病理科优化制片及染色流程.doc

病理科优化制片及染色流程.doc

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邻水县人民医院

病理科优化石蜡切片

1、切片前首先装好切片刀，把刀牢牢固定，否则，切片中就会发生许多人为现象。

（最常见的人为现象是波纹，厚薄不均等）。

2、蜡块装到切片机的蜡块夹上，夹持要平稳牢固。

调整好蜡块的方位，不能偏斜，刀刃与蜡块的上、下缘平行。

切片刀与蜡块的平面之间应保持一定的角度（清除角），一般为3～8度，以免刀刃面将组织刮坏。

3、修蜡块时要循序渐进，力争修出最大面，又要防止小组织被修坏、修光。

4、切片时连续转动手轮，用力要平稳、均匀。

常规切片厚3～5μm。

5、切下的蜡片相连成带状。

待蜡带切至一定长度时，右手用镊子夹住蜡片末端，左手持毛笔轻轻将蜡带的另一端与切片刀拨离。

6、将蜡片较光滑的一面朝下置于温水中（通常捞片水温在42℃左右），并用镊子帮助展开，去除皱纹后，选择完整、无划痕、厚薄均匀的蜡片，附贴到载玻片上。

7、附贴时，务使蜡片与玻片之间无气泡。

玻片一端应留有1/3的位置贴号码标签用。

将蜡片附贴在另外2/3的中心位置。

8、切片放入62℃烤箱中约30～60分钟烤片，以免发生脱片。

为了防止脱片可以选用涂甘油蛋清片和挂胶片。

比较常用的挂胶片有明胶片，APES胶片和多聚赖氨酸胶片等，免疫组化染色尤需要使用胶片。

病理科优化冷冻切片

1、选取适当的新鲜组织块，放在冷冻托上，放入冷冻切片机中冻透。

2、修块、切片。

冷冻切片通常厚6～8μm并把切片贴于载玻片上。

3、在酒精灯上轻烤片刻，放入固定液中2分钟。

4、然后快速HE染色（可在酒精灯上加热进行，以缩短时间）。

5、封片、贴标签后，送诊断室（15分钟之内完成）。

石蜡切片常见问题及优化解决方法

问题

原因

解决方法

组织发脆

脱水、透明、浸蜡时间过长、温度过高，或与组织本身质地有关

在切片时，边切边用嘴向蜡片吹气，可能会好些

切片卷起

刀不锋利，或刀锋在另一面，或刀角度过大，切片

太厚等等

更换切片刀口，调整刀角度在8到10之间，调整切片厚度在3-5微米左右

蜡片弯曲

刀锋不均，切片刀未磨直，切片刀与蜡块不平行

将刀安放平整，调整蜡块切面与刀架平行

厚薄不均

刀、刀座及蜡块未夹紧，组织太硬，或切片机主轴太向前，或切片机已磨损。

夹紧刀架，并拧紧相关螺丝，摆放切片机主轴在合适位置，找相关专业人员对切片机进行维护，调整组织脱水程序以对组织合理脱水

切片出现裂痕

刀有缺口，石蜡内有杂质，组织内有钙化、骨片或有线结,也可能会有棉纸纤维等

更换切片刀口，将石蜡过滤后使用，清除蜡块中的异物，对于骨或者钙化物先脱钙后再切片

切片不连片，切不下片，切片很厚，或者切片后蜡块发白，内陷

组织脱水不佳

先将蜡块溶解，取出组织，放入加热水浴的丙酮内（80℃），30～60分钟，再进行透明浸蜡包埋切片

HE染色操作常规流程

切好的片子应在60~70℃左右的烤箱中烘烤30分钟以上才能进行染色。

HE染色手工程序：

脱蜡

1、二甲苯Ⅰ（AR）5分钟

2、二甲苯Ⅱ（AR）5分钟

3、100%酒精Ⅰ（AR、无水乙醇）1分钟

4、100%酒精Ⅱ（AR、无水乙醇）1分钟

5、95%酒精（工业酒精或医用酒精）1分钟

6、80%酒精（工业酒精或医用酒精）1分钟

7、自来水浸洗1分钟

以上3~7称为进水过程。

染色

1、苏木素染液6分钟

2、水冼1分钟

3、0.5-1%盐酸酒精分化片刻（上下三次颜色由蓝变红）

4、自来水冲冼15分钟以上

（然后95%酒精片刻，主要是避免所带的水份稀释以下的伊红酒精，此步可免）

5、1%伊红酒精浸染1~2分钟

6、水冼1分钟

脱水、透明、封固

95%酒精Ⅰ1分钟

95%酒精Ⅱ1分钟

100%酒精Ⅰ1分钟

100%酒精Ⅱ1分钟

石炭酸二甲苯（1:

3）10秒钟

以上称为脱水。

二甲苯Ⅰ透明1分钟

取出后用中性树胶（上海产，预先用二甲苯溶解，粘稠度适中即可）封固。

染色结果：

核：

蓝黑色

胞浆：

不同程度的粉红色

肌纤维：

较深的粉红色

胶元纤维：

淡红色

红细胞：

桔红色。

病理染色注意事项

1、配制染液和其他溶液时，要根据需要和染液的保存期限决定配制数量。

2、需要保存再用的染液和试剂，必须贴上标签，注明名称、浓度、配制日期和用处等，妥善存放。

经常使用的染液和试剂要经常过滤或更换新液。

3、染色器皿须洗涤干净。

必要时用酸洗液处理。

将玻璃器皿浸泡于酸洗液中半天至1天，自来水冲洗数小时，再用洗涤剂刷洗，自来水冲洗数小时，蒸馏水冲洗后备用。

（酸洗液配制：

重铬酸钾300g，硫酸300ml，蒸馏水（可用自来水）3000ml。

先将重铬酸钾溶解在蒸馏水中，徐徐加入硫酸。

注意：

加酸时必须缓慢！

并用玻璃棒不停地搅拌！

）。

5、染色是利用染料的不同作用，使组织与染料以不同方式进行结合。

常规染色是苏木精和伊红染色（简称HE染色）。

特殊染色是根据诊断的需要对组织中的某些成分进行非常规的染色。

冷冻切片也用HE染色。

少量或单个冷冻切片时手工操作比较方便。

冷冻切片染染色要求在短时间（10分钟）内完成，在保证质量的前提下!

!

越快越好。

HE染色常见问题及优化解决方法

问题

原因

解决方法

染色发白

二甲苯脱蜡时间不够，有蜡残留

延长脱蜡时间或更换二甲苯

染色发灰

组织固定脱水不佳或者染液配制PH不符

改进组织固定脱水程序或者改进染液配方

着色不均匀

染液太少或者分布不均

增加染液量或在染液中加入甘油等增强液体亲和力

染色偏蓝

苏木素染色时间过久或者分化不足

减少苏木素染色时间或者延长分化时间

染色偏红

伊红染色时间过长或者苏木素染色不足

改进苏木素染色或者减少伊红染色时间

核着色欠佳

组织脱水不佳

加强组织固定脱水，将切片用生物穿透剂进行处理以利于苏木素着色

病理切片质量控制

1、诊断人员在接到当日切片并验收后，检查、核实所制作的组织学切片的数量及质量，在技术室送片记录本或工作流程单上签字。

如发现切片数与取材数不符，应及时与技术人员联系，进行核查。

对当天质量不好的切片做记录，指明技术上存在的缺陷，并于当天交技术室。

2、技术室收到切片质量记录，要求在24小时内答复，并立即纠正原不足之处。

另外，科内质量管理小组按分工，每季度复查切片一次，查出问题要采取适当措施于以纠正，并注意落实情况。

3、切片是技术含量很高的步骤，同一蜡块，用同一台切片机，同一把刀，不同的操作者会切出不同质量的片子。

所以要求：

切片刀必须锋利；切片厚度3～5μm，切片完整，无污染，无皱褶，无刀痕。

组织片应贴附在标签外，剩余玻片的中间。

4、胃镜、纤维支气管镜、穿刺等小活检组织切片须作连续性切片，数量不得少于6张（6～20张）。

5、切片、捞片时应严格分块完成，切忌在水面上残留上一块的碎片，以杜绝污染。

6、贴（裱）片时，必须注意蜡块编号与载玻片上的编号完全一致，杜绝错误。

7、切好的白片要进行烤片化蜡。

烤片温度应在60～62℃左右，时间不能少于20分钟或用电吹风吹。

8、染色必须按程序操作，染色试剂必须及时过虑或更换。

HE染色适中，核、浆分化对比清晰，避免过红或过蓝（注意防止苏木素渣子和伊红碎片出现）。

9、切片封固前必须经酒精充分脱水，二甲苯透明，湿封。

不得用温箱烤干或电吹风吹得过分干燥，再封片。

10、封片时不得有气泡，不得有树胶外溢。

11、标签贴于玻片一侧，编号字迹必须清楚、整齐，且不易褪色。

12、染好切片后贴标签时，编号要与玻片编号一致，杜绝错误。

13、制片工作一般应在12～24小时内完成。

切片完成后交付医师时，必须按照记录当面清点。

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