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化妆品中二恶烷的检测方法

附件2

化妆品中二噁烷的检测方法

（征求意见稿）

1范围

本方法规定了气相色谱-质谱法测定化妆品中二噁烷的含量。

本方法适用于液态水基类、膏霜乳液类和凝胶类化妆品中二噁烷含量的测定。

2方法提要

样品在顶空瓶中经过加热提取后，用气相色谱-质谱法测定，采用离子相对丰度比进行定性，以选择离子监测模式进行测定，以标准曲线法计算含量。

本方法对二噁烷的检出限为2µg，定量下限为4µg；取样量为2.0g时，检出浓度为1µg/g，最低定量浓度为2µg/g。

3试剂和材料

除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯或以上规格，水为GB/T6682规定的一级水。

3.1标准物质：

二噁烷，纯度>99.0%。

3.2氯化钠。

3.3标准储备溶液（1000µg/mL）：

称取二噁烷标准物质0.1g（精确到0.0001g），置100mL容量瓶中，用水配制成浓度为1000µg/mL的标准储备溶液。

3.4标准系列溶液：

用水将标准储备溶液（3.3）分别配成二噁烷浓度为0μg/mL、4μg/mL、10μg/mL、20μg/mL，50μg/mL、100μg/mL的标准系列溶液。

4仪器和设备

4.1气相色谱仪，配有质谱检测器（MSD）。

4.2顶空进样器，或气密针。

4.3天平。

4.4超声波清洗仪。

4.5顶空瓶：

20mL。

5分析步骤

5.1系列浓度基质标准溶液制备

称取基质空白2.0g（精确到0.0001g）6份，分别加入标准系列溶液（3.4）1.0mL，置于顶空进样瓶中，加入1g氯化钠（3.2），加入7mL水，密封后超声，轻轻摇匀，即得质量浓度为0、2、5、10、25、50μg/g的系列浓度基质标准溶液。

5.2样品处理

称取样品2.0g（精确到0.0001g），置于顶空进样瓶中，加入1g氯化钠（3.2），加入8mL水，密封后超声，轻轻摇匀，置于顶空进样器中，待测。

当样品中二噁烷含量超过标准曲线范围后，应对样品进行适当稀释并选择合适的标准曲线范围进行检测。

5.3参考条件

5.3.1参考气质条件

色谱柱：

交联5%苯基甲基硅烷毛细管柱，30m×0.25mm（内径）×0.25µm或等效色谱柱；

色谱柱升温程序：

40℃（8min）220℃（10min），可根据实验室情况适当调整升温程序；

进样口温度：

210℃；

色谱-质谱接口温度：

280℃；

载气：

氦气，纯度≥99.999%，流速1.0mL/min；

电离方式：

EI；

电离能量：

70eV；

进样方式：

分流进样，分流比1︰1；

进样量：

1.0mL；

测定方式：

选择离子检测（SIM），选择检测离子（m/z）见表1。

表1检测离子和离子相对丰度比

检测离子（m/z）

离子相对丰度比（%）

允许相对偏差（%）

88*

100

相当浓度标准品测定离子相对丰度比

±20

相当浓度标准品测定离子相对丰度比

±25

注：

选择检测离子中带“*”的为定量离子

5.3.2参考顶空进样条件

汽化室温度：

70℃；

定量管温度：

150℃；

传输线温度：

200℃；

振荡情况：

振荡；

汽液平衡时间：

40min；

进样时间：

1min。

5.4测定

5.4.1定性

在“5.3”气质条件下，对待测溶液（5.2）进行测定，如果检出色谱峰的保留时间与二噁烷标准溶液一致，并且在扣除背景后，样品质谱图中所选择的检测离子均出现，而且检测离子相对丰度比与相当浓度标准溶液的离子相对丰度比一致（见表1），则可以判定样品中存在二噁烷。

5.4.2定量

在“5.3”气质条件下，取系列浓度基质标准溶液（5.1）分别进样，进行质谱分析，以系列基质标准溶液的浓度为横坐标，定量离子（m/z）88的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，其线性相关系数应>0.99。

取“5.2”项下的待测溶液进样，测得峰面积，根据基质标准曲线，得到待测溶液中二噁烷的浓度。

按“6”计算样品中二噁烷的含量。

6分析结果的表述

6.1计算

式中：

ω（二噁烷）——化妆品中二噁烷的质量分数，μg/g；

——代入回归方程计算得到的待测样液中二噁烷的质量浓度，μg/g；

m——样品取样量，g；

D——稀释倍数（不稀释则取1）。

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

6.2回收率和精密度

多家实验室验证低浓度的平均方法回收率为91.7%~111.2%，相对标准偏差小于6.0%；中浓度的平均方法回收率为86.9%~111.2%，相对标准偏差小于7.7%；高浓度的平均方法回收率为93.3%~102.3%，相对标准偏差小于4.9%。

精密度相对标准偏差小于10.4%（n=6）。

7图谱

图1标准质谱图

图2基质空白加标GC-MS提取离子图（m/z88）

二噁烷（4.27min）

化妆品中二噁烷的检测方法起草说明

根据中国食品药品检定研究院工作要求，在我所现有仪器设备和人员技术力量的基础上，对国食药监许[2010]456号文所附方法中《化妆品中二噁烷的检测方法》进行进一步完善，现就有关情况汇报如下：

1完善原则

本检测方法兼具先进性与可行性，条理清晰，可操作性强的特点，尽量采用目前化妆品检测实验室普遍具备的先进的分析技术，选择准确、可行、便于实际操作的分析条件，保证检测方法的可操作性和重现性。

2完善过程

中国食品药品检定研究院于2014年6月10日委托我所开展化妆品中二噁烷检测方法的完善和验证工作。

通过查阅国内外相关文献资料等调研工作后，我所开始了实验研究，于2014年6月30日完成了该方法的完善工作。

7月，依据《化妆品中禁用物质和限用物质检测方法验证技术规范》（国食药监许[2010]455号）完成本方法实验室内部验证工作，同期我所开始与广东省食品药品检验所、陕西省药品检验检测院和上海市疾病预防控制中心交流和沟通实验室间方法验证的事宜，就该方法的适用范围、原理、试剂材料、仪器设备、测定步骤等内容进行了交流，并于7月10日交接了验证技术资料、验证用标准品和样品。

三家方法验证单位于8月初陆续将验证材料报送我所，我所将多家实验室方法验证材料进行总结和分析，起草了检测方法和编制说明，并报送中国食品药品检定研究院。

3重点说明的问题

3.1关于体例

本检测方法的体例主要参照国家食品药品监督管理总局已发布的化妆品中禁限用物质检测方法的体例，便于化妆品检验领域相关检验人员的阅读和实际操作。

3.2关于二噁烷

二噁烷，CAS号为123-91-1，国家食品药品监督管理总局对化妆品中二噁烷的限度规定为40mg/kg。

通常会在使用环氧乙烷制备聚乙二醇及含聚乙二醇结构的化妆品作为副产物存在于香波、浴液、洗手液、洁面乳等清洁类产品以及部分膏霜、乳液等护理类产品。

对目前国内市售香波、浴液、洗手液、洁面乳等清洁类产品以及部分膏霜、乳液等护理类产品等化妆品进行了分析检测，所检测的9种化妆品中，有三批样品检出二噁烷，其中膏霜乳液类2批，液态水基类1批，且多家实验室检测结果基本一致。

3.3两个方法检测结果的比较

产品名称

二噁烷含量（mg/kg）

RD（%）

原方法

完善后方法

山茶花精油柔顺王洗发肥料

2.8

凤仙花深层洁净洗发露

2.6

2.5

丸美巧克力丝滑洗发精华露

2.8

2.9

1.8

薄荷清控油洗发露

2.9

草本堂深层修复洗发露

4.2

4.3

1.2

藏红花养发柔顺洗发露

5.8

5.9

0.9

沙宣修护水养洗发露

7.2

乳木果系列深层洁净控油洗发露

7.1

灵芝焗油修护洗发露

9.8

10.0

1.1

b+柔顺滋养护发素

13.6

13.5

0.4

飘柔专研顺滑保湿顺发喷雾

马油急救修复霜

多芬润发精华素

草本精油还原蛋白酸护发素

绚色柔滑洗发露

本实验采用两种方法对15种发用类洗护产品对二噁烷进行检测，检测结果见下表：

3.4关于检测方法的建立和验证

我所及广东省食品药品检验所、陕西省药品检验检测院和上海市疾病预防控制中心按照《化妆品中禁用物质和限用物质检测方法验证技术规范》（国食药监许[2010]455号）的要求分别对修订后的《化妆品中二噁烷的检测方法》进行方法学验证。

结果表明，本方法在0~50μg/g浓度范围内呈线性（相关系数＞0.99），若取2.0g样品测定，本方法对二噁烷的检出浓度为1µg/g，二噁烷的最低定量浓度为2µg/g，考察的三个基质空白样品对检测结果无干扰，以修订后方法检测低浓度平均方法回收率在91.8%~94.5%，相对标准偏差小于4.0%，中浓度平均方法回收率在86.9%~91.6%，相对标准偏差小于7.7%，高浓度平均方法回收率在96.4%~112.2%，相对标准偏差小于5.5%，上述结果证实，本方法可以满足化妆品中二噁烷的检测要求，并最终确定采用基质标准曲线计算化妆品中二噁烷的含量。

多家实验室验证低浓度的平均方法回收率为91.7%~111.2%，相对标准偏差小于6.0%，中浓度的平均方法回收率为86.9%~111.2%，相对标准偏差小于7.7%，高浓度的平均方法回收率为93.3%~102.3%，相对标准偏差小于4.9%。

证实所修订方法可作为化妆品中二噁烷的检测方法。

4完善依据

[1]《化妆品卫生规范》2007年版.

[2]《化妆品中二噁烷的检测方法》（国食药监许2010[456]号文所附方法）.

[3]《化妆品中灰黄霉素等9种抗真菌类物质的检测方法》.

[4]《化妆品中氧氟沙星等10种喹诺酮类物质的检测方法》.

化妆品中二噁烷的检测方法编制说明

1基本信息

1.1检测对象的选择

二噁烷，别名二氧六环，1，4-二氧己环，1,4-二氧杂环己烷。

英文名称：

dioxane，diethylenedioxide,1,4-diethylenedioxide，diethyleneether，glycolethyleneether，dioxane-1,4，tetrahydro-p-dioxin，CAS号为123-91-1，国标编号为32098，分子式为C4H8O2；分子量为88.11，结构式如下：

二噁烷为无色液体，稍有香味，属微毒类，对皮肤、眼部和呼吸系统有刺激性，并且可能对肝、肾和神经系统造成损害，急性中毒时可能导致死亡，但微量二噁烷在化妆品中的存在，不会对消费者健康造成危害，目前的研究表明，二噁烷的经皮吸收率约为4％，也就是说，不是所有涂在皮肤上的化妆品中含有的二噁烷仅有4％可能被吸收进入人体内。

故我国国家食品药品监督管理总局对化妆品中二噁烷的限度规定为40mg/kg。

1.2样品剂型的选择

由于在使用环氧乙烷制备聚乙二醇及含聚乙二醇结构的化妆品原料时，通常会伴有副产物二噁烷的生成，而含聚乙二醇结构的原料在化妆品中使用比较广泛，如作为洗涤剂、乳化剂、保湿剂的原料用于香波、浴液、洗手液、洁面乳等清洁类产品以及部分膏霜、乳液等护理类产品，不过，由于添加量与使用原料品种上的差异，一般来说，香波、浴液、洗手液、洁面乳等清洁类产品中残留二噁烷的几率与数量，要高于其他品类，故选择膏霜乳液、液态水基类、凝胶类三种典型化妆品剂型作为研究对象。

2立项背景

根据中国食品药品检定研究院工作要求，在我所现有仪器设备和人员技术力量的基础上，对国食药监许[2010]456号文所附方法中《化妆品中二噁烷的检测方法》进行进一步完善，并将原方法与完善后方法并列收载。

3检测方法选择与优化

3.1优化计算方法

采用基质空白中分别加入系列浓度标准工作溶液的方法得到系列浓度基质标准曲线工作溶液，以二噁烷的质量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标进行线性回归，作标准曲线，用于测定样品中二噁烷的含量。

3.2简化前处理过程

按照原方法的要求，每个样品均需至少称取6份样品，修改后的方法则简化了该过程，每个样品平行称取两份即可，大大提高了工作效率。

3.3扩大适用范围

由于二噁烷可能存在于香波、浴液、洗手液、洁面乳等清洁类产品以及部分护理类产品，而这几类产品的物理形态大致可分为膏霜乳液类、液态水基类、凝胶类三种典型化妆品剂型，因此本方法使用范围为膏霜乳液类、液态水基类、凝胶类化妆品。

4方法学验证

4.1实验室内验证

本所选择液态水基类、膏霜乳液类、凝胶剂三种剂型的化妆品各一个基质空白样品，分别为液态水基类（特露白水润弹滑柔肤水）、膏霜乳液类（草本精油还原蛋白酸护发素）、凝胶类（SOOTHINGANDMOISTΜREALOEVERA92%SOOTHINGGEL）。

二噁烷对照品购买于ACROS公司（批号：

A0275785）。

4.1.1特异性

用气相色谱质谱法进行样品测定，样品空白和基质空白对被测定物质没有干扰。

色谱图见图1~图6。

图1溶剂色谱图

图2水剂基质空白和水剂加标样品TIC图

图3凝胶剂基质空白和凝胶剂加标样品TIC图

图4膏霜乳液基质空白和膏霜乳液加标样品TIC图

4.1.2线性及线性范围

按照混合标准溶液的浓度，不同化妆品基质空白中加入被测物质对照品，制备系列浓度的不同剂型加标样品溶液，按被验证方法检测，以加标样品溶液质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标建立标准曲线并进行线性相关性分析，得到线性方程和相关系数，结果见表3.1。

表3.1标准曲线的回归方程、相关系数和线性范围

物质浓度

体系

回归方程