细胞生物学实验报告.docx
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细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告
篇一：
细胞生物学实验报告
实验一：
细胞的形态观察及其大小测量
一、实验目的：
1、通过对原核和真核各种形态细胞的光学显微镜观察，了解细胞的形态及其显微结构；
2、学习显微测量的方法，对细胞的大小有一直观认识。
二、实验材料和仪器：
小白鼠肝细胞切片；鸡血红细胞；蚕豆叶片横切片；
普通光学显微镜；目镜测微尺；镜台测微尺；载玻片；盖玻片。
三、实验步骤：
（一）细胞形态观察
l、动物细胞的观察
（1）人肝细胞切片：
在显微镜下仔细观察肝细胞的形态构造。
（2）鸡血细胞涂片的观察：
观察血细胞的组成；红细胞、白细胞、血小板的形态特点。
2、植物细胞的观察
（1）取蚕豆叶片横切片的观察：
注意表皮细胞和叶肉细胞的基本结构。
（二）细胞的大小和测量
1、卸下目镜的上透镜，将目镜测微尺刻度向下装在目镜的焦平面上，再旋上目镜的上透镜。
2、将镜台测微尺刻度向上放在镜台上夹好，使测微尺分度位于视野中央。
调焦至能看清镜台测微尺的分度。
3、小心移动镜台测微尺和转动目镜测微尺（如目镜测微尺分度模糊，可转动目镜上透镜进行调焦），使两尺左边的一直线重合，然后由左向右找出两尺另一次重合的直线。
4、记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。
按下式计算目镜测微尺每格等于多少μm：
镜台测微尺的格数
目镜测微尺每格的微米数=—————————×10
目镜测微尺的格数
四、实验结果：
1、目镜校正：
40倍显微镜目镜测微尺每格的微米数=17/70=0.24
2、细胞大小的测量：
五、作业与思考：
1、血细胞按含量高低，主要含有：
红细胞，白细胞，血小板。
白细胞最大，红细胞次之，血小板最小。
红细胞：
主要的功能是运送氧。
白细胞：
主要扮演了免疫的角色，当病菌侵入人体时，白细胞能穿过毛细血管壁，集中到病菌入侵部位，将病菌包围，吞噬。
血小板：
止血过程中起着重要作用。
细胞形态见下图。
2、植物细胞一般比动物细胞大一些。
形态图见下。
3、在不同放大倍数下，测定的细胞大小基本一致，但有一些偏差。
放大倍数越大，在视野中同等实际距离下的两点视野距离更大，而更容易测量准确。
实验二：
PAS（PeriodicAcidSchiff）反
应显示糖原和其它多糖物质
一、实验目的
1、熟悉PAS法原理及操作步骤；
2、观察PAS反应的染色结果，并观察多糖在组织细胞中的分布。
二、实验原理
多糖是由多个单糖分子缩合脱水而生成的化合物。
一些不溶性的多糖构成植物和动物的骨架，如植物的纤维素和动物的甲壳素，一般称为结构多糖。
另一些多糖在生物体内作为能量贮存，如淀粉（植物）和糖元（动物），在需要时可以通过生物体内酶系统的作用分解，释放出单糖。
三、实验用品：
过碘酸酒精溶液、Schiff试剂、亚硫酸水溶液、苏木精溶液、二甲苯、100%乙醇+二甲苯（1：
1）。
梯度乙醇溶液：
100％，95％，90％，80％，70％，50％各两份，一份用于脱腊复水，一份用于脱水。
载玻片、盖玻片、染色缸、显微镜、小烧杯、胶头滴管、镊子、刀片、土豆；小鼠肝细胞石蜡切片。
四、实验步骤:
（一）土豆切片的观察
制作土豆徒手切片→过碘酸处理15～30min→70%乙醇1min→schiff试剂15min→亚硫酸水漂洗2～3次→蒸馏水漂洗→镜检
（二）小鼠肝细胞切片的观察
取鼠肝石蜡切片→二甲苯脱蜡约10min→二甲苯+100%乙醇（3min）→梯度乙醇脱二甲苯，在各浓度乙醇（100％，95％，90％，80％，70％，50％）中约2～3min→过碘酸氧化15～30min→蒸馏水漂洗→Schiff试剂15～30min→亚硫酸水漂洗2～3次→蒸馏水漂洗→苏木精染色10min→流水冲洗→梯度乙醇脱水（50％，70％，80％，90％，95％，100％），在各乙醇浓度中约2～3min→100%乙醇+二甲苯2～3min→二甲苯适度透明→指甲油封片→镜检
五、实验结果：
六、作业与思考:
1、描述土豆切片和鼠肝切片中糖原分布特点。
土豆切片中，多糖多在细胞质液泡中。
鼠肝切片中，多糖多在靠近核的区域。
2、影响PAS反应染色效果的关键步骤是什么？
Camey固定液固定；Schiff染色液染色；对分色的控制。
3、如何制作徒手切片？
应注意什么才能得到薄而均匀的切片？
应注意需要连续快速地切下多片薄片，并从中选出较好的切片。
土豆切片观察鼠肝切片观察
实验三：
叶绿体的分离与荧光观察
一、实验目的：
1、通过植物细胞叶绿体的分离,了解细胞器分离的一般原理和方法。
2、观察叶绿体的自发荧光和次生荧光,并熟悉荧光显微镜的使用方法。
二、实验原理：
将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。
将匀浆液1000r/min的条件下离心2min,以去除其中的组织残渣和未被破碎的完整细胞。
然后，在3000r/min的条件下离心5min，即可获得沉淀的叶绿体（混有部分细胞核）。
某些物质在一定短波长的
光（如紫外光）的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光，这种光就称为荧光。
若停止供能，荧光现象立即停止。
有些生物体内的物质受激发光照射后，可直接发出荧光（称为自发荧光）。
有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光（称为间接荧光）。
三、实验材料和仪器：
普通离心机,粗天平,荧光显微镜，剪刀，研钵，移液管，漏斗，滴管,10ml刻度离心管,纱布若干,无荧光载玻片和盖玻片，新鲜菠菜，0.35mol/L氯化钠溶液,0.01%吖啶橙（acridineorange）、
四、实验步骤：
1、叶绿体的分离
（1）选取新鲜的菠菜嫩叶，洗净擦干后，去除叶梗及粗脉并剪碎，称取2g左右，置于预冷的研钵；
（2）加10ml的0.35mol?
L-1NaCl溶液研磨匀浆；
（3）用6层纱布过滤，滤液盛于烧杯中；
（4）取滤液4ml于1000rpm离心2min，弃去沉淀；
（5）将上清液3000rpm离心5min，弃去上清液，沉淀即为叶绿体（混有部分细胞核）；
（6）沉淀用0.35molL-1NaCl溶液悬浮。
2、叶绿体的观察
（1）滴叶绿体悬浮液一滴于载片上，加盖片；在普通光镜下观察，注意观察所分离的叶绿体的形态以及其是否完整。
篇二：
细胞生物学小鼠细胞培养实验报告
广州大学
综合设计性实验报告
学院生命科学学院课程实验项目实验题目专业年级、班别姓名学号任课教师
细胞培养
——小鼠细胞的原代培养
摘要目的探讨体外分离和培养小鼠肾、脑、心肌细胞的方法。
方法采用脱臼法处死新生小鼠，结合酶消化法和组织块法对新生小鼠肾、脑、心肌细胞进行了体外分离、培养。
（用眼科剪把新生小鼠心肌细胞组织剪成小于1mm3大小的植块，然后用胰蛋白酶消化5~10min，最后将心肌组织块接种于培养瓶中进行体外培养。
脑和肾直接进行组织块培养。
）结果比较成功地进行了原代肾、脑、心肌细胞培养，并进行了形态学观察。
结论采用该方法能够实现对小鼠心肌、肾、脑细胞的体外原代培养，较好观察到心肌、脑、肾细胞的形态。
关键词原代培养小鼠细胞组织块法酶消化法
1前言
初步了解动物细胞原代培养的基本方法、原理和基本操作过程，初步掌握无菌操作方法。
学习植块培养法、营养液的配置及酸碱度的调节。
细胞培养是当前细胞生物学乃至整个生命科学研究与生物工程中最基本的实验技术。
当前，细胞培养技术广泛应用于分子生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、细胞工程等领域，已发展成为一种重要的生物技术。
了解动物细胞培养的技术的基本操作过程，观察体外培养细胞的生长特征，并对原代培养有一个基本概念。
结合酶消化法和组织块法通过无菌操作培养新生小鼠细胞。
2实验原理
原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，经体外培养后，直到第一次传代为止。
这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织（或器官），用植块培养法或酶解法，在人工培养下，使其不断地生长及繁殖。
细胞培养是一种操作繁琐而又要求十分严谨的实验技术。
要是细胞能在体外长期生长，必须满足两个基本要求：
一是供给细胞存活所必须的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度，注意外环境酸碱度与渗透压的调节。
二是严格控制无菌条件。
3实验用品
3.1器材
解剖剪、镊1套；眼科剪7把、眼科镊6把；吸管直、弯头各7支，2ml刻度吸管5支；吸管胶头：
小18个、大6个；细胞培养瓶5个；青霉素瓶及瓶塞：
6个（其中一个用于分装胰酶液）；培养皿（用于解剖取材）：
大、小各1套。
烧杯：
5～10ml2个、100ml1个。
用于无菌操作：
解剖镊1把，广口瓶大、小各1个（装消毒棉球），医用棉花、纱布，有盖白瓷盘1个、消毒盒3个、牛皮纸、棉绳。
小培养皿（装盖玻片）1个。
3.2试剂
3.2.1清洗用液：
5%稀盐酸、1%稀盐酸、2%NaOH、洗洁精、单蒸水、三蒸水、清洗液（用
浓硫酸和重铬酸钾配制、全班共用）等。
3.2.2消毒剂（用前配制）：
甲醛、高锰酸钾、新洁尔灭、75%酒精、碘酒、过氧乙酸等。
3.2.3培养用液：
3.2.3.1细胞培养用液（每大组100mL，用100mL盐水瓶装）：
经过滤过的F10（RPMI1640）
培养基占80~90%、经过滤除菌的小牛血清占10~20%,加入经过滤除菌、终浓度各为
100国际单位的抗菌素。
3.2.3.2细胞消化液（每小组1青霉素瓶，约5mL）：
经过滤除菌的0.25%胰蛋白酶或
EDTA—胰蛋白酶液。
3.2.3.3平衡盐溶液：
不含钙、镁离子的Hank液：
每组约50mL，用50（或100）mL盐
水瓶装。
3.3材料
新生白小鼠
4实验方法
4.1技术路线
清洗玻璃仪器,胶塞→制备消毒棉球→包装分装培养液用液用品→消毒分装培养用液用品→分装培养用液→包装原代培养接种用品→实验时的准备工作如小组所示→在小组其他成员已打开腹腔的基础上切取小鼠肾（心肌、脑）组织块→洗去血污→剔除多余成份→剪成小于1mm3大小的植块→接种→贴壁→培养→观察和记录
4.2实验步骤
a）玻璃仪器的初步清洗、开始培育小白鼠（第一批雌鼠与雄鼠混养、观察记录阴道口
的情况等）
b）继续培养乳鼠（第二批雌鼠与雄鼠混养、观察记录阴道口的情况等），玻璃仪器的
清洗（清洗液浸泡）、胶制品的清洗。
c）继续培养乳鼠（常规饲养工作）、完成清洗工作（包括各类物品）、制备消毒用棉球、
包装分装培养用液用品。
d）继续培养乳鼠（常规饲养工作、留意小鼠的出生）、消毒分装培养用液用品、分装
培养用液、包装原代培养接种用品。
e）消毒原代培养接种用品
f）细胞原代培养
（1）洗手操作者用洗涤剂刷洗双手→自来水冲净→新洁尔灭浸泡→进入无菌室
（2）准备工作：
［1］操作者于超净台内用酒精棉球消毒双手，待酒精稍干后，然后用酒精棉球消
毒工作面。
［2］去掉Hank液、细胞培养液、酶液的包装纸。
［3］打开试管、吸管胶头包装，将试管插（尽量斜插）入试管架
［4］取出需用的吸管（直、弯吸管各一支，刻度吸管一支）套上胶头，试管一支，
插入相应的试管中。
［5］打开培养皿以及解剖工具手持端的包装
（3）处死小鼠（脱臼法）→消毒（放入含75%酒精的烧杯中浸泡数秒）。
将以处死消毒
的小鼠转移至超净工作台内的培养皿盖内，背部朝上。
培养皿倒扣于包装纸上
待用。
（4）解剖取肾：
用酒精棉球擦拭背部，在腰部后缘用解剖镊提起皮肤，用解剖剪呈
倒T形剪开皮肤，再用解剖剪剪开腰部两侧肌肉，用眼科剪拿出2个肾脏置于
无菌培养皿中。
（5）用Hank液洗涤皮肤组织2次，吸去Hank。
（6）剪碎组织块：
换另一套眼科剪将组织块剪成小于1mm3的组织块（大小尽量一致）。
用Hank液洗涤，弃Hank液。
（7）酶消化：
将胰蛋白酶液加入装有组织块的青霉素瓶中，盖紧盖子，置超净工作
台内中消化5—10min，知道组织块变松软、粘稠状，颜色略变白色为止。
（8）将培养液直接加入盛有胰蛋白酶和皮肤组织块的青霉素瓶中，利用其中的牛血
清终止酶消化的作用，弃去酶液和培养液的混合液。
加入培养液重复此操作
2—3次。
（9）取一培养瓶，在培养瓶的上面做好标志（在瓶侧注明班、组别、姓名、材料名
称等信息）
（10）用培养液湿润的吸管小心吸取组织块,轻轻吹出到培养瓶的培养瓶面内,按照
一定的间隔和形式用弯吸管将植块排列好
（11）翻转培养瓶（培养面在上方），加入4ml的培养液。
（12）将培养皿加盖封口,送入37度恒温箱内,静置（加入的培养液不浸泡植块，不
从瓶口流出）
（13）按相同的方法取出心脏和脑组织，清洗后直接植块培养。
（14）4小时后，待组织块充分贴壁后，翻转培养瓶使植块浸于培养液中且不漂浮；
（15）观察至于37度培养的细胞，需逐日进行观察，主要观察：
［1］培养物是否被污染，如培养液变为黄色且混浊，表示该瓶被污染。
［2］细胞生长与培养液颜色的变化，如培养液变为紫红色，一般细胞生长不好。
可能是瓶塞未盖紧或营养液pH过高。
［3］培养液若变为桔红色，一般表示细胞生长良好。
经过1～2天培养后，若细
胞生长情况较差或培养液变红了，则可换一次营养液。
换液时也要注意无菌
操作（若经过1～2天培养后,若细胞生长情况较差或培养液变红,则需换液。
无菌室的准备工作如小组方案中所示：
1）从37摄氏度培养箱中取出培养瓶，于超净工作台内吸去全部旧培养液；
2）用平衡盐溶液轻缓漂洗培养物1～2次,弃平衡盐溶液；
3）加入与换液前相同的量的培养液；
4）放回原来的培养箱继续培养。
若经2～3天后，细胞营养液变黄，此时表示细胞已生长。
每日观察结果用文字记录，换液也需记录，在整个培养过程的不同阶段（最少在前、中、后阶段）置倒置显微镜下观察细胞生长情况并拍照记录。
5结果
5.1.图片展示
图一：
小鼠肾细胞
图二：
小鼠肾细胞
5.2.结果分析
（1）小鼠肾细胞培养
肾脏细胞在培养1d后，明显看出细胞开始向组织块四周扩散，既有新生的细胞也有游离的组织块碎片。
翻转组织块能发现更多游离的细胞。
图一二中发亮的细胞即为有活力的肾细胞（梭形）。
失去活力的细胞呈黑色或形状不规则。
篇三：
细胞爬片细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告
细胞爬片
姓名：
学号：
班级：
专业：
同组成员：
一、实验原理
细胞爬片就是让玻片浸在细胞培养基内，细胞在玻片上生长，主要用于组织学，免疫组织化学，冰冻切片，细胞涂片，原位杂交等。
细胞爬片采用的玻片可以是普通的盖玻片也可以用细胞爬片专用玻片。
使用普通盖玻片是，要按照玻璃器皿的清洗方法进行清洗，并进行高压灭菌。
专用玻片通常已经过处理可直接使用。
细胞爬片常用的方法有两种：
（1）细胞爬片时用无菌小镊子将处理好的玻片放到细胞培养板中，可按照普通细胞传代的方法进行细胞的消化和传代。
细胞会在玻片上贴壁生长。
特别提示：
比如在六孔板中放入爬片,六孔板的孔底面积往往会比爬片面积多出一部分，加细胞悬液时常常就是细胞铺满整个孔底，有时细胞生长会出现边缘现象，就是靠近边缘密度要高些,这样处于中央玻片上爬的细胞数量就可能相对较少，实验中所需的细胞数量要比实际在玻片中生长的细胞多。
（2）另一种方法是将玻片放入孔板的孔内后,加细胞悬液时只滴到玻片上,一直滴到液体布满整个玻片又不会溢出玻片边缘（因为液体表面张力作用可以很容易做到这一点!
），小心将孔板放在培养箱中，待细胞贴壁后取出，再滴加培养基布满整个孔底，继续培养，这样玻片上的细胞生长的密度就会很集中，相对比较节省细胞。
二、实验目的
1．巩固细胞传代技术。
2．掌握细胞爬片的方法。
3.为细胞骨架的观察提供实验材料
三、实验器材
1.细胞
CHO细胞、鸡胚成纤维细胞、HeLa
2.试剂
DMEM培养基、血清、抗生素、胰酶
3.仪器
超净工作台、CO2培养箱、倒置相差显微镜
4.其它用品：
盖玻片（无菌）、35mm细胞培养皿、试管、移液管，滴管，酒精灯、75％酒精棉球、废液缸。
四、方法与步骤
（1）入无菌室之前首先穿实验服，佩戴一次性手套、帽子。
要用肥皂洗手,用新洁尔灭溶液拭擦双手消毒。
（2）关闭已照射超净台台面20分钟左右的紫外灯，打开抽风机清洁空气。
打开照明灯。
（3）超净台台面应整洁，用75%酒精擦双手消毒，并擦拭超净台台面。
（4）准备好所需试剂及仪器，摆放在超净台中。
（5）按照1%的比例向含10%FCS的DMEM培养基中加入双抗（本次试验的培养基约为70ml，故加入700μl的双抗）
（6）用灭菌小镊子将处理好的盖玻片轻轻放入35mm培养皿中。
（放入前先过火，将盖玻片上的酒精蒸发掉，以免影响细胞生长）
（7）打开鸡胚成纤维细胞瓶盖并在酒精灯上轻轻烧口消毒，倒掉或吸出培养基。
（8）向培养瓶加入1滴管的胰酶,显微镜下观察细胞的消化状态，待细胞大部分收缩、突起、变圆，细胞边界清晰时，即可竖立或翻转培养瓶停止消化，在超净台内靠近火焰处弃胰酶。
注意勿使细胞提早脱壁落入消化液中。
（9）加两滴管含10%FCS的DMEM培养基反复冲瓶壁上的细胞层，至全部冲下，滴管轻轻吹打，混匀，成细胞悬液，细胞计数，将细胞稀释成1×10/mL。
（10）在35mm培养皿中加入2mL细胞悬液，镜下观察细胞密度和状态，标记细胞名称及操作者。
（11）培养皿两侧用医用橡皮膏粘贴好。
向原细胞培养瓶中补加培养2ml，做好标记。
（12）将细胞培养皿及培养瓶放入5%CO2、37℃培养箱培养，其中培养瓶瓶口需拧松半圈。
（13）将用过的试剂仪器等摆回原处，将超净台打扫干净，关闭照明灯及抽风机。
（14）实验后数小时后去观察培养皿中细胞爬片情况。
五、注意事项5
1.盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻。
2.把握好传代时机，80%～90%的细胞融合度为最佳，过早细胞量少，过晚细胞生长状态不佳。
3.消化时间要适度，过短细胞不易脱落，过长细胞可脱落流失并造成细胞损伤。
4.注意无菌操作的规范。
六、实验结果与讨论
我们对原代培养的鸡胚成纤维细胞进行了爬片，在培养过夜后观察细胞爬片情况，显微镜下可观察到鸡胚组织块附近有大量细胞迁移，且迁移出来的细胞数目较上一次观察相比有所增多。
迁移出来的细胞呈纤维状，贴壁生长。
爬片一天后，第二天上午时老师通知我们细胞爬片的培养皿被污染了。
实验失败原因分析：
实验时无菌操作不规范，在使用滴管、镊子等工具时没有注意无菌操作，吸取培养液、细胞悬液时，应专管专用，一旦发现吸管口接触了手和其他污染物品应弃去，以防止污染扩大或造成培养物之间的交叉污染。
我们小组四个人的细胞均发生了污染，有可能是小组在吸取胰酶、血清时操作不规范，使得实验材料被污染；实验操作没有在酒精灯附近操作，或者是实验操作太接近实验台边缘，导致细胞污染。
操作时尽量不要谈话，咳嗽以防止来自唾沫和呼出的气流所造成的污染。
【参考文献】
[1]桑建利,谭信.细胞生物学实验指导.北京:
科学出版社,2010.
[2]北京师范大学生命科学学院.细胞生物学实验.北京:
北京师范大学生命科学学院,2015.9.
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