诱导多能干细胞技术.ppt

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.,诱导多能干细胞技术（inducedpluripotentstemcells,iPSCells）,杨通E-mail:

内部资料，仅供参考,.,捷易生物,特色技术平台：

iPS技术平台（外周血、尿液等非整合诱导及多种分化）CRISPR/Cas9基因编辑（敲除效率高，非整合）二代测序建库和数据分析（可做单细胞或极少量样本建库）产品平台：

总代理KAPABIOSYSTEMS,abm等北美优质工具酶（如二代测序）,.,

（二）重点任务,科技部“十三五”重点专项,干细胞与转化医学,遗传相关疾病,.,胚胎干细胞（embryonicstemcell，ESCs）,Wikipedia,体细胞重编程,.,诱导多能干细胞（inducedpluripotentstemcells,iPScells）最初是日本人山中申弥（ShinyaYamanaka）于2006年利用病毒载体将四个转录因子（Oct4,Sox2,Klf4和c-Myc）的组合转入分化的体细胞中，使其重编程而得到的类似胚胎干细胞（ES）的一种细胞类型。

iPS细胞,.,人诱导多能干细胞（hiPS）研究简介,Yamanaka,Cell.2009,Rescuedbygenomeediting（CRISPR/Cas9,TALEN）,iPSC-basedtherapy,.,患者体细胞取材的创伤性。

hiPS细胞诱导时外源基因的插入。

细胞培养液中动物源性成份的使用。

传统基因打靶的低效率。

hiPS面临的挑战,.,捷易的优势1取材灵活（外周血、尿液）,.,捷易的优势2非整合型质粒电转（无整合）,.,捷易的优势3Xeno-free培养（无异源性物质）,.,捷易的优势4CRISPR/Cas9基因编辑,特色：

1）Cas9mRNA和sgRNA电转2）单链DNA做Doner3）Cas9蛋白和sgRNA电转,RecoveryorConstructionofdiseasemodeliniPSCsPointmutationMulti-genemutationLargefragmentdeletionLargefragmentinsertion,.,非整合型hiPS建系的周期及价格,8.8万元,.,疾病特异hiPS在遗传病疾病机制研究中的思路,1）建立病人特异iPS细胞模型（比较与正常的差异）；2）CRISPR/Cas9基因修复验证遗传突变的重要性；3）高通量测序寻找疾病机制,.,建立DISC1突变家系来源的iPS细胞系（包括正常和突变），并分化成神经元，比较差异；用基因编辑技术确认DISC1的作用；二代测序寻找机制,.,Figure1|Normalneuraldifferentiation,butmarkedlyreducedtotalDISC1proteinlevelsinforebrainneuronsderivedfrompatientiPScellscarryingtheDISC1mutation.,.,Figure2|DefectsofglutamatergicsynapsesinforebrainneuronscarryingtheDISC1mutation.,.,Figure3|AcausalroleoftheDISC1mutationinregulatingsynapseformationinhumanforebrainneurons.,.,Figure4|Dysregulationofneuronaltranscriptomeencodingasubsetofpresynapticproteins,DISC1-interactingproteinsandmental-disorderassociatedproteinsinhumanforebrainneuronscarryingtheDISC1mutation.,.,疾病特异hiPS在遗传病基因治疗中的思路,1）建立病人特异iPS细胞模型；2）基因编辑技术修复基因突变；3）检测基因修复后相关基因的表达。

.,建立乙型地中海贫血病人来源的iPS细胞系；运用CRISPR/Cas9技术修复突变基因；病人来源iPS和修复的iPS分化成HSC,检测HBB基因表达。

.,.,Thanksforyourattention!