分子生物学实验经常使用缓冲液的配制方式.docx
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分子生物学实验经常使用缓冲液的配制方式
各类缓冲液的配制方式
Na2HPO4-柠檬酸钠缓冲液
PH
LNa2HPO4（ml）
L柠檬酸钠（ml）
PH
LNa2HPO4（ml）
L柠檬酸钠（ml）
Na2HPO4。
2H2O，分子量=L溶液含L
柠檬酸.H2O，分子量=L溶液含L
柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液（L）
PH
L柠檬酸
（ml）
L柠檬酸
钠（ml）
PH
L柠檬酸
（ml）
L柠檬酸钠（ml）
柠檬酸.H2O，分子量=L溶液含L
柠檬酸钠.2H2O，分子量=；L溶液含g/L
醋酸缓冲液（L，18℃）
PH
LNaAC（ml）
LHAC（ml）
PH
LNaAC（ml）
LHAC（ml）
H2O,分子量=L溶液含L
（1）醋酸盐溶液的配制：
醋酸－醋酸钠缓冲液
取醋酸钠,加冰醋酸20ml，再加水稀释至250ml,即得。
醋酸－醋酸钠缓冲液
取无水醋酸钠20g,加水300ml溶解后，加溴酚蓝指示液1ml及冰醋酸60～80ml，至溶液从蓝色转变成纯绿色，再加水稀释至1000ml，即得。
醋酸－醋酸钠缓冲液
取2mol/L醋酸钠溶液13ml与2mol/L醋酸溶液87ml,加每1ml含铜1mg的硫酸铜溶液,再加水稀释至1000ml，即得。
醋酸－醋酸钠缓冲液
取醋酸钠18g,加冰醋酸,再加水稀释至1000ml,即得。
醋酸－醋酸钠缓冲液
取醋酸钠,加水50ml使溶解，用冰醋酸调节pH值至，再加水稀释至100ml，即得。
醋酸－醋酸钠缓冲液
取醋酸钠，加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后，加水稀释至500ml，即得。
用醋酸和醋酸钠配制的缓冲溶液的PH=PKa+lg[C（NaAc）/C（HAc）]（在此，C（HAc）指醋酸的浓度，C（NaAc）指醋酸钠的浓度,Ka是醋酸的解离常数=*10-5（乘10的-5次方），PKa=-lgKa=，将PH=代入，可得C（NaAc）/C（HAc）=通常咱们配制时会使C（HAc）=L，或是C（HAc）=L等。
若是配制C（HAc）=L，则C（NaAc）=L称量醋酸钠固体质量为82*=46克量取冰醋酸体积为*1000/=。
将称好的醋酸钠和量好的冰醋酸加入1000mL水中溶解、搅拌均匀即可。
固然若想配制其它的浓度，也可照公式计算即可，通常缓冲溶液不能配的太稀，不然缓冲能力要下降，太浓的话又浪费试剂。
苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液
PH
LNaOH（ml）
L苯二甲酸氢钾（ml）
加水至（ml）
L苯二甲酸氢钾溶液：
称取在硫酸干燥器中干燥过24小时的苯二甲酸氢钾溶于水中，稀释至500ml。
磷酸缓冲液（L）
PH
LNa2HPO4（ml）
LNaH2PO4（ml）
PH
LNa2HPO4（ml）
LNaH2PO4（ml）
5．8
Na2HPO4.2H2O,分子量=，L溶液含L
NaH2PO4.2H2O,分子量=，L溶液含L
NaH2PO4.H2O,分子量=，L溶液含L
Na2HPO4.12H2O,,分子量=，L溶液含L
磷酸盐缓冲液（PBS）配制方式
PBS
PBS（135mMNaCl,2.7mMKCl,1.5mMKH2PO4,and8mMK2HPO4，pH
PBS缓冲液（～）：
NaCl137mmol/L，KClL，Na2HPO4L，KH2PO4L
称7.9gNaCl，0.2gKCl，0.24gKH2PO4（or1.44gNa2HPO4）和1.8gK2HPO4，溶于800ml蒸馏水中，用HCl调剂溶液的pH值至，最后加蒸馏水定容至1L。
保留于4℃冰箱中即可。
需要注意的是，通常所说的浓度0.01M指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na离子或K离子的浓度，Na离子和K离子只是用来调剂渗透压的。
母液的配制：
0.2MNa2HPO4：
称取71.6gNa2HPO4-12H2O，溶于1000ml水
0.2MNaH2PO4：
称取31.2gNaH2PO4-2H2O，溶于1000ml水
各类浓度PB（pH=的配制：
先配0.2MPB（pH=，100ml）：
取19mlL的NaH2PO4，81mlL的Na2HPO4,即可。
然后只需将0.2MPB（pH=按相应比例适当稀释即可，如：
0.1MPB（PH=）：
取500ml0.2MPB，加水稀释至1000ml即可。
0.01MPB（PH=）：
取50ml0.2MPB，加水稀释至1000ml即可。
0.02MPB（PH=）：
取100ml0.2MPB，加水稀释至1000ml即可。
若需要NaCl的话，加入NaCl至%（g/100ml）即可。
另：
其它各类另PH值的0.2MPB（100ml）配方：
pH0.2MNaH2PO4（ml）0.2MNa2HPO4（ml）
928
9010
8515
5149
4555
3862
3367
2872
2377
1981
1684
1387
793
0.01M磷酸盐缓冲液（PBS）配制方式
称取8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调剂溶液的pH值至，最后加蒸馏水定容至1L即可。
在15lbf/in2（1034×105Pa）高压下蒸气灭菌（至少20分钟），保留存于室温或4℃冰箱中。
需要注意的是，通常所说的浓度0.01M指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na离子或K离子的浓度，Na离子和K离子只是用来调剂渗透压的。
若是是用于免疫组化的话，则需要在配置的时候别离加入100u/ml青霉素和链霉素以后再调PH、定容、灭菌消毒。
PH
H2O1000100010001000
NaCl
Na2HPO4
NaH2PO4
依照体会来看，新鲜配置的PBS搅匀后其PH值约在之间，可是在温度的阻碍下，尤其在夏天，其电离常数发生了改变，在通过日夜的时刻后，PH值会明显改变（我亲自测过偏酸）。
因此做实验的同窗可要注意了，PH值可能会阻碍实验结果，乃至可能致使阴性。
因此务必记得那个时候和天气，要增强实验条件操纵问题。
每次利用前最好用试纸测一下留宿了的PBS，若是发生偏酸或偏碱，注意从头换新液。
PBS缓冲液
称取NaCl8g，KCl0.2g，Na2HPO4?
12H2O3.63g,KH2PO40.24g，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至，加水定容至1L，常温保留备用。
PBST缓冲液
取300μlTween-20加入PBS100ml中，混匀后即刻利用。
现用现配。
若是是把所有固体加大十倍，配置为浓缩液，工作时候十倍稀释，那么，在刚配好浓缩液时，PH在左右，明显偏酸。
不能用盐酸调。
尽管能够用氢氧化钠颗粒调，可是有更方便的方式。
十倍稀释以后，PH自动升高到所需要的值。
不需要其它任何处置。
那个能够先取少量试一试，配好以后再测一次~
的PBS配方详细
1.NaCl137mmol/L，KClL，Na2HPO4L，KH2PO4L
2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.滴加浓盐酸将pH值调剂至，然后加入去离子水将溶液定容至1L。
4.高温高压灭菌后，室温保留。
注意：
上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。
LPBS（磷酸缓冲液PhosphateBufferSolution，PBS）的配制：
甲液：
LNa2HPO4溶液：
称取磷酸氢二钠9.465g7.099g,加蒸馏水至1000ml;
乙液：
LKH2P04溶液:
称取磷酸二氢钾,9.07g6.803g,加蒸馏水至1000m1。
将甲乙液分装在棕色瓶内，于4℃冰箱中保留，历时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液,见下表:
pH甲液ml乙液mI
你要配制pH=的PBS，可用甲、乙液各50ml混合即可。
硼酸缓冲液（L硼酸盐）
PH
L硼砂（ml）
L硼酸（ml）
PH
L硼砂（ml）
L硼酸
（ml）
硼砂,分子量=,L溶液=L硼砂含L
硼酸，分子量=,L溶液含L
硼砂易失去结晶水，必需在带塞得瓶中保留；硼砂溶液也能够用半中和的硼酸溶液代替
盐酸-氯化钾缓冲液
PH
LHCl（ml）
LKCl（ml）
加水至（ml）
PH
LHCl（ml）
LKCl（ml）
加水至（ml）
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
LKCl溶液：
溶氯化钾于水中，稀释至500ml
苯二甲酸氢钾-盐酸缓冲液
PH
LHCl（ml）
L苯二甲酸氢钾（ml）
加水至（mi）
PH
LHCl（ml）
L苯二甲酸氢钾（ml）
加水至（mi）
100
100
100
100
100
100
100
100
100
L苯二甲酸氢钾溶液：
称取在硫酸干燥器中干燥过24小时额苯二甲酸氢钾溶于水中，稀释至500ml
磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液
PH
LNaOH（ml）
L磷酸二氢钾（ml）
加水至（ml）
PH
LNaOH（ml）
L磷酸二氢钾（ml）
加水至（ml）
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
25．00
100
100
L磷酸二氢钾溶液：
溶磷酸二氢钾于水中，稀释至500ml
硼酸-氯化钾-氢氧化钠缓冲液
PH
LNaOH（ml）
L硼酸-氯化钾（ml）
加水至（ml）
PH
LNaOH（ml）
L硼酸-氯化钾（ml）
加水至（ml）
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
L硼酸-氯化钾溶液：
溶硼酸和氯化钾于水中稀释至500ml
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