综合项目一不同蔬菜水果中基本营养成分分析.docx
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综合项目一不同蔬菜水果中基本营养成分分析
综合项目一不同蔬菜水果中基本营养成分分析
实验一总糖含量的测定（3,5-二硝基水杨酸法）
一、实验目的
1、掌握总糖的测定原理。
2、学习用比色法测定还原糖的方法。
二、实验原理
三、实验试剂
1、2mol/L氢氧化钠溶液：
称取4g氢氧化钠，加少量的蒸馏水溶解后，定容至50mL。
2、3,5-二硝基水杨酸试剂：
称取0.325g3,5-二硝基水杨酸溶于15mL热蒸馏水中，溶解后移入50ml容量瓶中，加入2mol/L氢氧化钠溶液16.25mL，再加入2.25ml丙三醇，摇匀，冷却后定容至50mL。
3、2mg/mL葡萄糖标准溶液：
称取0.04g葡萄糖，加少量的蒸馏水溶解后，定容至20mL。
4、6mol/L盐酸：
取25mL浓盐酸用蒸馏水稀释至50mL。
5、6mol/L氢氧化钠：
称取12g氢氧化钠，加少量的蒸馏水溶解后，定容至50mL。
四、实验步骤
1、葡萄糖标准曲线的制作
取6支试管，按下表加入2mg/mL葡萄糖标准溶液和蒸馏水：
管号
2mg/mL葡萄糖标准溶液/mL
蒸馏水/mL
葡萄糖浓度mg/mL
OD540
1
0
1
0
2
0.2
0.8
0.4
3
0.4
0.6
0.8
4
0.6
0.4
1.2
5
0.8
0.2
1.6
6
1
0
2
在上述试管中分别加入3,5-二硝基水杨酸试剂2mL，摇匀后于沸水浴中加入2min进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水9mL，摇匀，在540nm波长处测定光吸收值。
以葡萄糖含量（mg/mL）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制葡萄糖标准曲线，得出回归方程。
2、总糖的提取
称取1g实验材料（如新鲜果蔬），充分研磨后，放在锥形瓶中，加入6mol/L盐酸10mL，蒸馏水15mL，在沸水浴中加热30min。
水解完毕后，冷却至室温后，加入8mL6mol/L氢氧化钠，最终用蒸馏水定容至50mL，此为总糖水解液，用于总糖测定。
3、总糖含量的测定
取4支试管，按下表加入不同溶液：
管号
蒸馏水/mL
总糖水解液/mL
3,5-二硝基水杨酸试剂/mL
OD540
1
1
0
2
2
0
1
2
3
0
1
2
4
0
1
2
加完试剂后，摇匀后于沸水浴中加入2min进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水9mL，摇匀，在540nm波长处测定光吸收值。
测定后，取样品的光吸收值平均值在标准曲线上查出相应的糖含量（mg/mL）。
4、计算总糖的百分含量
总糖=（C×V/m×1000）×稀释倍数×0.9×100%
式中,C为总糖提取液的浓度mg/mL；V为总糖提取液的总体积mL；m为样品质量g
五、实验结果
1、葡萄糖标准曲线的绘制
（1）光吸收值测得结果
管号
2mg/mL葡萄糖标准溶液/mL
蒸馏水/mL
葡萄糖浓度mg/mL
OD540
1
0
1
0
2
0.2
0.8
0.4
3
0.4
0.6
0.8
4
0.6
0.4
1.2
5
0.8
0.2
1.6
6
1
0
2
（2）葡萄糖标准曲线图：
（3）回归方程为：
2、样品总糖含量的测定
（1）材料____________总糖含量的测定
管号
蒸馏水/mL
总糖水解液/mL
3,5-二硝基水杨酸试剂/mL
OD540
1
1
0
2
2
0
1
2
3
0
1
2
4
0
1
2
样品的光吸收值平均值为___________________________。
根据标准曲线的回归方程计算得出总糖浓度为________________。
请说明具体计算过程：
从而得出样品__________总糖的百分含量为_________________。
请说明具体计算过程：
（2）材料____________总糖含量的测定
管号
蒸馏水/mL
总糖水解液/mL
3,5-二硝基水杨酸试剂/mL
OD540
1
1
0
2
2
0
1
2
3
0
1
2
4
0
1
2
样品的光吸收值平均值为___________________________。
根据标准曲线的回归方程计算得出总糖浓度为________________。
请说明具体计算过程：
从而得出样品__________总糖的百分含量为_________________。
请说明具体计算过程：
（3）材料____________总糖含量的测定
管号
蒸馏水/mL
总糖水解液/mL
3,5-二硝基水杨酸试剂/mL
OD540
1
1
0
2
2
0
1
2
3
0
1
2
4
0
1
2
样品的光吸收值平均值为___________________________。
根据标准曲线的回归方程计算得出总糖浓度为________________。
请说明具体计算过程：
从而得出样品__________总糖的百分含量为_________________。
请说明具体计算过程：
3、对比分析不同样品总糖含量。
实验二蛋白质含量的测定（考马斯亮蓝法）
一、实验目的
1、学习用考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度的基本原理与方法。
2、了解考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度的优缺点。
二、实验原理
三、实验试剂
1、0.15mol/L氯化钠溶液：
称取0.2633g氯化钠，加少量的蒸馏水溶解后，定容至30mL。
2、0.1mg/mL牛血清白蛋白标准溶液：
（1）母液：
称取0.01g牛血清白蛋白溶于10mL0.15mol/L氯化钠溶液中，配成浓度为1mg/mL的溶液。
（2）标准液：
取母液1mL，用0.15mol/L氯化钠溶液定容至10mL，配成0.1mg/mL的牛血清白蛋白标准溶液。
3、考马斯亮蓝G-250试剂：
称取0.005g考马斯亮蓝G-250溶于2.5mL95%乙醇，加蒸馏水40mL，加5mL85%磷酸，最后加蒸馏水定容至50mL。
四、实验步骤
1、绘制标准曲线
取6支试管，按下表加入各种试剂。
试剂加完后混匀，室温静置3min，以1号管为空白调零，在595nm处测定其吸光值。
以蛋白质含量（mg/mL）为横坐标，对应的吸光值为纵坐标，绘制蛋白质含量标准曲线，得出回归方程。
试剂/mL
管号
1
2
3
4
5
6
0.1mg/mL牛血清白蛋白标准溶液
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
0.15mol/L氯化钠溶液
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0
考马斯亮蓝G-250试剂
5
5
5
5
5
5
蛋白质浓度（ug/mL）
0
20
40
60
80
100
OD595
2、总蛋白的提取
称取1g实验材料（如新鲜果蔬），加5mL蒸馏水研磨，过滤后将滤液用蒸馏水定容至10mL。
3、总蛋白测定
取3支试管，分别加0.1mL未知浓度的蛋白质样品液，加0.9mL0.15mol/L氯化钠溶液，再加入5mL考马斯亮蓝G-250试剂，摇匀，室温静置3min，以1号管为空白管调零，在595nm处测其吸光值。
测定后，取样品的光吸收值平均值在标准曲线上查出相应的蛋白浓度（ug/mL）。
4、蛋白质含量（mg/g）
蛋白质含量（mg/g）=（C×VT）/（1000×VS×WF）
式中，C为蛋白质提取液的浓度ug/mL；VT为提取液总体积mL；VS为测定时加样量mL；WF为样品鲜重g。
五、实验结果
1、牛血清白蛋白标准曲线的绘制
（1）光吸收值测得结果
试剂/mL
管号
1
2
3
4
5
6
0.1mg/mL牛血清白蛋白标准溶液
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
0.15mol/L氯化钠溶液
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0
考马斯亮蓝G-250试剂
5
5
5
5
5
5
蛋白质浓度（ug/mL）
0
20
40
60
80
100
OD595
（2）标准曲线图：
（3）回归方程为：
2、样品蛋白质含量的测定
（1）样品_____________的光吸收值分别为____________、____________、____________，其平均值为___________。
根据标准曲线的回归方程计算得出蛋白质浓度为________________。
请说明具体计算过程：
从而得出样品__________蛋白质的含量为_________________。
请说明具体计算过程：
（2）样品_____________的光吸收值分别为____________、____________、____________，其平均值为___________。
根据标准曲线的回归方程计算得出蛋白质浓度为________________。
请说明具体计算过程：
从而得出样品__________蛋白质的含量为_________________。
请说明具体计算过程：
（3）样品_____________的光吸收值分别为____________、____________、____________，其平均值为___________。
根据标准曲线的回归方程计算得出蛋白质浓度为________________。
请说明具体计算过程：
从而得出样品__________蛋白质的含量为_________________。
请说明具体计算过程：
3、对比分析不同样品蛋白质含量。
实验三维生素C含量的测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）
一、实验目的
1、学习并掌握2,6-二氯酚靛酚滴定法测定维生素C的原理与方法。
2、了解水果与蔬菜中维生素C的含量情况。
二、实验原理
三、实验试剂
1、2%草酸：
称取1g草酸，加少量的蒸馏水溶解后，定容至50mL。
2、1%草酸：
称取0.5g草酸，加少量的蒸馏水溶解后，定容至50mL。
3、0.1mg/mL标准抗坏血酸溶液：
称取0.0025g抗坏血酸溶于少量1%草酸溶液中，最终加1%草酸定容至25mL。
用棕色试剂瓶保存于4℃。
最好临用前配制。
4、0.05%2,6-二氯酚靛酚溶液：
称取0.025g2,6-二氯酚靛酚溶于15mL含有0.0052g碳酸氢钠的热水中，冷却后加水定容至50mL。
滤去不溶物，用棕色试剂瓶保存于4℃。
约可保存1周。
四、实验步骤
1、样品的制备
称取10g实验材料（如新鲜果蔬），加入5-10mL2%草酸，研磨成浆状，过滤后，将滤液定容至25mL。
2、标准液滴定
准确吸取标准抗坏血酸溶液1mL置于50mL锥形瓶中，加9mL1%草酸，以0.05%2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡粉色，并保持15s不褪色，即达到终点；取10mL1%草酸作空白对照，按以上方法滴定。
记录所用染料溶液的体积（mL），计算出1mL染料溶液所能氧化抗坏血酸的量（mg）。
3、样品滴定
准备吸取样品滤液2份，每份为10mL，分别放入2个锥形瓶内，另取10mL1%草酸作空白对照滴定；按上面的操作滴定并记录所用染料溶液的体积（mL）。
4、维生素C含量的计算
取2份样品滴定所用染料体积平均值，代入下列公式中计算100g样品还原型抗坏血酸含量。
维生素C含量（mg/100g样品）=（VA-VB）×C×T×100/（D×W）
式中，VA为滴定样品所好用的染料的平均用量mL；VB为滴定空白对照所用的染料的平均用量mL；C为样品提取液的总体积mL；D为滴定时所取的样品提取液体积mL；T为1mL染料能氧化抗坏血酸质量mg（由操作2计算出）；W为待测样品的质量g。
五、实验结果
1、标准抗坏血酸溶液滴定时，所用染料溶液的体积为___________，从而计算出1mL染料溶液所能氧化抗坏血酸的量为______________。
2、样品维生素C含量的测定
（1）样品____________滴定时所用染料溶液的体积分别为_______和______。
其平均用量为____________。
则样品维生素C含量为______________。
请说明具体计算过程。
（2）样品____________滴定时所用染料溶液的体积分别为_______和______。
其平均用量为____________。
则样品维生素C含量为______________。
请说明具体计算过程。
（3）样品____________滴定时所用染料溶液的体积分别为_______和______。
其平均用量为____________。
则样品维生素C含量为______________。
请说明具体计算过程。
3、对比分析不同样品维生素C含量。
实验四纤维素含量的测定（比色法）
一、实验目的
1、学习并掌握比色法测定纤维素的原理与方法。
2、了解水果与蔬菜中纤维素的含量情况。
二、实验原理
三、实验试剂
1、60%硫酸：
量取30mL浓硫酸，缓慢倒入15mL蒸馏水中，最终加水定容至50mL。
2、浓硫酸
3、2%蒽酮试剂：
将1g蒽酮溶解于50mL乙酸乙酯中，存放在棕色试剂瓶中。
4、100ug/mL纤维素标准液：
（1）母液：
称取25mg纤维素，放入烧杯中，将烧杯放入冰浴中，然后加冷的60%硫酸15-17mL，在冷的条件下消化处理20-30min，用60%硫酸定容至25mL。
（2）吸取母液5mL放入另一个容量瓶中，将容量瓶放入冰浴中，加蒸馏水定容至50mL。
四、实验步骤
1、纤维素标准曲线的绘制
取6支试管，按下表加入不同试剂：
试剂/mL
管号
1
2
3
4
5
6
100ug/mL纤维素标准液
0
0.4
0.8
1.2
1.6
2
蒸馏水
2
1.6
1.2
0.8
0.4
0
纤维素含量ug/mL
0
20
40
60
80
100
OD620
将各管摇匀后，向每管加入0.5mL2%蒽酮，再沿管壁加入5mL浓硫酸，缓慢摇匀后，静置1min。
然后在620nm下，测得不同含量纤维素溶液的吸光值。
以测得的吸光值为Y值，以对应的纤维素含量为x值，绘制标准曲线，得出回归方程。
2、样品纤维素含量的测定
（1）称取1g实验材料（如新鲜果蔬）置于烧杯中，将烧杯置于冷水浴中，加入60%硫酸15mL，并消化30min，然后将消化好的纤维素溶液转入25mL容量瓶中，并用60%硫酸定容至25mL。
然后用布氏漏斗过滤于另一个烧杯中。
（2）取上述溶液2mL于试管中，加入0.5mL2%蒽酮试剂，并沿管壁加5mL浓硫酸，缓慢摇匀后，静置12min，然后在620nm波长下测定光吸收值。
3、纤维素百分含量
纤维素百分含量=（X×10-6×a/W）×100%
式中，X为按按回归方程计算出的纤维素含量ug；W为样品重量g；10-6为微克换算成克的系数；a为样品稀释倍数。
五、实验结果
1、纤维素标准曲线的绘制
（1）光吸收值测得结果
试剂/mL
管号
1
2
3
4
5
6
100ug/mL纤维素标准液
0
0.4
0.8
1.2
1.6
2
蒸馏水
2
1.6
1.2
0.8
0.4
0
纤维素含量ug/mL
0
20
40
60
80
100
OD620
（2）标准曲线图：
（3）回归方程为：
2、样品纤维素含量的测定
（1）样品_____________的光吸收值为____________。
根据标准曲线的回归方程计算得出纤维素含量为________________。
请说明具体计算过程：
样品中纤维素百分含量为___________。
请说明具体计算过程。
（2）样品_____________的光吸收值为____________。
根据标准曲线的回归方程计算得出纤维素含量为________________。
请说明具体计算过程：
样品中纤维素百分含量为___________。
请说明具体计算过程。
（3）样品_____________的光吸收值为____________。
根据标准曲线的回归方程计算得出纤维素含量为________________。
请说明具体计算过程：
样品中纤维素百分含量为___________。
请说明具体计算过程。
3、对比分析不同样品纤维素含量。
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