U・75
■«»w
White
IldkrMS
ER
«5
NilM：
h
FI3RO3
is
E
K2
10
I.H
MnSO4.4IKO
5
0.1
213
2.23
■・■
25
4.4
MnSO4.H>O
■■
■■
MB
I（J
■■
ZnSO4.7II2（）
3
1
&6
2
10
L5
Zn.Niin.EDTA
■■
••
w
15
■■
•w
Na>M<3O4.2H,O
■■
0.25
0.025
«.2S
0.25
■■
MoO3
ii.iWl
・•
”
••
CuSO4^|[2O
IHI1
0.05
（L025
0025
0.025
0.025
Co€I.2.6H2O
0.025
0.0025
0.025
■■
■■
alcl3
0.03
■
■■
—
■■
zicmo
■■
（）.03
■电
■•
FcCMILO
■■
1
••
w*
■■
—
RjCSOj},
2.5
・■
u
M
••
M
FeSO4.7H2O
■■
27.8
27.8
■■
27.8
27.8
Xa2.l：
l>TA>2ll2O
■■
37J
373
■■
37.3
573
KaFr.EDTA
—
••
28
-
White
Heller
MS
ER
b5
NitschN.
肌聲
W0
100
1（X）
烟酸（B,）
0JI5
—
0.5
<1.5
1
■B
0.5
ikOl
—
0.5
<）.5
1
（L5
IL5
B,
M]
（）.1
<）.5
10
1
甘敦號
3
—
2
2
—
2
2
叶取
—
—
—
—
—
0.5
—
—
—
—
—
—
（1.05
—
2%
■
3%
4%
2%
2垢
5
培养基成分：
1.无机盐
氮、枝叶生长需要氮素，缺氮老叶先发黄；氮过量，枝叶过度茂盛。
磷缺磷，植株生长缓慢，老叶暗紫色。
锂促进花卉生长健壮，增强抗性，茎秆挺拔。
缺钾，叶尖、叶缘枯焦，叶片呈皱曲状，老叶发黄或火烧状。
铉缺钻，叶片失绿而卷曲，整个叶片向上弯曲凋枯。
二、有机物
、碳水化合物：
选用种类：
蔗糖（或葡萄糖、果糖）等
•蔗糖浓度：
2%〜3%,胚培养为4%〜15%•大生产时可用白糖
糖在培养基的作用：
1）为细胞提供合成新物质的碳骨架
2）为细胞的呼吸代谢提供底物和能量
素
生类酸度用维种血浓作
3）维持渗透压
:
VB1（盐酸硫胺素）、VB6（盐酸毗哆醇）.VB3（烟酸）.Vc（抗坏
:
—L
:
VB1促愈伤组织产生，提高活力
VB6促根生长
Vc
VB3
防组织褐变
与植物代谢和胚的发育有关系
氨基酸：
甘氨酸、精氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等等。
因培养基的种类不同，其种类和浓度不同。
肌醇：
又称环己六醇，在糖类的转化中起作用
常见糖利维生素及其主要性质
名称
分子量
溶解性质
性质
蔗糖
342.30
溶于水、乙醇
无变旋现象
山梨糖
180.16
溶于水
甜味与蔗糖相似
葡萄糖
180.16
溶于水
有变旋现象，以游离态或磷酣形式存在
果糖
180.16
溶于水、乙醇
有变旋现象，甜度駅谎糖
盐酸硫胺素（VB1）
337.28
溶于水、乙醇、甘
受高温濟小，可高温消毒
核黄素（VB2）
376.37
溶于无水乙諄、微溶于水
等电点PHM.0,磁性濬液中易变质，光能加速嫌
盐酸毗哆素（VB6）
205.64
溶于水、乙醇
对光、空气、热稳定是转氨酶的辅酶
钻胺素（VB12）
1355.42
溶于水、乙諄
受高温影响小，可高温消毒，参与丝氨酸转变为甘氨酸过程
烟酸（VPP）
123.11
极易溶于水、乙醇
对空气、光、热、PH值稳定
生物素（VH）
244.31
溶于水、乙醇
对空气温度稳定
叶酸（VM）
441.40
易溶于乙酸、NaOH、勸逹干水
参与生物甲基化作用
抗坏血酸（VC）
176.12
极易溶于水
有较强的还原能力，可做抗氧化剂用，参与酪氨酸代谢及色
肌醇
180.16
易溶于水
植物中广泛存在，可能与IAA的代谢有关
天然复合物
椰乳：
促愈伤组织和细胞培养，用量10-20%,使用注意茎尖大小香蕉泥：
用量150-200ml/L,应用在兰花组培
马铃暮汁液：
用量150-200g/L,使苗壮
水解酪蛋白：
浓度100—200mg/L,应用在微茎尖培养
三、激素
自然界中，植物激素是植物新陈代谢中产生的天然化合物，它能以极微小的量影响到植物的细胞分化、生长.发育，影响到植物的形态建成.开花-结实、成熟.脱落.衰老和休眠、萌发等许多生理生化活动。
在培养基中，其各种成分对培养物影响最大的最显著的就是激素。
激素的种类.浓度、以及配比都会显著的影响愈伤组织的形成、不定根.不定芽的分化,胚状体的形成等。
通常，不同植物，或不同品种，甚至同一植物的不同位置对激素的要求有很大的变化，这主要取决于植物的内源激素水平。
组织培养中使用的激素有的是天然的，如脱落酸（ABA）等，有的是合成的,如二氯苯氧乙酸（2,4-D）
（一）、激素的种类：
u生长素类：
在自然界中，生长素影响茎和节间的伸长.向性.顶端优势.叶片脱落和生根等现象
在组织培养中的主要作用是：
诱导细胞的分裂和根的分化，诱导愈伤组织）组织培养中常用的生长素：
1二氯苯氧乙酸（2,4-D）
2蔡乙酸（NAA）
3阿喙乙酸（IAA）
4删味一一3-丁酸（IBA）
NAA、IAA、IBA被广泛用于生根，2,4-D有利于愈伤组织的诱导和生长。
IAA容易光解，注意用棕色试剂瓶保存，保存时间不要太久。
溶解方法：
XMNaOH或95%酒精，以前者为好保存：
配成一定浓度后,冰箱冷藏保存
2、细胞分裂素
、自然界中，细胞分裂素影响细胞分裂，顶端优势的变化和茎的分化等组织培养中，细胞分类素主要促进细胞分裂和由愈伤组织上或器官上分化不定芽。
细胞分裂素常常与生长素相互配合，用以调节细胞分裂，细胞伸长,细胞分化和器官形成。
常用的细胞分裂素有：
6—节氨基嚓吟（6-BA）
激动素（6•糠氨基嚓吟、KT）
玉米素（ZT）
唾二哇苯基服（thldiazuron.TDZ）
溶解方法：
1MHCL
保存：
配成一定浓度后，冰箱冷藏保存
3.赤霉素
由日本人黑泽1926年发现。
自然界中，赤霉素能够打破休眠.促进果实成长等效果。
虽然己经用于顶端分生组织的培养和维管分化的研究，但在培养基中很少添加，因为它的作用往往是负面的。
虽然也有赤霉素能刺激不定胚发育成正常小植株的报道，但在使用中仍需慎重，不可轻易添加。
赤霉素有20多种，其中在组织培养中最常用的是GA3。
在组织培养中与生长素和细胞分裂素相比，赤霉素不太常用，据报道赤霉素能刺激不定胚正常发育成小植株
溶解方法：
95%酒精
保存：
配成一定浓度后，冰箱冷藏保存
赤霉素易溶于水，但溶于水后不稳定，容易分解
灭菌：
高温易分解，要过滤灭菌
4、脱落酸
、在自然界中，脱落酸能阻碍发育、促进老化、形成休眠芽等作用。
经试验表明，脱落酸有利于胚性愈伤组织形成正常不定芽。
材料的试管保存，加上脱落酸能抑制生长，使继代培养时间延长。
溶解：
易溶于NaHCO3溶液、氯仿或丙酮。
保存：
具有热稳定性，但容易发生光解。
配成一定浓度后，冰箱冷藏保存
（二）、常见培养基中植物激素配方类型
激素配方
再生方式及用途
1.无植物激素
诱导生根、无性胚、愈伤组织形成
2.单加生长素
诱导生根、愈伤组织、无性胚、不定芽
3.单加细胞分裂素
诱导不定芽、侧芽增殖、愈伤组织形成
4.高生长素低细胞分裂素
诱导芽、原球茎增殖、愈伤组织形成
5.低生长素高细胞分裂素
诱导丛芽、愈伤组织形成
6.低生长素低细胞分裂素
诱导不定芽、侧芽增殖
7.等量生长素与细胞分裂素
诱导侧芽增殖
&加生长抑制剂（多效哇、矮壮素等）
壮苗、延缓生长、利于试管苗保存
9.加GA3
打破种子、芽休眠，促进伸长生长
（3）.常见生长调节剂及主要性能一览表
名称
分子量
溶解性质
主要作用
删味乙酸（IAA）
175.19
易溶于热水、乙醇、乙瞇、丙幽
促进细胞的延伸生长和细胞壁结构的松驰，也可用于诱导生根
删喙丁酸（IBA）
203.24
溶于醇、丙酮、醛稀碱、稀酸液
为生根刺激剂
a-蔡乙酸
（NAA）
186.20
易溶于热水、丙酮、離、乙酸、稀碱液
促进细胞生长，刺激生根
2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-
D）
221.04
易溶于醇、丙酮、乙醇、稀碱液
促进愈伤组织形成
赤霉酸（GA3）
346.38
易溶于醇、乙酸乙酯、碳酸氢钠和醋酸钠的水溶液，其钠
促进茎、叶伸长生长，打破休眠
（4）、常见生长调节剂的微摩尔/升浓度与毫克/升的换
微摩尔/升
毫克/升
IAA
IBA
NAA
2,4-D
KT
BA
2iP
ZT
TDZ
GA3
1
0.175
0.203
2
0.186
2
0.2210
0.2152
0.2253
0.2027
0.2190
0.2202
0.3464
2
0.3504
0.406
4
0.372
4
0.4421
0.4304
0.4505
0.4054
0.4380
0.4404
0.6927
3
0.5255
0.609
4
0.558
6
0.6631
0.6456
0.6758
0.6081
0.6570
0.6606
1.0391
4
0.7007
0.812
8
0.744
8
0.8842
0.8608
0.9010
0.8108
0.8760
0.8808
1.3855
5
0.8759
1.0160
0.9310
1.1052
1.0761
1.1263
1.0135
1.0950
1.1010
1.7319
6
1.0511
1.219
2
1.117
2
1.3262
1.2913
1.3516
1.2162
1.3140
1.3212
2.0782
7
1.2263
1.422
4
1.303
4
1.5473
1.5065
1.5768
1.4189
1.5330
1.5414
2.4246
8
1.4014
1.625
6
1.489
6
1.7683
1.7217
1.8021
1.6216
1.7520
1.7616
2.7710
9
1.5766
1.828
8
1.675
8
1.9894
1.9369
2.0273
1.8243
1.9710
1.9818
3.1173
四、培养体支持材料
・1•琼脂
・用量7-10g/L（%-1%）
注意：
1若浓度过高，培养基就会变得很硬，营养物质就难于扩散到培养的组织中。
2当进行营养需要研究时，应注意不要使用琼脂，因为市场供应所有琼脂含有杂质，特别是含有Ca,Mg和微量元素。
・3•其它
卡拉胶、玻璃纤维、滤纸桥、海绵等
五、辅助性物质
・1）•抗生素：
1•常用种类：
青霉素链霉素庆大毒素等
・2.用量：
5%—20%
・3•作用：
防止由外植体内生菌造成的污染。
・4过滤灭菌
・2.）抗氧化物：
常用抗氧化剂及使用：
・半胱氨酸VC（50-200mg/L液洗涤外植体伤口表面）。
・3）活性炭：
・1・作用：
具吸附作用；茎尖初代培养可防褐化；促进新梢增殖（浓度
-%）;促进生根；防止组培苗玻璃化（浓度％）。
利于胚胎培养。
・2.常用浓度：
-10g/L
・3.活性炭的作用
・①对生长的抑制：
其吸附了植物激素
・②对生长的刺激：
其吸附了有抑制作用的物质
培养基配制
一、母液配制（以MS为例）
（一）母液配制流程图
确定培养基
母液分装
（二）母液配制要求：
・I•母液浓缩倍数：
10J00,大量元素10；微量元素、铁盐100；有机物
50；
・2.选用蒸馆水、重蒸馆水、分析纯或化学纯试剂
・3.防止沉淀
・4.激素母液浓度：
lmg/ml,l次配成50或100ml
・5.激素溶解：
IAA、IBA、GA、ZT先溶95%酒精再定容；
・NAA先溶于热水或95%酒精再加水；
・2,4・D先溶于IMNaOH再加水；
・KT、BA先溶于IMHC1再加水。
MS培养基母液的配制
化合物
原配方
扩大
称取量
母液体
配制IL培养基
母液
名称
#/mg
倍数
/mg
积/mL
应移取§/rnL
名称
nh4no.
1650
10
16500
KNOj
1900
10
19000
大蚩
CaCb2H>0
440
10
4400
1000
100
尤索
MgSO4•TH.O
370
10
3700
母液
KH?
PO4
170
•10
1700
MnSO4-H2O
22.3
100
2230
ZnSO4-7H2O
8.6
100
86（）
CoCI-6H20
0.025
100
2.5
■
微虽
CuSOq-5H2O
0.02
100
25
1000
io・
元素
H3BO3
6.2
100
620
母液
Na3MO4-2H2O
0.25
100
25
KI
0.83
100
83
FeSO4-7H2O
28.7
100
2870
1f
10
铁盐
N怂-EDTA
37.3
100
3730
llllJU
母液
烟酸（VQ
0.5
50
25
盐酸毗哆薛（VQ
0.5
50
25
有机
盐酸硫胺奈（V^）
0.1
50
5
500
10
物
肌醉5
1（X）
5（）
5000
母液
甘氮酸
2
50
100
确定配方
培养基熬制—调PH值
称取蔗糖、琼脂
二次定容
培养基配制
接种OO灭菌=扎口
培养基熬制：
1•将定容好的培养液取1/3倒入铝锅中，同时加入称好的蔗糖和琼脂，边煮边搅拌，防止糊底。
2.用旺火煮开，再用文火加热，直至琼脂全部融化。
3•将容量瓶中剩余的液体一并倒入铝锅中，摇晃使均匀。
调PH值：
・用或HC1调PH值为。
分装：
趁热分装，100ml的三角瓶约装入30-40mlo
扎口与灭菌：
・要求封口松紧适宜，系活扣，便于接种操作。
•培养基应及时灭菌，防止变质。
灭菌后，应尽快地转移培养瓶使其冷却，一般应将灭菌后的培养基储藏于30-C以下的室内名，最好储藏在4—HTC的条件下。
应当注意的是，某些生长调节物质如IAA.ZT.ABA等以及某些维生素是不稳定的，不能和其他的培养基一起高压灭菌，而要进行过滤灭菌。
升级会员 