植酸酶活性的测定方法.docx
《植酸酶活性的测定方法.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《植酸酶活性的测定方法.docx（9页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。
植酸酶活性的测定方法
计算机在生命科学中的运用
植酸酶的活性测定方案
生132-2
9
熊雨洁
1、基本原理
随着植酸酶的大规模应用，饲料企业如何选择和鉴别植酸酶产品，已成为使用者的当务之急。
在众多影响使用效果的因素中，产品本身的因素主要包括酶的种源、含量、温度稳定性、容重、pH值曲线特性及体水解效率等，其中酶活含量是最重要的质量指标。
饲用植酸酶酶活性的定量分析至今没有普遍公认的检测方法,
在参考了AOAC方法的基础上采用分光光度法测定饲用植酸酶活性。
酶活性对反应条件十分敏感，测定条件和测定程序的不同对结果有极大的影响。
一个植酸酶活性单位U定义“在温度为37℃、pH值5.5的条件下，每分钟从植酸钠浓度为5.0mmol/l植酸钠溶液中释放1μmol无机磷，
2、仪器试剂
植酸酶（Sigma公司）、钼酸铵、钒酸铵、稀硝酸、植酸钠、乙酸钠均为分析纯。
3、主要设备
超净工作台，721型分光光度计，PHS-3TC型精密数显酸度计，80-2型离心沉淀器。
4、实验步骤
无机磷测定方法：
准确称取0.6804g在105℃烘至恒重的基准磷酸二氢钾于100mL容量瓶中，用乙酸缓冲液溶解，并定容至100mL，浓度为50.0mmol/L，加显色液显色，以无机磷浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，在波长415nm处测定吸光度值。
植酸酶活性测定方法：
发酵液经3000r/min离心去除菌体，上清液利用截留分子量为10000U的透析袋在去离子水中透析2h得到去除无机磷的酶液，将酶液用pH5.5的乙酸钠缓冲液稀释至合适浓度，取1mL于37℃预热5min。
然后加入2倍体积的5mmol/L植酸钠溶液，37℃恒温反应15min后立即加入2mL颜色终止液。
室温条件下静置10min后于3000r/min离心10min。
空白对照是将酶液和终止液37℃温浴15min后再加入底物植酸钠。
5、结果与讨论
1.同一底物的不同酸碱度对植酸酶活性影响的试验方法
在37℃的试验条件下，改变底物植酸钠（P8810）pH，测定酶促反应的初速度。
以pH为横坐标，A为纵坐标作图
表1同一底物的不同酸碱度对植酸酶活性的影响
pH
2.2
2.8
3.6
4.8
5
5.8
7.2
8.2
9.1
A
17
12
76
194
198
110
78
66
53
图1同一底物的不同酸碱度对植酸酶活性的影响
从图表可以看出，酶活性与pH有关。
不同的pH溶液中酶活性不同。
其中过酸或过碱抑制酶活，最适PH在6左右。
2.不同离子对植酸酶活性影响的试验方法
在37℃、pH5.5的试验条件下，改变溶液中离子的种类，测定反应液的吸光度A。
以离子I为横坐标，A为纵坐标作图。
表2不同离子对植酸酶活性影响
I
Non
K
Mg
Ca
Na
Zn
Cu
A
127
126
124
198
146
21
30
图2不同离子对植酸酶活性影响
从图表可以看出，酶活性与离子的浓度有关。
不同的离子溶液中酶活性不同。
其中锌和铜抑制酶活，钙和镁促进酶活。
3.不同温度对植酸酶活性影响的试验方法
在pH5.5的试验条件下，改变反应温度，测定反应液的吸光度A。
以温度T为横坐标，A为纵坐标作图。
表3不同温度对植酸酶活性影响
T
10
30
30
37
45
55
65
A
40
84
126
186
420
140
92
图3不同温度对植酸酶活性影响
从图表可以看出，酶反应活性与温度有关。
低温和高温都会抑制酶活性。
酶的最适反应温度在45度左右。
4同一底物浓度对植酸酶活性影响的试验方法
在37℃、pH5.5的试验条件下，改变底物植酸钠（P8810）浓度，测定酶促反应的初速度。
取两者的倒数分别为横纵坐标作图
表4同一底物对不同酶活水平植酸酶酶活检测的影响
1/[S]
1
1.5
3
6
12
4.7
1/[v]
4.4
4.6
6.1
8.1
13.8
7,4
图4同一底物对不同酶活水平植酸酶酶活检测的影响
从图表可以看出，底物浓度的倒数与酶反应初速度成正相关。
较低的底物浓度不能使植酸酶完全催化，但较高的底物浓度对植酸酶的催化活性也有抑制作用。
5.不同37°Chr对植酸酶活性影响的试验方法
在37℃、pH5.5的试验条件下，改变Chr，测定酶促反应的初速度。
以37°Chr为横坐标，A为纵坐标作图。
表5同一底物不同37°Chr对植酸酶酶活检测的影响
37℃hr
0.5
1
2
3
4
6
A
128
180
276
344
400
488
图5同一底物不同37°Chr同对植酸酶酶活检测的影响
从图表可以看出，底Chr与酶活成正相关。
当Chr接近无穷大时，酶活有最大值。
6.离子浓度对酶活性影响的试验方法
在37℃、pH5.5的试验条件下，改变Cu和Zn的浓度，测定酶促反应的Con。
表6离子浓度对酶活性影响
图6离子浓度对酶活性影响
从图表可以看出，不同的离子浓度对酶活性的影响程度不同。
7.不同温度和pH下酶比活性变化
在37℃的试验条件下，改变温度，测定酶促反应的比活。
表7同不同温度和pH下酶比活性变化
图7不同温度和pH下酶比活性变化
从图表得，不同温度和pH下酶比活性不同。
升级会员 