实验复习 鉴定试验生2.docx

实验复习 鉴定试验生2.docx

《实验复习 鉴定试验生2.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《实验复习 鉴定试验生2.docx（18页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

实验复习鉴定试验生2

第二部分生物体内物质的分离、鉴定技术

明确考试说明要求

类型

具体内容

生物体内物质的分离、鉴定技术

光和色素的分离

糖、蛋白质、脂肪的鉴定

DNA的粗提取与鉴定

一、实验归类

实验名称

鉴定对象

试剂

颜色

生物材料

备注

二、生物学中常用的试剂和药品

试剂

鉴定（颜色）的物质（结构）

是否加热

颜色

注意事项

三、生物体内物质的鉴定试验

（一）生物组织中还原性糖和蛋白质的鉴定

实验名称

可溶性还原糖、油脂、蛋白质的鉴定

教学目标

1、尝试用化学试剂检测生物组织中的还原糖、油脂和蛋白质。

2、初步掌握鉴定生物组织中还原糖、油脂和蛋白质的基本方法。

实验原理

某些化学试剂能使生物组织中的有机物产生特定的颜色反应。

1．糖中的还原糖（如、、、）与（斐林试剂）发生作用，可以生成色沉淀。

2.蛋白质与发生作用，可以产生。

3.能使细胞中的油脂呈橙黄色。

因此可以根据与某些化学试剂所产生的颜色反应，鉴定生物组织中还原糖、油脂和蛋白质的存在。

鉴定成分

还原糖

油脂

蛋白质

实验材料

实验步骤

制备样液？

↓

本尼迪特试剂

↓

沸水浴加热

↓

观察现象

徒手切片

↓

苏丹Ⅲ染色

↓

50%乙醇洗去浮色

↓

制作装片

↓

显微镜观察

（先低倍后高倍）

制备样液

↓

双缩脲试剂A

↓

双缩脲试剂B

↓

振荡

↓

观察现象

实验现象

练习巩固：

1．使用本尼迪特（斐林）试剂鉴定可溶性还原糖时,必须将试剂的甲液和乙液

　　A．分别加入样液中　　　　　　B．混匀后再加入样液

　　C．加热后再加入样液　　　　　D．同时加入样液中

2．某些糖遇本尼迪特（斐林）试剂能发生如下反应：

单糖+2Cu（OH）2→Cu2O+2H2O+复杂化合物

　　　　　　砖红色

　这表明反应过程中糖被（）

　　A．氧化　　　B．还原　　　C．染色　　　D．分解为Cu2O和H2O

3．将面团包在纱布中在清水中搓洗，鉴定粘留在纱布上的粘稠物质和洗出的白浆分别用的试剂是（）　　

A．碘液、苏丹Ⅲ溶液　　　　　　　B．双缩脲试剂、碘液

　　C．双缩脲试剂、苏丹Ⅲ溶液　　　　D．碘液、本尼迪特（斐林）试剂

4．现有下列生物材料：

①苹果②豆浆③梨④花生种子⑤蛋清⑥马铃薯块茎⑦西红柿

⑴适于用来鉴定还原性糖的最好材料有________________，原因是____________________。

使用的试剂是________________，该试剂与待测样品均匀混合后颜色为________________，沸水浴后现象为________________。

⑵适合用于鉴定蛋白质的材料有________________，鉴定蛋白质使用的试剂为__________，使用该试剂时应先将________________与待测样品混合均匀，再加入________________。

⑶适合用于鉴定淀粉的材料有________________，适合用于鉴定脂肪的材料有__________，使用苏丹Ⅲ（或苏丹Ⅳ）染色时，试剂将细胞内的脂肪染色而油珠外部的细胞质却未着色，这说明染色剂具有________________特性。

使用苏丹Ⅳ染色时实验现象是____________。

（二）叶绿体中光合色素的提取和分离（必修一P87-88）

教学目标

1、学会提取和分离叶绿体中色素的方法。

2、分离叶绿体中的4种色素。

实验原理

1、提取：

叶绿体中色素能够溶解于中，所以可以用等提取叶绿体色素。

2、分离：

色素在层析液中的不同，溶解度高的随层析液在滤纸上扩散得，溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得。

所以据此原理4种色素就会随着层析液在滤纸上的扩散而分离开。

鉴定成分

叶绿体中的色素

实验材料

新鲜的绿色叶片（如菠菜叶片）

实验药品

丙酮：

二氧化硅：

碳酸钙：

调节,防止研磨时被破坏层析液：

实验步骤

实验现象

从上向下4条色素带:

橙黄色——（最快、最窄）说明：

↓

黄色—-—叶黄素

↓

蓝绿色——（最宽）说明：

↓

黄绿色——（最慢）说明：

讨

论

题

1、滤纸上的滤液细线，为什么不能触到层析液？

滤液细线如果触到层析液，滤纸上叶绿体中的色素就会，实验就会失败。

２、提取和分离叶绿体中色素的关键是什么？

提取关键：

1、叶片要。

2、研磨要；

3、滤液收集后，要及时。

分离关键：

1、滤液细线，且含较多的（可画两三次）；

2、滤液细线不能。

练习巩固：

1．本实验中，效果最佳的叶片是（）

A．新鲜、柔嫩、色浓绿　　　　B．角质层发达的革质叶片

　　C．肥厚．多汁　　　　　　　　D．新生的嫩叶

2．滤纸上的色素细线一定不能没过层析液，否则（）

A．色素扩散会不均匀　　　　B．色素会溶解到层析液中

　　C．色素扩散速度变慢　　　　D．色素带彼此重叠

3．下图表示的是叶绿体色素分离的装置，正确的是（）　　

4．（广东文基）下列有关“叶绿体色素的提取和分离”实验的叙述正确的是（　　　）

A．加入碳酸钙防止滤液挥发B．用NaCl溶液提取叶片中的色素

C．用无水酒精或丙酮分离滤液中的色素D．加入二氧化硅（石英砂）有利于充分研磨

5．分别在A、B、C三个研钵中加2克剪碎的新鲜菠菜绿叶，并按下表所示添加试剂，经研磨、过滤得到三种不同颜色的溶液，即：

深绿色、黄绿色（或褐色）、几乎无色。

注：

“+”表示加；“－”表示不加。

　⑴A处理得到的溶液颜色是________________，原因是_____________________________。

　⑵B处理得到的溶液颜色是________________，原因是_____________________________。

　⑶C处理得到的溶液颜色是________________，原因是_____________________________。

（三）DNA的粗提取和鉴定实验

教学目标

1、学会粗提取和鉴定DNA的方法。

2、鉴定提取出的DNA。

实验原理

◆DNA在中的溶解度随而变化，NaCl溶液浓度为时，DNA溶解度最低，可使；

◆DNA不溶于，但某些物质可溶于酒精,可用于进一步提取；

◆DNA遇（沸水浴）被染成以鉴定DNA（甲基绿使DNA着色呈蓝绿色）。

鉴定成分

DNA

实验材料

DNA含量相对较高的生物组织，如：

鸡血细胞液

实验药品

0.1g/ml的柠檬酸钠溶液——

2mol/L的NaCl——体积分数95%的酒精——

0.015mol/L的NaCl——二苯胺（或甲基绿）——

实

验

步

骤

选取适宜的实验材料：

如：

鸡血细胞

↓

破碎细胞，获取含DNA的滤液（鸡血细胞+蒸馏水→搅拌→过滤，取滤液）

↓

去除滤液中的杂质：

1、用2mol/L的NaCl溶液溶解DNA

2、加蒸馏水析出DNA

3、过滤含DNA的粘稠物

4、将DNA的粘稠物再溶解于2mol/LNaCl

5、过滤含DNA的NaCl的溶液（除去非DNA物质）

析出含杂质较少的DNA：

在上述滤液中加入95%的冷酒精,用玻璃棒卷起白色丝状物（DNA粗提物）

鉴定DNA：

溶解了DNA的NaCl溶液

↓

加入二苯胺

↓

沸水浴加热5min

↓

观察：

呈蓝色（冷却）

讨论

题

１、提取鸡血细胞中的DNA时，为什么要除去血液中的上清夜？

２、步骤１和步骤3中加入蒸馏水的目的是否相同？

3、实验中出现的丝状物的粗细是否表示一个DNA分子直径的大小？

为什么？

4、DNA两次析出使用的试剂一样吗？

分别是什么？

第1次：

第2次：

练习巩固

1．在真核细胞结构中DNA主要分布在（）　　

A．细胞核　　　B．线粒体　　　C．细胞膜　　　D．细胞质

2．若用100mL样品提取DNA，下列含DNA最多的样品是（）　　

A．鸡的血液　　　B．兔的血液　C．鸡的血细胞　　D．兔的血细胞

3．能够促使血细胞更快破裂释放出核物质的操作是（）　　

A．向细胞加适量的蒸馏水，小心静置

　　B．向细胞加适量的生理盐水，小心静置

　　C．向细胞加适量的蒸馏水，同时用玻棒搅动

　　D．向细胞加适量的生理盐水，同时用玻棒搅动

4．用过滤的方法得到含有DNA的氯化钠溶液后，还要用冷酒精处理，可以得到较纯净的DNA，这是因为（）　　

A．DNA易溶于酒精，而滤液中某些杂质不易溶于酒精

　　B．DNA不易溶于酒精，而滤液中某些杂质易溶于酒精

　　C．DNA和滤液中其他成分更易溶于酒精

　　D．DNA和滤液中其他成分都不溶于酒精

5．做DNA粗提取和鉴定实验时，实验材料用鸡血而不用猪血的原因是（）　　

A．鸡血的价格比猪血的价格低

　　B．猪的红细胞没有细胞核，不易提取到DNA

　　C．鸡血不凝固，猪血会凝固

　　D．用鸡血提取DNA比用猪血提取操作简便

四、归纳总结：

（一）物质的提取方法：

　　总的思路——需要将细胞或细胞器破碎，将物质释放出来。

　　常用方法——研磨，破碎细胞；

　　　　　　　　榨汁，破碎细胞；

　　　　　　　　利用渗透吸水原理将细胞破碎

（二）物质的分离方法：

　　利用要提取的物质和混合物中杂质在某溶液中的溶解度不同进行分离；

　　利用要提取的物质和混合物中杂质物理、化学性质不同，将杂质分解或沉淀

（三）物质的鉴定：

利用要提取的物质和某化学试剂产生特殊的颜色反应

　　例题：

萝卜贮藏根组织细胞中是否存在蛋白质和DNA？

某生物小组对此进行研究，他们从网上查阅资料得知：

①蛋白质在10%NaCl溶液中可沉淀析出；②在蛋白质溶液中，加入双缩脲试剂，溶液呈现特有的颜色；③DNA溶于10%NaCl溶液但在95%酒精中呈白色絮状沉淀，析出；④DNA与甲基绿染液结合，在光镜下可见蓝绿色丝状物。

　　实验材料：

白萝卜。

　　实验用具：

粉碎机、烧杯、漏斗、试管、滤纸、玻棒、镊子、载玻片、天平、纱布。

　　药品及试剂：

蒸馏水、NaCl、95%酒精、甲基绿染液、双缩脲试剂、蛋白质标准样品。

　　请你根据所提供的条件参与实验设计并完成实验。

　　一、材料处理：

　二、提取：

三、鉴定及结果：

五、练习：

1．下列生物学研究选择的技术或方法恰当的是（）

A．在"DNA粗提取与鉴定”实验中，用50％的冷酒精可提取出含杂质较少的DNA分子

B．在“蛋白质鉴定”实验中，可用斐林试剂代替双缩脲试剂

C．用H标记的胸腺嘧啶研究转录过程

D．用样方法进行植物种群密度的调查

2．酒精是生物实验常用试剂之一，下列实验中关于酒精的使用，错误的是（）

A．观察花生种子子叶细胞脂肪颗粒时，用体积分数为50％的酒精洗去浮色

B．制作洋葱根尖细胞装片时，用体积分数为95％的酒精对解离后的根尖漂洗

C．色素的提取和分离实验中，用无水酒精作有机溶剂提取色素

D．DNA粗提取过程中，用体积分数为95％的冷却酒精可以进一步纯化DNA

4．（2011年江苏卷）某研究组获得了水稻的叶黄素缺失突变体。

将其叶片进行了红光照射光吸收测定和色素层析条带分析（从上至下），与正常叶片相比，实验结果是B

A．光吸收差异显著，色素带缺第2条B．光吸收差异不显著，色素带缺第2条

C．光吸收差异显著，色素带缺第3条D．光吸收差异不显著，色素带缺第3条

3．下表是关于DNA的粗提取与鉴定实验中，所使用的材料、操作及其作用的表述，正确的是（　　）

试剂

操作

作用

A

柠檬酸钠溶液

与鸡血混合

使细胞破裂

B

蒸馏水

与鸡血细胞混合

保持细胞形状

C

蒸馏水

加入到溶解有DNA的NaCl溶液中

析出DNA丝状物

D

冷却的酒精

加入到过滤后含DNA的NaCl溶液中

产生特定的颜色反应

4．（2011年江苏卷）某种铁线莲的根茎可作中药，有重要经济价值。

下表为不同遮光处理对其光合作用影响的结果，相关叙述正确的是（多选）

A．适当的遮光处理，可提高其干重

B．叶绿素含量与净光合速率呈正相关

C．叶绿素a/b可作为其利用弱光能力的判断指标

D．遮光90%时，铁线莲不进行光合作用

5.（11年新课标卷）下表是根据实验目的，所需选用的试剂与预期的实验结果正确的是

实验目的

试剂

预期的实验结果

A

观察根尖分生组织细胞的有丝分裂

醋酸洋红

染色体被染成紫红色

B

检测植物组织中的脂肪

双缩脲试剂

脂肪颗粒被染成红色

C

检测植物组织中的葡萄糖

甲基绿

葡萄糖与甲基绿作用，生成绿色沉淀

D

观察DNA和RNA在细胞中的分布

斐林试剂

吡罗红

斐林试剂将DNA染成绿色，吡罗红将RNA染成红色

6.（11年山东卷）只有在保持细胞活性的条件下，才能显示细胞中某物质或结构的实验是

A.苏丹Ⅲ染色体观察花生种子子叶细胞中的脂肪

B.龙胆紫染色观察洋葱根尖分生区细胞的有丝分裂

C.健那绿（詹纳斯绿B）染色观察动物细胞的线粒体

D.甲基绿、派洛宁（呲罗红）染色观察动物细胞中的DNA和RNA

7.（2011年福建卷）（10分）

使用染色剂染色是生物学实验常用的方法，某同学对有关实验做了如下归纳：

实验

观察对象

染色剂

实验结果

①

花生子叶细胞的脂肪颗粒

苏丹Ⅲ

脂肪颗粒被染成橘黄色

②

人口腔上皮细胞中的DNA和RNA分布

毗罗红甲基绿

细胞内染成绿色的面积显著大于染成红色的面积

③

人口腔上皮细胞中的线粒体

健那绿

线粒体呈现蓝绿色

④

洋葱根尖分生组织细胞的有丝分裂

龙胆紫

间期细胞不着色，分裂期细胞染色体着色

（1）上述实验结果的归纳，正确的有_______（实验序号）。

（2）实验②和实验④在染色之前，都使用了一定浓度的盐酸处理。

其中，实验②用盐酸可改变______通透性，加速染色剂进入细胞；实验④用盐酸与酒精混合，对材料进行解离。

在两个实验操作中，都要注意盐酸浓度，处理材料时的温度和______。

（3）健那绿使线粒体着色与线粒体内膜的酶系统有关。

线粒体内膜上的酶主要催化有氧呼吸的第______阶反应，该反应变化是____________。

8.（11年广东卷）（16分）

中国的饮食讲究“色香味”，颜色会影响消费。

小李同学拟研发“绿色”食用色素，他以生长很快的入侵植物水葫芦为材料进行如下实验。

I.提取叶绿素

II.探究pH对叶绿素稳定性的影响

取一些叶绿素粗产品，配成一定浓度的溶液，于室温（约25℃）下进行实验，方法和结果如下表。

实验组号

叶绿素溶液（mL）

调pH至

处理时间（min）

溶液颜色

①

3.0

Y

10

绿色

②

3.0

7.0

10

绿色

③

3.0

6.0

10

黄绿色

④

3.0

5.0

10

黄褐色

注：

叶绿素被破坏后变成黄褐色。

根据所学知识和实验结果，请回答：

（1）提取食用叶绿素的X应该为，原因是。

（2）表中Y应该为，原因是。

（3）若用作食品色素，天然叶绿素色素不适用于食品，否则。

（4）小李想了解叶绿素产品中是否含有其他色素，请你提供监测方法并写出主要步骤。

9．DNA在NaCl溶液中的溶解度有二重性，随着NaCl溶液浓度的变化而变化。

（1）请在下列不同浓度的NaCl溶液中选出能使DNA析出最彻底的一种（　　）和溶解度最高的一种（　　）（在括号内填选项）

A．0.14mol/LB．2mol/L

C．0.15mol/LD．0.3mol/L

（2）DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质却可以溶于酒精溶液，利用这一原理可以________________，可以推测溶于酒精中的物质可能有________________。

（3）利用DNA遇________呈蓝色的特性，将该物质作为鉴定________的试剂。

其实验过程要点是向放有____________的试管中加入4mL的__________。

混合均匀后，将试管置于________5min，待试管________，观察试管中溶液颜色的变化，这个实验也说明DNA耐________温。

10.（江苏卷）（8分）不同生态环境对植物光合速率会产生影响。

某课题组测定生长于A地（平原）和B地（山区）银杏叶片不同时时间的光合速率，结果如右图。

（1）植物中叶绿素通常和蛋白质结合成为结合型叶绿素。

在某些环境因素影影响下，部分结合型叶绿素与蛋白质分离，成为游离型叶绿素。

A、B两地银杏叶片中叶绿素含量测定结果见下表：

①请在答题卡的指定位置完成总叶绿素含量与采样日期关系的二维曲线圈。

▲

②从表中数据分析，导致银杏叶片光合速率下降的主要原因是▲。

（2）为提取银杏叶片中的叶绿素，研磨前在研钵中除加入剪碎的叶片外，还应加入▲。

经快速研磨、过滤，将滤液收集到试管中，塞上橡皮塞；将试管置于适当的光照下2-3min后,试管内的氧含量▲。

（3）a、b是7月1日和10月1日B地银杏叶绿体亚显微结构典型照片，推测▲（填字母）是10月1日的叶绿体照片，理由是▲。

分离、鉴定实验习题巩固：

1、在斐林试剂鉴定还原性糖的实验中，下列实验材料中最理想的是（）

A、番茄B、马铃薯C、葡萄D、西瓜

2、用苏丹Ⅲ鉴定花生种子含脂肪的实验中，所用的方法是（）

A、苏丹Ⅲ使花生的组织样液呈蓝色B、苏丹Ⅲ使花生组织样液呈橘黄色

C、苏丹Ⅲ使细胞中出现着色的颗粒D、苏丹Ⅲ将花生的子叶染成砖红色

3．（江苏生物）若以鸡蛋蛋白液为材料进行蛋白质鉴定实验，发现蛋白液与双缩脲试剂发生反应后会粘固在试管壁上。

下列关于这一现象形成原因的描述中正确的是（　　）

A．鸡蛋蛋白液稀释不够，搅拌不匀B．只添加了双缩脲试剂A，未添加双缩脲试剂B

C．鸡蛋蛋白液不是合适的实验材料D．蛋白液与双缩脲试剂的反应时间不够长

４．（广东理基）下列健康人的4种液体样本中，能与双缩脲试剂发生紫色颜色反应的是

①尿液②胃液③汗液④唾液

A．①③B．①④C．②③D．②④

５．（广东生物）为进一步确定来源不同的A、B、C、D、E五种物质（或结构）的具体类型，进行了下列实验，现象与结果如下：

①各种物质（或结构）的性质、染色反应的结果，见下表：

A

B

C

D

E

来源

猪血

马肝

蛙表皮

棉花

霉菌

水溶性

＋

—

十

—

＋

灰分

＋

—

＋

—

—

染

色

反

应

甲基绿溶液

—

—

＋

—

—

斐林试剂

—

—

—

—

—

苏丹Ⅲ溶液

—

＋

—

—

—

双缩脉试剂

＋

—

＋

—

＋

碘液

—

—

—

—

—

注：

＋：

有（溶解）；一：

无（不溶解）；灰分指物质充分燃烧后剩下的部分。

②A为红色，检测A的灰分后发现其中含有Fe元素。

③将适量的E溶液加入盛有D的试管中，混合一段时间后，混合液能与斐林试剂发生作用，生成砖红色沉淀。

根据以上实验现象和结果，推断出：

A、；B、；C、；D、；E、

６．（广东文基）下列有关“叶绿体色素的提取和分离”实验的叙述正确的是（　　　）

A．加入碳酸钙防止滤液挥发B．用NaCl溶液提取叶片中的色素

C．用无水酒精或丙酮分离滤液中的色素D．加入二氧化硅（石英砂）有利于充分研磨

７．（上海生物）在叶绿体色素的提取和分离实验中，收集到的滤液绿色过浅，其原因可能是（　　　）

①未加石英砂、研磨不充分②一次加入大量的无水酒精提取

③分次加入少量无水酒精提取④使用放置数天的菠菜叶

A．①②③B．②③④C．①③④D．①②④

８．（广东生物）

（1）甲同学利用新鲜的玉米绿色叶片进行“叶绿体色素提取和分离”实验，在滤纸上出现了四条清晰的色素带，其中呈黄绿色的色素带为。

（2）该同学改变层析液组成后继续进行实验，滤纸条上只出现了黄、绿两条色素带。

他用刀片裁出带有色素带的滤纸条，用乙醚分别溶解条带上的色素，浓缩后用一分析仪器检测，通过分析色素溶液的

来判断条带的色素种类。

（3）实验结束几天后，乙、丙两同学发现部分预留叶片已变黄。

乙同学认为这是由于叶片中某些色素降解所造成的，丙同学则认为某些色素含量增加。

根据所学知识，你将如何设计实验来判断两个同学的观点是否正确？

９．（江苏生物）在采用鸡血为材料对DNA进行粗提取的实验中，若需进一步提取杂质较少的DNA，可以依据的原理是

A．在物质的量浓度为0．14mol／L的氯化钠溶液中DNA的溶解度最小

B．DNA遇二苯胺在沸水浴的条件下会染成蓝色

C．DNA不溶于酒精而细胞中的一些物质易溶于酒精

D．质量浓度为0．1g／mL的柠檬酸钠溶液具有抗凝血作用

１０、下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是（）

A、氯化钠的浓度越低，对DNA的溶解度越大B、人血也可代替鸡血进行实验

C、柠檬酸钠的主要作用是加速血细胞破裂D、DNA不能溶于酒精

１１、在DNA的粗提取过程中，为了提取鸡血细胞中的核物质，需向鸡血细胞液中注入适量的液体，既使条件很不充分的条件下，所注液体也不能用（）

A、未灭菌处理的但无污染的池水B、未长期静置的自来水

C、灭菌后的蒸馏水D、灭菌后的生理盐水

１２、在DNA粗提取实验中，向在溶解DNA的NaCL溶液中，不断加入蒸馏水的目的是（　　）

A、有利于溶解DNA　　　　　　　　　　B、有利于溶解杂质

C、减少DNA的溶解度　　　　　　　　　D、减少杂质的溶解度

１３、下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是（）

A、氯化钠的浓度越低，对DNA的溶解度越大　B、人体的血液不可代替鸡血进行该实验

C、柠檬酸钠的主要作用是加速血细胞破裂　　　

D、利用DNA易溶于酒精的特点可除去DNA中的部分杂质

１４、下列实验中所用试剂错误的是（）

　Ａ．在观察植物细胞有丝分裂实验中，使用醋酸洋红溶液使染色体着色

　Ｂ．在提取叶绿体色素实验中，使用丙酮提取色素

　Ｃ．在ＤＮＡ的粗提取与鉴定实验中，使用氯化钠溶液析出ＤＮＡ

　Ｄ．在蛋白质的鉴定实验中，使用苏丹Ⅲ染液鉴定蛋白质

15、为鉴定可溶性糖的存在，下列

（1）——（4）中较理想的选材以及（5）——（8）中用于检验的试剂分别是（）

（1）苹果或梨

（2）花生种子（3）黄豆种子（4）芝麻种子（5）苏丹Ⅲ溶液（6）双缩脲试剂（7）斐林试剂（