菌吸管。
(4)根据样品卫生标准要求或对样本污染情况进行估计,选择2-3个适宜稀释度,分别在做10倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。
(5)稀释液移入平皿后,应及时(从检样稀释到倾注平板不超过20min)将凉至46℃左右营养琼脂培养基注入平皿内15ml,并转动平皿使混合均匀。
同时,将营养琼脂培养基倾入不加有1ml稀释液的灭菌平皿内作空白对照。
(6)待琼脂凝固后,翻转平板,置36±1℃温箱内培养48±2h,。
取出计算平板内菌落数目,乘以稀释倍数,即得每克(每毫升)样品所含菌落总数。
在操作过程中要注意几个事项:
1.操作中必须有“无菌操作”的概念,所用玻璃器皿必须是完全灭菌的。
所用剪刀、镊子等器具也必须进行灭菌处理。
样品如果有包装,应用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。
操作应当在超净工作台或经过消毒处理的无菌室进行。
2.采样的代表性:
如系固体样品,取样时不应集中一点,宜多采几个部位。
固体样品必须经过均质或研磨,液体样品须经过振摇,以获得均匀稀释液。
3.倾注用培养基应在46℃水浴内保温,温度过高会影响菌的生长,过低琼脂易于凝固而不能与菌液充分混匀。
如无水浴,应以皮肤感受较热而不烫为宜。
4.倾注培养基的量规定不一,从12~20ml不等,一般以15ml较为适宜,平板过厚可影响观察,太薄又易于干裂。
倾注时,培基底部如有沉淀物,应将底部弃去,以免与菌落混淆而影响计数观察。
5.为使菌落能在平板上均匀分布,检液加入平皿后,应尽快倾注培养基并旋转混匀,可正反两个方向旋转,检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过20min,以防止细菌有所死亡或繁殖。
6.为了避免食品中的微小颗粒或培基中的杂质与细菌菌落发生混淆,不易分辨,可同时作一稀释液与琼脂培基混合的平板,不经培养,而于4℃环境中放置,以便计数时作对照观察。
7.在某些场合,为了防止食品颗粒与菌落混淆不清,可在营养琼脂中加入氯化三苯四氮唑(TTC),培养后菌落呈红色,易于分别。
8.吸管上端要塞上棉花,避免交叉污染;棉花塞得不宜过紧也不能过松。
9.倒培养基前,瓶口要过火焰。
10.做空白对照,顺便可以鉴定一下你的器皿、培养基以及水是否灭好菌了。
11.平板一定要倒置放入培养箱里,因为培养箱内环境温热,培养基内水份充足,培养过程中会形成水份,蒸发,遇到平板的顶部会凝聚形成水珠,这时如果不倒置,会滴到培养基表面,使琼脂表面湿润,细菌就会长“糊”了,从而不利于形成菌落。
培养完后还要进行菌落计数的报告,这点也很重要,前面的工作做的再好,不会计数或是记得不准确前面的一切都是徒劳。
(1)平板菌落数的选择
选取菌落数在30—300之间的平板作为菌落总数测定标准,一个稀释度使用两个平板,应采用两个平板平均数,其中一个平板有较大片状菌数生长时,则不宜采用,应以无片状菌数生长的平板柞为该稀释度的菌落数,若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以2代表全皿菌落数,平皿内如有链状菌落生长时(菌落之间无明显界线)若仅有一条链,可视为一个菌落,如有不同来源的几条链,则应将每条链作为一个菌落计。
如有片状菌落生长,该平板一般不宜采用,如片状菌落不到平板一半,而另一半又分布均匀,则可以半个平板的菌落数乘2代表全平板的菌落数。
当计数平板内的菌落数过多(即所有稀释度均大于300时),但分布很均匀,可取平板的一半或1/4计数。
再乘以相应稀释倍数作为该平板的菌落数。
(2)稀释度的选择
1.应选择平均菌落数在30~300之间的稀释度,乘以稀释倍数报告之(见表1中例1)。
2.若有两个稀释度,其生长的菌落数均在30~300之间,则视两者之比如何来决定若其比值小于或等于2,应报告其平均数;若大于2则报告其中较小的数字(见表1中例2及例3)。
3.若所有稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例4)。
4.若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例5)。
5.若所有稀释度均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数报告之(见表1中例6).
6.若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间,其中一部分大于300或小于30时,则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1例7)。
(3)菌落数的报告
菌落数在100以内时,按其实有数报告;大于100时,采用两位有效数字,在两位有效数字后面的数值,以四舍五入的方法计算。
为了缩短数字后面的零数,也可用10的指数来表示(见表1)。
例次
稀释液及菌落数
两稀释液之比
菌落总数[cfu/g(mL)]
报告方式[cfu/g(mL)]
10-1
10-²
10-3
1
多不可计
164
20
——
16400
16000或1.6×104
2
多不可计
295
46
1.6
37750
38000或3.8×104
3
多不可计
271
60
2.2
27100
27000或2.7×104
4
多不可计
多不可计
313
——
或3.1×104
5
27
11
5
——
270
270或2.7×102
6
0
0
0
——
<1×10
<10
7
多不可计
305
12
——
30500
31000或3.1×104
微生物检测的第二个重要指标就是大肠菌群的测定,大肠菌群系指一群在37度能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性的无芽胞杆菌。
该菌主要来源于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。
食品中大肠菌群系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。
大肠菌群MPN是采用一定的方法,应用统计学的原理所测定和计算出的一种最近似数值。
大肠菌群MPN常规的检验方法有三管系列、五管系列和其它系列,最常用的是三管系列,也有采用五官系列的,像生活饮用水中总大肠菌群的测定采用的就是五官系列。
其原理相同,区别在于接种样品的稀释度和各稀释度的管数,三管系列接种三个稀释度、每个稀释度三管、五管系列接种五个稀释度、每个稀释度五管。
以三管系列较为简便。
那我们就以三管系列为例说说大肠菌群测定的步骤,其实食品中微生物的检测首先第一步都是要进行检样处理,然后根据样品标准中微生物的限量及污染程度,选择合适的稀释度,根据要培养的菌种选择适宜的培养基及时间、温度等。
前面我们已经讲过菌落总数测定的检样过程,就不重复了,我们看下面的操作,将处理好的样品接种于乳糖胆盐发酵管内,接种量在1ml以上者,用双料乳糖胆盐发酵管;1m1及1m1以下者,用单料乳糖胆盐发酵管,每一稀释度接种3管,置36±1℃温箱内,培养24±2小时,如所有乳糖胆盐发酵管均不产气,则可报告为大肠菌群阴性。
如有产气者,按下列程序进行。
分离培养:
将产气的发酵管分别转种到伊红美兰琼脂平板上,置36±1℃温箱内培养18—24小时,然后取出,观察菌落形态,并作革兰氏染色和证实试验。
证实试验:
对典型和可疑菌落进行观察和证实试验。
由于大肠菌群是一群细菌的总称,在平板大肠菌群菌落的色泽、形态等方面与大肠菌群的检出率密切相关。
国家标准方法规定伊红美蓝平板为分离培养基,在该平板上,大肠菌群菌落呈黑紫色有绿色金属光泽或无金属光泽时,检出率最高;红色、粉红色菌落检出率较低。
另外,挑取菌落数与大肠菌群的检出率有密切关系,只挑取一个菌落,由于机率问题,尤其当菌落不典型时,很难避免假阴性的出现。
所以挑菌落一定要挑取典型菌落,如无典型菌落则应多挑几个,以免出现假阴性。
将挑取的可疑大肠菌群菌落进行革兰氏染色。
同时接种乳糖发酵管,置36±1℃温箱内培养24±2小时,观察产气情况,凡乳糖发酵管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌,即可报告为大肠菌群阳性。
到这里我们就要了解一下什么是革兰氏染色?
革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法,通过这一染色,可把几乎所有的细菌分成革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌两大类,因此它是分类鉴定菌种的重要方法。
我们来看看这种方法的步骤:
细菌先经碱性染料结晶紫溶液初染后,分别染上紫色,而经碘液媒染,结晶紫就与碘分子形成了一个分子量较大的染色较牢固的复合物。
接着用95%酒精脱色,在一定条件下有的细菌此色不被脱去,有的可被脱去,脱色后再用一种红色染料如碱性番红等进行复染,前者仍带紫色,后者则被染上红色。
因此可把细菌分为两大类,前者叫做革兰氏阳性菌(G+),后者为革兰氏阴性菌(G—)。
有芽胞的杆菌和绝大多数的球菌,以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏阳性反应;弧菌,螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现阴性反应。
染色反应的主要依据就是革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差别,染色反应不一样。
现在一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物,它与碘和结晶紫的复合物结合很牢,不易脱色,阴性菌复合物结合程度底,吸附染料差,易脱色。
另外,阳性菌菌体等电点较阴性菌为低,在相同PH条件下进行染色,阳性菌吸附碱性染料很多,因此不易脱去,阴性菌则相反。
所以染色时的条件要严格控制。
例如,在强碱的条件下进行染色,两类菌吸附碱性染料都多,都可呈正反应;PH很低时,则可都呈负反应。
此外,两类菌的细胞壁等对结晶紫—碘复合物的通透性也不一致,阳性菌透性小,故不易被脱色,阴性菌透性大,易脱色。
所以脱色时间,脱色方法也应严格控制。
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤,具体操作方法是:
1)涂片干燥固定。
涂片不宜过后,以免脱色不完全造成假阳性;火焰固定不宜过热否则会改变甚至破坏细胞形态。
2)草酸铵结晶紫染1分钟。
3)自来水冲洗。
4)加碘液覆盖涂面染1分钟。
5)水洗,用吸水纸吸去水分。
6)加95%酒精数滴进行脱色,直至流出的乙醇无紫色,立即水洗,吸去水分。
结果是否正确,这步是关键。
脱色不足,阴性菌被误染成阳性菌,脱色过度,阳性菌被误染成阴性菌,脱色时间为20~30秒。
7)番红染色液(稀)染1分钟后,自来水冲洗。
干燥,镜检。
染色的结果,革兰氏阳性反应菌体都呈紫色,阴性反应菌体都呈红色。
证实实验完成后就可以进行报告了,报告:
根据证实为大肠菌群阳性的管数,查MPN的检索表(见表),报告每100ml(g)大肠菌群的最近似数(MPN)。
阳性管数
MPN100mL(g)
1mL(g)×3
0.1mL(g)×3
0.01mL(g)×3
0
0
0
<30
0
0
1
30
0
0
2
60
0
0
3
90
0
1
0
30
0
1
1
60
0
1
2
90
表内所列检样量如改用10、1、0.1时,则表内数字应相应降低10倍;如改用0.1、0.01、0.001时,则表内数字应相应增加10倍。
标准中还提到了粪大肠菌群的检出,它从属于大肠菌群,我在这里简单地给大家提一下,用接种环将前面讲述的操作中所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物转种于EC肉汤中,置44.5±0.2℃水浴箱内培养24±2h,培养后不产气则报告为阴性;将产气的EC肉汤管分别转种于EMB上,培养18~24h,凡平板上有典型菌落者,则证实为粪大肠菌群阳性。
报告同上。
微生物检验还有两个重要指标就是霉菌、酵母的计数及致病菌的检验,因为企业的出厂检验微生物这块主要是菌落总数和大肠菌群,所以后两个指标我就给大家简单介绍一下,让大家了解一下。
霉菌和酵母的培养可以使用同一种培养基,通过长出的菌落形态特征来判断计数,霉菌最显著的特征就是一般有菌丝,不规则无固定大小,最初往往是白色或浅色,当长出孢子后就成好多颜色,像红色、绿色、黑色等等。
而酵母菌一般比较光滑,隆起,多为乳白色,少数有红色,与细菌菌落特征相似。
一般使用的培养基是孟加拉红,检样操作和前面一样,但是培养霉菌要求稀释样品要充分振摇30min以上,还要反复吹吸50次,一是霉菌孢子充分散开。
检样完毕后选择合适的稀释度,取1mL稀释液加到平板内,加入培养基待凝固后倒置放入25℃~28℃的培养箱内,3天后开始观察,共培养观察5天。
然后选择菌落数在10~150之间的进行报数,稀释度的选择及菌落的报告方式都可参照菌落总数报出方式。
我们再来说说致病菌的检验,主要的是三种沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌。
我们以沙门氏菌为例简单的介绍一下操作,致病菌的检测第一步都要进行增菌,将25g样品加入到225mL缓冲蛋白胨水(BP)中于36℃±1℃培养4h,取10mL加入到100mL四硫酸钠煌绿增菌液(TTB)内于42℃培养18h~24h,同时,另取10mL于100mL亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液内于36℃±1℃培养18h~24h。
分离,取增菌液划线接种一个亚硫酸铋(BS)琼脂和一个HEKTOEN氏肠道菌(HE)琼脂上,于36℃±1℃培养18h~24h,BS上培养40~48h。
根据沙门氏菌在每种培养基上菌落形态挑取典型的可疑菌落(BS上产硫化氢的菌落呈褐色,灰色或黑色,有时带有金属光泽。
有些菌株不产生硫化氢,形成灰绿色的菌落,周围培养基不变;HE上菌落呈兰绿至兰色,带或不带黑色中心。
许多沙门氏菌培养物可呈现大的光泽黑色中心或几乎全部黑色的菌落,多数产硫化氢)进行生化试验接种到三糖铁上,于36℃±1℃培养18h~24h,通过在TSI内的反应来判定,然后进一步进行血清学的鉴定。
我们都知道微生物的检测最主要的就是要保证无菌操作,只有这样才能保证出具数据的真实性和可靠性。
下面讲的内容就是怎样做才能保证数据的准确。
首先我们来区别两个概念,消毒和灭菌这两个词在实际使用中常被混用,其实它们的含义是有所不同的。
消毒是指应用消毒剂等方法杀灭物体表面和内部的病原菌营养体的方法,而灭菌是指用物理和化学方法杀死物体表面和内部的所有微生物,使之呈无菌状态。
从概念中我们就能看出来我们在做微生物的试验是要进行前期的灭菌工作,而不是简单的消毒。
我们就来看看通常采用地灭菌方法:
一、物理方法:
有高温、辐射、超声波、激光、过滤等等,在实验室中最常用的就是高温灭菌和辐射灭菌。
1、高温
利用高温进行灭菌、消毒或防腐,是最常用而又方便有效的方法。
高温可使微生物细胞内的蛋白质和酶类发生变性而失活,从而起灭菌作用,不光是高温可以杀菌,通常低温