检验医学SOP文件4免疫室作业指导书概论.docx

检验医学SOP文件4免疫室作业指导书概论.docx

《检验医学SOP文件4免疫室作业指导书概论.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《检验医学SOP文件4免疫室作业指导书概论.docx（147页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

检验医学SOP文件4免疫室作业指导书概论

免疫室作业指导书

文件编号：

ABCD-3-MY-01~52

第A版

编制：

审核：

批准：

生效日期：

2015年4月8日

ABCD人民医院检验科

序号

主题内容

代号

页号

1

血清乙型肝炎病毒表面抗原检测

ABCD-3-MY-01

6

2

血清乙型肝炎病毒表面抗体检测

ABCD-3-MY-02

9

3

血清乙型肝炎病毒e抗原检测

ABCD-3-MY-03

12

4

血清乙型肝炎病毒e抗体检测

ABCD-3-MY-04

15

5

血清乙型肝炎病毒核心抗体检测

ABCD-3-MY-05

18

6

甲型肝炎病毒--IgM检测

ABCD-3-MY-06

21

7

血清丙型肝炎病毒抗体检测

ABCD-3-MY-07

24

8

血清麻疹IgM抗体试验

ABCD-3-MY-08

28

9

人类免疫缺陷病毒抗体检测

ABCD-3-MY-09

31

10

梅毒甲苯胺红不加热血清试验

ABCD-3-MY-10

34

11

梅毒螺旋体特异性抗体检测

ABCD-3-MY-11

36

12

免疫球蛋白A（IgA）测定

ABCD-3-MY-12

39

13

免疫球蛋白M（IgM）测定

ABCD-3-MY-13

42

14

免疫球蛋白G（IgG）测定

ABCD-3-MY-14

45

15

补体C3测定（免疫比浊法）

ABCD-3-MY-15

48

16

补体C4测定（免疫比浊法）

ABCD-3-MY-16

51

17

类风湿因子（RF）测定

ABCD-3-MY-17

54

18

抗链球菌溶血素O（ASO）测定

ABCD-3-MY-18

56

19

C反应蛋白（CRP）测定

ABCD-3-MY-19

58

20

C反应蛋白（CRP）定量测定

ABCD-3-MY-20

60

21

支原体肺炎血清学试验

ABCD-3-MY-21

63

22

D二聚体检测（胶乳凝集法）

ABCD-3-MY-22

65

23

甲胎蛋白（AFP）定量测定

ABCD-3-MY-23

68

24

癌胚抗原（CEA）定量测定

ABCD-3-MY-24

72

25

糖链抗原125（CA125）定量测定

ABCD-3-MY-25

76

26

CA153定量测定

ABCD-3-MY-26

80

27

糖链抗原199（CA199）定量测定

ABCD-3-MY-27

84

28

F-PSA定量测定

ABCD-3-MY-28

88

29

T-PSA定量测定

ABCD-3-MY-29

92

30

B12定量测定

ABCD-3-MY-30

96

31

铁蛋白定量测定

ABCD-3-MY-31

100

32

叶酸（Folate）定量测定

ABCD-3-MY-32

104

33

人绒毛膜促性腺激素定量测定

ABCD-3-MY-33

108

34

血（尿）b2-MG微球蛋白定量测定

ABCD-3-MY-34

112

35

肌红蛋白定量测定

ABCD-3-MY-35

116

36

肌钙蛋白-I定量测定

ABCD-3-MY-36

120

37

CK-MB定量测定

ABCD-3-MY-37

124

38

HBsAg半定量测定

ABCD-3-MY-38

128

39

HBsAb定量测定

ABCD-3-MY-39

131

40

HBeAg半定量测定

ABCD-3-MY-40

135

41

HBeAb半定量测定

ABCD-3-MY-41

138

42

HBcAb半定量测定

ABCD-3-MY-42

141

43

HBcAb-IgM半定量测定

ABCD-3-MY-43

144

44

CMV-IGM半定量测定

ABCD-3-MY-44

147

45

RUBELLA-IGM半定量测定

ABCD-3-MY-45

150

46

微量加样器的质控

ABCD-3-MY-46

154

47

酶标分析仪操作维护规程

ABCD-3-MY-47

157

48

全自动酶标洗板机操作维护规程

ABCD-3-MY-48

159

49

特种蛋白测定仪操作维护规程

ABCD-3-MY-49

160

50

AxSYM免疫分析仪操作维护规程

ABCD-3-MY-50

165

51

免疫学室内质量控制操作程序

ABCD-3-MY-51

169

52

免疫学检验室间质量评价（EQA）

ABCD-3-MY-52

174

修订页

序号

文件编号

页码

需更改的内容

更改内容

批准人

批准日期

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20

21

血清乙型肝炎病毒表面抗原检测（ELISA）

1.原理

在微孔条上预包被被纯化乙肝表面抗体，配以酶标记抗体（HBsAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗（HBsAg）。

2.标本采集

2.1采集前病人准备：

受检者应空腹

2.2标本种类：

血清或血浆

2.3标本要求：

采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。

3.标本储存：

2-8℃保存不应超过1周，-20℃不应超过3个月，-70℃长期保存，应避免反复冻融。

4.标本运输：

密封，室温运输。

5.标本拒收标准：

污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。

6.试剂

6.1试剂名称：

乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒

6.2试剂生产厂家：

英科新创（厦门）科技有限公司。

6.3包装规格：

96Test/Kit

6.4试剂盒组成：

HBsAg微孔板，HBsAg酶标记抗体，HBsAg阳性对照血清，HBsAg阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。

6.5试剂储存条件及有效期：

2-8℃避光保存，有效期9个月。

7.仪器设备

7.1仪器名称：

自动酶标仪

7.2仪器厂家：

Rayto

7.3仪器型号：

RT-2100

8.操作步骤

8.1平衡：

将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。

8.2配液：

浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：

19稀释后使用。

8.3编号：

将微孔条固定于支架，按序编号。

8.4加样：

分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50l于相应孔中。

8.5加酶：

分别在每孔中加入酶标记抗体50l，轻拍混匀。

8.6温育：

置37℃温育60分钟，室温平衡5分钟。

8.7洗涤：

用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。

8.8显色：

每孔加入底物A、B各50l，轻拍混匀，置37℃暗处15分钟。

8.9终止：

每孔加终止液50l，混匀。

8.10测定：

用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。

9.结果判断与分析

9.1临界值（C.O.）的计算：

临界值=阴性对照孔OD值N×2.1，阴性对照OD均值大于0.1时应重新试验，小于0.05时以0.05计算。

9.2结果判定：

样品OD值S/C.O>=1者为HBsAg阳性

样品OD值S/C.O<1者为HBsAg阴性

10.质量控制

每次试验用含2ng/mlHBsAg的质控血清同步检测，以S/CO值绘制质控图，S/CO值应在控制范围内；如失控，则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。

11.参考范围：

阴性

12.临床意义：

在血清中HBsAg的存在表明有急性乙肝或慢性乙肝或为无症状携带者。

13.操作性能：

灵敏度为ng/ml，特异性高。

14.方法局限性

14.1.对于病毒复制较强的病人，病毒量较大，出现HOOK现象，造成假阴性，须将病人血清进行稀释后再重新试验。

14.2.如出现跳孔现象可能造成假阳性。

14.3.样品显色深浅与样品中抗原的含量没有一定正相关。

15.注意事项

15.1.每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。

15.2.洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。

15.3.加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。

如果滴加，滴加前应弃去1—2滴。

滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。

注意勿将试剂滴在孔壁上。

15.4.所有样品都应按传染源处理。

15.5.封口膜使用说明

15.5.1.微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。

在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。

15.5.2.微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。

15.6.不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。

16.当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：

应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。

17.参考文献：

中华人民共和国卫生部医政司编。

全国临床检验操作规程（第二版）410-412页。

18.其它：

必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。

血清乙型肝炎病毒表面抗体检测（ELISA）

1.原理

在微孔条上预包被被纯化乙肝表面抗原，配以酶标记抗原（HBsAg-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗体（HBsAb）。

2.标本采集

2.1采集前病人准备：

受检者应空腹

2.2标本种类：

血清或血浆

2.3标本要求：

采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。

3.标本储存：

2-8℃保存不应超过1周，-20℃不应超过3个月，-70℃长期保存，应避免反复冻融。

4.标本运输：

密封，室温运输。

5.标本拒收标准：

污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。

6.试剂

6.1试剂名称：

乙型肝炎病毒表面抗体诊断试剂盒

6.2试剂生产厂家：

英科新创（厦门）科技有限公司。

6.3包装规格：

96Test/Kit

6.4试剂盒组成：

HBsAb微孔板，HBsAb酶标记抗原，HBsAb阳性对照血清，HBsAb阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。

6.5试剂储存条件及有效期：

2-8℃避光保存，有效期9个月。

7.仪器设备

7.1仪器名称：

自动酶标仪

7.2仪器厂家：

Rayto

7.3仪器型号：

RT-2100

8.操作步骤

8.1平衡：

将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。

8.2配液：

浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：

19稀释后使用。

8.3编号：

将微孔条固定于支架，按序编号。

8.4加样：

分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50l于相应孔中。

8.5加酶：

分别在每孔中加入酶标记抗体50l，轻拍混匀。

8.6温育：

置37℃温育60分钟，室温平衡5分钟。

8.7洗涤：

用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。

8.8显色：

每孔加入底物A、B各50l，轻拍混匀，置37℃暗处15分钟。

8.9终止：

每孔加终止液50l，混匀。

8.10测定：

用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。

9.结果判断与分析

9.1临界值（C.O.）的计算：

临界值=阴性对照孔OD值N×2.1，阴性对照OD均值大于0.1时应重新试验，小于0.05时以0.05计算。

9.2结果判定：

样品OD值S/C.O>=1者为HBsAb阳性

样品OD值S/C.O<1者为HbsAb阴性

10.质量控制

每次试验用含30mIu/mlHBsAb的质控血清同步检测，S/CO值应在控制范围内；如失控，则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。

11.参考范围

阴性或阳性

12.临床意义

HBsAb阳性表明存在HBV的保护性抗体。

13.操作性能：

灵敏度高，特异性好。

14.方法局限性：

样品显色深浅与样品中抗体的含量没有一定正相关。

15.注意事项

15.1每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。

15.2洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。

15.3加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。

如果滴加，滴加前应弃去1—2滴。

滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。

注意勿将试剂滴在孔壁上。

15.4所有样品都应按传染源处理。

15.5封口膜使用说明

15.5.1微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。

在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。

15.5.2微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。

15.6不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。

16.当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：

应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。

17.参考文献：

中华人民共和国卫生部医政司编。

全国临床检验操作规程（第二版）412页。

18.其它：

必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。

血清乙型肝炎病毒e抗原检测（ELISA）

1.原理

在微孔条上预包被被纯化乙肝e抗体（HBeAb），配以酶标记抗原（HBeAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝e抗原（HBeAg）。

2.标本采集

2.1采集前病人准备：

受检者应空腹

2.2标本种类：

血清或血浆

2.3标本要求：

采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。

3.标本储存：

2-8℃保存不应超过1周，-20℃不应超过3个月，-70℃长期保存，应避免反复冻融。

4.标本运输：

密封，室温运输。

5.标本拒收标准：

污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。

6.试剂

6.1试剂名称：

乙型肝炎病毒e抗原诊断试剂盒

6.2试剂生产厂家：

英科新创（厦门）科技有限公司。

6.3包装规格：

96Test/Kit

6.4试剂盒组成：

HBeAg微孔板，HBeAg酶标记抗原，HBeAg阳性对照血清，HBeAg阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。

6.5试剂储存条件及有效期：

2-8℃避光保存，有效期9个月。

7.仪器设备

7.1仪器名称：

自动酶标仪

7.2仪器厂家：

Rayto

7.3仪器型号：

RT-2100C

8.操作步骤

8.1平衡：

将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。

8.2配液：

浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：

19稀释后使用。

8.3编号：

将微孔条固定于支架，按序编号。

8.4加样：

分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50l于相应孔中。

8.5加酶：

分别在每孔中加入酶标记抗体50l，轻拍混匀。

8.6温育：

置37℃温育60分钟，室温平衡5分钟。

8.7洗涤：

用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。

8.8显色：

每孔加入底物A、B各50l，轻拍混匀，置37℃暗处15分钟。

8.9终止：

每孔加终止液50l，混匀。

8.10测定：

用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记

录结果）。

9.结果判断与分析

9.1临界值（C.O.）的计算：

临界值=阴性对照孔OD值N×2.1，阴性对照OD均值大于0.1时应重新试验，小于0.05时以0.05计算。

9.2结果判定：

样品OD值S/C.O>=1者为HBeAg阳性

样品OD值S/C.O<1者为HBeAg阴性

10.质量控制：

每次试验用含量为2NCU/ml的HBeAg质控血清同步检测，S/CO值应在控制范围内；如失控，则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。

11.参考范围：

阴性或阳性

12.临床意义：

HBeAg阳性可作为体内HBV处在复制状态及血清具有传染性的一个标志；持续阳性则揭示转为慢性。

13.操作性能：

灵敏度高，特异性好。

14.方法局限性：

样品显色深浅与样品中抗原的含量没有一定正相关。

15.注意事项

15.1每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。

15.2洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。

15.3加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。

如果滴加，滴加前应弃去1—2滴。

滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。

注意勿将试剂滴在孔壁上。

15.4所有样品都应按传染源处理。

15.5封口膜使用说明

15.5.1微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存

以避免受潮。

在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。

15.5.2微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。

15.6不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。

16.当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：

应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。

17.参考文献：

中华人民共和国卫生部医政司编。

全国临床检验操作规程（第二版）412-413页。

18.其它：

必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。

血清乙型肝炎病毒e抗体检测（ELISA）

1.原理

在微孔条上预包被被纯化乙肝e抗体（HBeAb），配以酶标记抗原（HBeAb-HRP）、中和抗原（HBeAg）及TMB等其它试剂，采用竞争法原理检测人血清（或血浆）中乙肝e抗体（HBeAb）。

2.标本采集

2.1采集前病人准备：

受检者应空腹。

2.2标本种类：

血清或血浆。

2.3标本要求：

采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。

3.标本储存：

2-8℃保存不应超过24小时，-20℃不应超过3个月，

-70℃长期保存，应避免反复冻融。

4.标本运输：

密封，室温运输。

5.标本拒收标准：

污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。

6.试剂

6.1试剂名称：

乙型肝炎病毒e抗体诊断试剂盒

6.2试剂生产厂家：

英科新创（厦门）科技有限公司。

6.3包装规格：

96Test/Kit

6.4试剂盒组成：

HBeAb微孔板，HBeAb酶标记抗原，中和抗原，HBeAb阳性对照血清，HBeAb阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。

6.5试剂储存条件及有效期：

2-8℃避光保存，有效期9个月。

7.仪器设备

7.1仪器名称：

自动酶标仪

7.2仪器厂家：

Rayto

7.3仪器型号：

RT-2100C

8.操作步骤

8.1平衡：

将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。

8.2配液：

浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：

19稀释后使用。

8.3编号：

将微孔条固定于支架，按序编号。

8.4加样：

分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50l于相应孔中。

8.5加酶：

分别在每孔中加入酶标记抗体50l，轻拍混匀。

8.6中和：

分别在每孔中加入中和抗原（HBeAg）50l，轻拍混匀。

8.7温育：

置37℃温育60分钟，室温平衡5分钟。

8.8洗涤：

用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。

8.9显色：

每孔加入底物A、B各50l，轻拍混匀，置37℃暗处15分钟。

8.10终止：

每孔加终止液50l，混匀。

8.11测定：

用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。

9.结果判断与分析

9.1临界值（C.O.）的计算：

待测样品为原倍血清时，临界值＝阴性对照孔OD值N×0.2，待测样品为非原倍血清时，临界值＝阴性对照孔OD值N×0.5，（非原倍血清是指稀释血清、质控血清等）。

9.2结果判定：

样品OD值S/C.O<=1者为HBeAb阳性

样品OD值S/C.O>1者为HBeAb阴性

10.质量控制：

每次试验用含量为2NCU/ml的HBeAb质控血清同步检测，S/CO值应在控制范围内；如失控,则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。

11.参考范围：

阴性

12.临床意义：

HBeAb阳性可作为体内HBV处在复制状态及血清具有传染性的一个标志。

阳性表示机体已产生免疫力，病毒活力降低，传染性减弱，预后好。

13.操作性能：

灵敏度高，特异性好。

14.方法局限性：

样品显色深浅与样品中抗体的含量没有一定相关。

15.注意事项

15.1每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。

15.2洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。

15.3加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。

如果滴加，滴加前应弃去1-2滴。

滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。

注意勿将试剂滴在孔壁上。

15.4所有样品都应按传染源处理。

15.5封口膜使用说明

15.5.1微孔板拆封