发酵工程 微生物的实验室培养.docx
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发酵工程微生物的实验室培养
发酵工程微生物的实验室培养
1.制备固体培养基的一般步骤可简记为：
算、称、溶、灭、倒，即（）。
[单选题]*
计算、称量、溶化、灭菌、倒平板（正确答案）
2．培养基灭菌后，需要冷却至50℃左右时，才能倒平板的原因是什么？
你用什么办法来估计培养基的温度？
[单选题]*
提示 琼脂是一种多糖，在98℃以上熔化，在44℃以下凝固，倒平板时高于50℃则会烫手，低于50℃时若不及时操作，琼脂会凝固。
可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。
（正确答案）
3.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
[单选题]*
提示 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
（正确答案）
4.从防止杂菌污染的角度思考，平板冷凝后将平板倒置的原因是什么？
[单选题]*
提示 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。
（正确答案）
5．怎样判断制备的培养基是否合格、成功，是否受到污染？
[单选题]*
提示 未接种的培养基在恒温箱中保温一段时间后，如果无菌落生长，说明培养基制备成功、合格，未受到污染。
（正确答案）
6．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的过程中，下列关于倒平板的具体描述正确的是（ ）①待培养基冷却至40℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板 ②将灭过菌的培养皿放在桌面上，左手拔出棉塞 ③右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰 ④用左手的拇指和食指完全打开皿盖 ⑤右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖 ⑥等待平板冷却5～10s，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上[单选题]*
A．①③④⑤
B．④⑤⑥
C．③⑤（正确答案）
D．①②④⑥
答案解析：
琼脂是一种多糖，在98℃以上熔化，在44℃以下凝固，倒平板时高于50℃则会烫手，低于50℃时若不能及时操作，琼脂会凝固；无菌操作应贯穿于操作的全过程，皿盖全打开则空气中的微生物会进入培养基；等待平板冷却凝固（大约需5～10min）后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。
7.培养基灭菌后，需冷却至50℃左右时倒平板，原因是琼脂在44℃以下凝固。
[单选题]*
A．对（正确答案）
B．错
答案解析：
答案：
A
8.倒平板的过程需要进行无菌操作，要对培养基进行高压蒸汽灭菌，对培养皿进行干热灭菌，在酒精灯火焰旁操作进行灼烧灭菌。
[单选题]*
A．对（正确答案）
B．错
答案解析：
答案：
A
9．对买回来的菌种进行扩大培养，首先需制备试管培养基，写出制备牛肉膏蛋白胨固体培养基所需的原料：
（）。
[单选题]*
牛肉膏、蛋白胨、蒸馏水、NaCl、琼脂（正确答案）
10.微生物在生长过程中对各种成分需求量不同，配制培养基时各成分要有合适的（比例）。
在烧杯中加入琼脂后要不停（搅拌），防止（）。
[单选题]*
琼脂糊底而导致烧杯破裂（正确答案）
11.将配制好的培养基分装到试管中，加棉塞后若干支试管一捆，包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入（）中灭菌。
灭菌完毕后拔掉电源，待压力表的压力自然降到0时，将试管取出。
如果棉塞上沾有培养基，此试管应废弃。
[单选题]*
高压蒸汽灭菌锅（正确答案）
12.菌落的概念：
（）。
[单选题]*
由一个微生物细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体（正确答案）
13.接种方法：
（）。
[单选题]*
最常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法（正确答案）
14.平板划线法的原理：
[单选题]*
通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
在数次划线后培养，可以分离到单个菌落。
（正确答案）
15.稀释涂布平板法的原理：
[单选题]*
将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
（正确答案）
16.稀释涂布平板法的操作：
[单选题]*
在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。
（正确答案）
17.移液管要经过灭菌，并且操作应在酒精灯火焰附近完成。
[单选题]*
A．对（正确答案）
B．错
答案解析：
答案：
A
18．涂布平板操作[单选题]*
涂布平板操作：
（1）涂布器消毒：
将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。
（2）取菌液：
取少量菌液（不超过0.1mL，滴加到培养基表面。
（3）涂布器灭菌：
将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8～10s。
（4）涂布平板：
用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。
涂布时可转动培养皿，使菌液分布均匀。
（正确答案）
19.取出涂布器时，应避免酒精滴落；燃烧后的涂布器，应冷却后再浸入酒精。
[单选题]*
A．对（正确答案）
B．错
答案解析：
答案：
A
20．平板划线法接种菌种时，哪些操作可防止杂菌污染？
[单选题]*
提示
（1）接种前将接种环放在酒精灯火焰上灼烧。
（2）划完一个区域后，将接种环灼烧，冷却后再划下一区域。
（3）接种环沾取菌液时，要将试管口、棉塞等通过火焰。
（4）划线时将培养皿的皿盖打开一条缝隙，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划线后及时盖上皿盖。
（正确答案）
21．在做第二次划线以及其后的操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
[单选题]*
提示 划线末端含有的细菌数目较少，每次从上一次划线的末端开始划线能够使细菌的数目随划线次数的增加而逐渐减少，最终分散成单个的细菌。
（正确答案）
22．稀释涂布平板操作结束后，为什么要将一个未接种的培养基和一个已接种的培养基放在一起培养？
未接种的培养基表面是否有菌落生长很关键。
如果有菌落生长，说明了什么？
[单选题]*
提示 培养未接种培养基的作用是对照。
未接种的培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的；若有菌落生长，说明培养基灭菌不彻底，或培养基被污染，需要重新制备。
（正确答案）
23.灼烧后的接种环如果没有冷却就接触菌种，会将菌体杀死。
[单选题]*
A．对（正确答案）
B．错
答案解析：
答案：
A
24.稀释倍数过低，会导致多个菌体聚集在一起繁殖成菌落。
[单选题]*
A．对（正确答案）
B．错
答案解析：
答案：
A
25.平板划线法中一般最后一次划线的末端处形成的菌落才是由单一的细胞或孢子繁殖而成的，这种菌落才符合要求。
[单选题]*
A．对
B．错（正确答案）
答案解析：
答案：
B
26.连续划线中，除了第一次划线外，每一次划线的起点均是上一次划线的末端，目的是使得菌体密度越来越小，保证最后划线末端处的菌落是由单一的细胞或孢子繁殖而成。
[单选题]*
A．对（正确答案）
B．错
答案解析：
答案：
A
27.高温会杀死菌体，所以一些经过高温或灼烧灭菌的器材需要冷却后才能接触菌种。
[单选题]*
A．对（正确答案）
B．错
答案解析：
答案：
A
28.两种接种方法中，只有稀释涂布平板法才适合对细菌进行计数的原因：
只要稀释倍数足够高，则稀释涂布平板法中形成的每个菌落都是由单一菌体繁殖而成的，即一个肉眼看不见的细菌对应着一个可以看见的菌落，可以通过统计菌落的数目推测出细菌的数目。
而平板划线法中除了最后一次划线末端处的菌落是由单一的细菌繁殖而成的，其他每个菌落往往是由多个细菌一起繁殖而成，即一个菌落并非对应着一个细菌，所以不适合用于细菌的计数。
[单选题]*
A．对（正确答案）
B．错
答案解析：
答案：
A
29．（2019•四川资阳期中）平板划线法和稀释涂布平板法是常用的两种接种方法。
下列相关叙述中错误的是（ ）[单选题]*
A．平板划线法要求在培养基表面连续划线，且除第一次划线外，每一次划线的起点都是上一次划线的终点
B．除第一次划线前需要将接种环灼烧灭菌外，以后的划线可以不用灭菌（正确答案）
C．如果菌液本来浓度不高，则可以适当降低稀释倍数
D．“充分稀释”和“连续划线”的目的都是获得由单一细胞繁殖而成的菌落
答案解析：
答案：
B， 在平板划线法中，连续划线的目的是使菌种的浓度降低，所以除第一次划线外，以后每一次划线的起点都是上一次划线的终点，A正确；将接种环灼烧灭菌并冷却后沾取菌液进行第一次划线，以后的每一次划线前都要将接种环进行灼烧灭菌，B错误；稀释倍数要随菌液的浓度而定，如果菌液的浓度过高，则需要更高的稀释倍数，反之就可以适当降低稀释的倍数，C正确；稀释涂布平板法中的“充分稀释”及平板划线法中的“连续划线”，目的都是获得由单个细胞繁殖而成的菌落，D正确。
30.平板划线法中的操作要领是“多次划线”，稀释涂布平板法中的操作要领是“充分稀释”，二者虽然操作方法不同，但目的是一样的，即获得由单个细胞繁殖而成的菌落。
如果平板划线法中的划线次数太少或稀释涂布平板法中的稀释倍数不够，则得到的可能是由多个细胞繁殖而来的子细胞群体，其中还可能掺杂着其他杂菌，达不到纯化的目的。
[单选题]*
A．对（正确答案）
B．错
答案解析：
答案：
A
31．划线操作时，将沾有菌种的接种环插入培养基。
[单选题]*
A．对
B．错（正确答案）
答案解析：
答案：
B划线时不能将接种环插入培养基，而是在培养基表面划线。
32．平板划线后培养微生物时要倒置培养。
[单选题]*
A．对（正确答案）
B．错
答案解析：
答案：
A 用平板培养基培养微生物时，为防止水蒸气凝集滴入培养基造成干扰或污染，应将平板倒置培养。
33．请回答下列与大肠杆菌纯化培养有关的问题：
（1）制备培养基：
配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行（调pH），培养基在接种前要进行（）灭菌。
[单选题]*
高压蒸汽（正确答案）
答案解析：
（1）配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行调节pH，培养基在接种前要进行高压蒸汽灭菌。
34．请回答下列与大肠杆菌纯化培养有关的问题：
（2）纯化大肠杆菌：
①通过接种环在琼脂固体培养基的表面进行连续划线的操作，将聚集的菌种逐步分散到培养基的表面。
在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这种方法称为（平板划线法）。
②用该方法统计样本菌落数时（是）（填“是”或“否”）需要设置对照组？
为什么？
[单选题]*
需要判断培养基是否被污染（正确答案）
答案解析：
（2）①通过接种环在琼脂固体培养基的表面进行连续划线的操作，将聚集的菌种逐步分散到培养基的表面。
在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这种方法称为平板划线法。
②因需要判断培养基是否被污染，故需要设置对照。
35．请回答下列与大肠杆菌纯化培养有关的问题：
（3）讨论分析：
①纯化大肠杆菌时，（不可）（填“可”或“不可”）用加入抗生素的方法防止杂菌感染。
②用该方法分离大肠杆菌时，从第二次划线操作起，每次总是要从上一次划线的末端开始划线，并划线数次，其原因是（）。
③大肠杆菌与酵母菌的最本质区别是（大肠杆菌无成形的细胞核）[单选题]*
线条末端的细菌数量少，最终可得到由单个细菌繁殖而形成的菌落（正确答案）
答案解析：
（3）①纯化大肠杆菌时，不可用加入抗生素的方法防止杂菌污染，因为抗生素也可以杀死大肠杆菌。
②线条末端的细菌数量少，最终可得到由单个细菌繁殖而形成的菌落。
③大肠杆菌为原核生物，无成形的细胞核。
36．培养基的概念：
（）。
[单选题]*
人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质（正确答案）
37．培养基的种类：
按照培养基的物理状态划分为（）。
[单选题]*
液体培养基和固体培养基（正确答案）
38．培养基的营养构成：
各种培养基一般都含有（）。
[单选题]*
水、碳源、氮源和无机盐（正确答案）
39．无菌操作的具体操作：
（）。
[单选题]*
获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，具体操作如下：
（1）对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。
（2）将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。
（3）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。
（4）实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
（正确答案）
40．消毒概念：
（）。
[单选题]*
使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）（正确答案）
41.常用的消毒方法有（）。
[单选题]*
煮沸消毒法和化学药剂消毒法（正确答案）
42.灭菌的概念：
（）。
[单选题]*
使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物（包括芽孢和孢子）（正确答案）
43.灭菌的常用的方法有：
（）。
[单选题]*
灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌（正确答案）
44．微生物接种的常用方法是平板划线法和稀释涂布平板法。
[单选题]*
A．对（正确答案）
B．错
答案解析：
答案：
A
45.平板划线法：
通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
[单选题]*
A．对（正确答案）
B．错
答案解析：
答案：
A
46.稀释涂布平板法：
将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
[单选题]*
A．对（正确答案）
B．错
答案解析：
答案：
A
47．对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。
[单选题]*
A．对（正确答案）
B．错
答案解析：
答案：
A
48．对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。
[单选题]*
A．对（正确答案）
B．错
答案解析：
答案：
A
49.【易错易混】
（1）消毒与灭菌的最根本区别：
芽孢和孢子是否存活。
灭菌能杀死芽孢和孢子，因而灭菌更彻底。
[单选题]*
A．对（正确答案）
B．错
答案解析：
答案：
A
50.【易错易混】
（2）具体选择消毒还是灭菌需要考虑：
一是效果，灭菌的效果比消毒要好；二是操作对象的承受能力，活体生物材料、操作者的手等只能采用消毒，而不能灭菌。
[单选题]*
A．对（正确答案）
B．错
答案解析：
答案：
A
51.【易错易混】（3）无菌技术除了可防止实验室的培养物被其他微生物污染，还能有效避免操作者自身被微生物感染。
[单选题]*
A．对（正确答案）
B．错
答案解析：
答案：
A
52．下列有关微生物培养基种类及配制原则的表述，正确的是（ ）[单选题]*
A．任何培养基都必须含有碳源、氮源、水、无机盐及生长因子
B．液体培养基可用于观察菌落，固体培养基可用于工业生产
C．微生物的生长除受营养因素影响外，还受到pH、O2、渗透压等的影响（正确答案）
D．培养霉菌时需将培养基的pH调节到中性或微碱性
答案解析：
答案 C，培养基一般都含有碳源、氮源、水和无机盐等，有的微生物还需要生长因子；一般固体培养基可用于观察菌落，液体培养基可用于工业生产；微生物的培养过程中除受营养因素影响外，还受到pH、O2、渗透压的影响；培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性。
53．下列有关无菌技术的叙述，错误的是（ ）[单选题]*
A．对实验操作的空间、操作者的衣物和手进行灭菌（正确答案）
B．将用于微生物培养的培养皿、接种工具和培养基等进行灭菌
C．为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行
D．实验操作时避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品接触
答案解析：
答案：
A，灭菌是采用强烈的理化因素对用于微生物培养的培养皿、培养基和接种的用具进行处理，使物体内外部的一切微生物均被杀灭，包括芽孢和孢子。
实验操作者的衣物和手以及操作空间只能进行消毒。
54．纯化大肠杆菌是为了获得大肠杆菌的纯种菌落，接种时尽量接种单个的大肠杆菌，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。
[单选题]*
A．对（正确答案）
B．错
答案解析：
答案：
A
55．倒平板操作的注意事项：
（）。
[单选题]*
倒平板操作的注意事项：
（1）培养基灭菌后，需冷却至50℃左右时才能倒平板，温度过高会烫手，温度过低培养基会凝固。
（2）整个操作在酒精灯火焰旁进行，避免杂菌污染。
（3）倒平板时，要使锥形瓶的瓶口通过火焰。
通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
（4）平板冷凝后，要将平板倒置。
因为平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，既可以避免培养基表面的水分过快地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
（5）倒平板时不要将培养基溅在皿盖与皿底之间，否则此培养基不能用来培养微生物，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
（正确答案）
56．平板划线操作的注意事项：
（）。
[单选题]*
平板划线操作的注意事项：
（1）操作的第一步以及每次划线之前都需要灼烧接种环。
（2）灼烧接种环之后，要待其冷却后才能伸入菌液中，以免温度太高杀死菌种。
（3）除第一次划线外，每次划线都从上一次划线的末端开始，这样能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
（4）划线时最后一个区域不要与第一区域相连。
（5）划线时用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破。
（正确答案）
57.实验结果分析与评价：
（1）如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长，说明培养基制备成功，否则需要重新制备。
[单选题]*
A．对（正确答案）
B．错
答案解析：
答案：
A
58.实验结果分析与评价：
（2）如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，说明接种操作符合要求；如果在培养基中观察到不同形态的菌落，原因可能是菌液不纯、混入其他杂菌或在实验操作过程中被杂菌污染。
[单选题]*
A．对（正确答案）
B．错
答案解析：
答案：
A
59.实验结果分析与评价：
（3）培养12h和24h，形成的菌落大小不同。
培养24h，菌落大，灰色深，光泽度强。
[单选题]*
A．对（正确答案）
B．错
答案解析：
答案：
A
60．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的过程中，关于倒平板的具体描述正确的是（ ）①等培养基冷却至40℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板②将灭过菌的培养皿放在桌面上，左手拔出棉塞③右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰④用左手的拇指和食指打开皿盖⑤右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上皿盖⑥等待平板冷却5～10s，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上[单选题]*
A．①②③④
B．④⑤⑥
C．③⑤（正确答案）
D．①②④⑥
答案解析：
答案 C，①培养基需冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板；②将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿盛有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞；④用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不是打开皿盖；⑥等待平板冷却5～10min，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。
改正后的①～⑥步骤为倒平板的具体操作。
61．倒好平板后，应待培养基凝固后才能将平板倒过来放置；[单选题]*
A．对（正确答案）
B．错
答案解析：
答案：
A
62．接种环在火焰上灼烧后应待接种环冷却，再沾取菌液，否则会灼伤菌种；[单选题]*
A．对（正确答案）
B．错
答案解析：
答案：
A
63．平板划线法不能用于对微生物进行计数。
[单选题]*
A．对（正确答案）
B．错
答案解析：
答案：
A
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