临床医学等专业生物化学实验大纲.docx

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临床医学等专业生物化学实验大纲

新疆医科大学生物化学实验教学大纲（供临床本硕、临床医学五年制、口腔医学、法医学、麻醉医学、医学影像、基础医学、预防医学、临床药学、药学等专业本科用）基础医学院生物化学教研室2012年09月

实验目录课程名称生物化学实验课程代码1010222课程总学时114实验总学时42实验报告与实验操作等相结考核方式开设总数5合临床本硕、临床医学五年制、口腔医学、法医学、麻醉医学、适用专业医学影像、基础医学、预防医学、临床药学、药学实验报告和其他50%成绩记载50%实验操作实验成绩占总成绩的30％教学目的和要求：

生物化学是一门实验性很强的学科，通过实验培养学生掌握生物化学实验的基本操作技术；培养学生理论联系实际，独立思考、独立操作的能力，同时对课堂的理论学习内容加以巩固、提高。

通过综合性和设计性实验的开设，培养学生分析问题和解决问题的能力。

教材及参考书：

教材：

《生物化学》第7版（2009.5出版）主编査锡良人民卫生出版社参考书：

《生物化学与分子生物学》第2版（2008.5出版）主编黄诒森张光毅科学出版社《生物化学》第6版（2004.1出版）主编周爱儒人民卫生出版社《生物化学》影印版（2002.11出版）主编ReginaldHGarrettCharlesMGrisham高等教育出版社《基础医学复习纲要与强化训练·生物化学》第1版（2006.8出版）主编关亚群库热西·玉努斯科学出版社2

实验指导及讲义：

《生物化学与分子生物学实验指导》科学出版社主编库热西·玉努斯关亚群实验项目名称和学时分配表实验项目实验学时实验类型适用层次每组人数开设方式NO1基本操作及CuSO标准4验证型本科2必开4曲线的制作2血糖测定及激素对血糖4综合型本科2必开水平的影响3血清γ－球蛋白的分离纯化和鉴定

（1）盐析与分子筛层析4综合型本科6必开法分离和纯化蛋白质

（2）离子交换层析法纯4综合型本科6必开化γ－球蛋白（3）醋酸纤维薄膜电泳4综合型本科2必开鉴定蛋白质4DNA的分离、提取、扩增与鉴定

（1）基因组DNA的分4综合型本科2必开离

（2）经典酚氯仿法提取4综合型本科2必开基因组DNA（3）PCR技术扩增目的4综合型本科2必开基因及DNA纯度的鉴定（4）琼脂糖凝胶电泳鉴4综合型本科2必开定基因组DNA及PCR产物3

5脏器生化、医学酶学、蛋6设计性本科4～6必开白质生化与基因检测4

实验项目基本操作及CuSO4标准曲线的项目序号1项目名称制作实验类型验证型适用层次本科实验课时4开设类型必开目的要求：

1.掌握玻璃仪器的洗涤方法及吸量管的使用方法。

掌握分光光度计的使用方法。

2.熟悉实验室规则，熟悉比色法的基本原理。

3.了解分光光度计的基本结构，实验内容：

1.吸量管的选择和使用。

2.配制不同浓度的硫酸铜溶液。

3.制作硫酸铜标准曲线。

4.利用标准曲线测定未知硫酸铜溶液的浓度。

实验步骤：

1.练习吸量管的使用及如何准确读数。

2.利用硫酸铜标准贮备液配制应用标准液，浓度（含铜量）分别为1000μg/ml、2000μg/ml、3000μg/ml、4000μg/ml。

3.以硫酸调“0”，在690nm波长处，测定各管的吸光度值。

4.以硫酸铜浓度为横坐标，以吸光度值为纵坐标，绘制硫酸铜标准曲线。

5.测定未知硫酸铜溶液吸光度，从标准曲线上查出未知溶液的浓度。

注意事项：

1.以硫酸作空白调“0”时，注意比色杯中不应有气泡。

2.标准曲线应为过原点的一条直线，画此直线时应照顾到每一个点，即各点偏离直线都不能太大。

3.通过公式计算出未知溶液的浓度，然后与从标准曲线上查出的数值比较，进一步了解标准曲线的意义。

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主要仪器设备设备名称规格型号数量单价金额购置日期NO1分光光度计S-22PC2吸量管1、2、5ml3中试管中号4试管架5吸量管架主要实验耗材耗材名称规格型号数量单价金额备注NO1CuSO420.05mol/LHSO243蒸馏水4坐标纸6

实验项目血糖测定及激素对血糖水平的影项目序号2项目名称响实验类型综合型适用层次本科实验课时4开设类型必开目的要求：

通过本实验使学生掌握家兔耳缘静脉取血的方法及无蛋白血滤液的制备方法，掌握血糖测定的方法（Folin-吴氏法），验证肾上腺素、胰岛素对家兔血糖浓度的调节作用。

实验内容：

1.家兔称重，耳缘静脉取血。

2.家兔分组、分别注射肾上腺素、胰岛素。

3.注射后，肾上腺素15min，胰岛素30min后第二次取血。

4.制备无蛋白血滤液。

5.测定血糖。

实验步骤：

1.饥饿16h的家兔称重、记录。

2.耳缘静脉取血：

取血瓶中预先加抗凝剂，边取血边摇，防止凝血。

3.家兔分两组，分别注射肾上腺素、胰岛素（后腿腹股沟侧皮下）。

4.注射肾上腺素的家兔15min后再次取血，注射胰岛素的家兔30min后再取血。

5.制备无蛋白血滤液。

6.分别测定注射前、注射后家兔血糖浓度。

注意事项：

制备无蛋白血滤液时，先加HSO，混匀后再加NaWO，先造成酸性环境，让蛋24242-白质带正电荷，带正电荷的蛋白质颗粒和WO离子结合形成沉淀，若先加入NaWO，424再加HSO则蛋白沉淀不完全，影响血糖测定结果。

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主要仪器设备设备名称规格型号数量单价金额购置日期NO1分光光度计S-22PC2吸量管1、2、5ml3奥氏吸量管1.0ml4试管中号5试管架6漏斗7糖管主要实验耗材耗材名称规格型号数量单价金额备注NO1家兔2肾上腺素3胰岛素4草酸钾525％葡萄糖6手术刀片7注射针头8钨酸钠9硫酸10碱性铜盐11磷钼酸12标准葡萄糖溶液13滤纸8

实验项目血清γ－球蛋白的分离、纯化和鉴项目序号3项目名称定实验类型综合型适用层次本科实验课时12开设类型必开目的要求：

通过本实验使学生掌握蛋白质分离、纯化的基本过程及核酸蛋白质检测仪的使用方法。

熟悉盐析法分离蛋白质，柱层析法纯化蛋白质及蛋白质的离心、浓缩、电泳等技术。

实验内容：

1.盐析法分离蛋白质。

2.分子筛层析法纯化γ－球蛋白。

3.离子交换柱层析法纯化γ－球蛋白。

4.醋酸纤维薄膜电泳鉴定蛋白质。

实验步骤：

1.2ml血清＋2mlPBS缓冲液＋2.0ml饱和（NH）SO沉淀蛋白质。

4242.3000r/min离心，弃上清，沉淀用1mlPBS溶解＋饱和（NH4）SO0.5ml。

243.再次3000r/min离心，弃上清，沉淀用10滴PBS溶解（样品），加样于葡聚糖凝胶柱，用核酸蛋白检测仪检测收集蛋白质。

4.将收集的蛋白质溶液用葡聚糖G－25浓缩。

5.应用DEAE-52阴离子交换柱层析，纯化γ－球蛋白。

6.浓缩后醋酸纤维薄膜电泳鉴定。

注意事项：

1.装柱后要防止柱床干燥，如发生干裂需重新装柱。

2.上样时既要求柱床上面的缓冲液尽量流入柱床，又要保证柱床不干，这样才能保证上样的蛋白质浓度不被稀释。

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主要仪器设备设备名称规格型号数量单价金额购置日期NO1层析柱1×20cm2核酸蛋白检测仪HD-2000型3记录仪XWT-S4电泳仪DYY-2C型5电泳槽6载玻片、点样玻片7中试管8三角烧瓶9吸量管、滴管10剪刀、镊子、刀片11玻璃棒、玻璃板主要实验耗材耗材名称规格型号数量单价金额备注NO1血清2PBS缓冲液3（NH）SO4244葡聚糖G－255DEAE－526醋酸纤维薄膜7染色液、透明液、漂洗液10

实验项目项目序号4项目名称DNA的分离、提取、扩增与鉴定实验类型综合型适用层次本科实验课时16开设类型必开目的要求：

通过本实验使学生掌握DNA分离、纯化、PCR扩增和鉴定的基本原理及微量加样器的正确使用方法。

熟悉DNA分离、纯化、PCR扩增和鉴定的基本操作技术。

实验内容：

1.基因组DNA的分离、经典酚氯仿法提取基因组DNA。

2.测定A、A，确定DNA的浓度和纯度。

2602803.PCR技术扩增目的基因。

4.琼脂糖凝胶电泳鉴定基因组DNA及PCR产物。

实验步骤：

1.用眼科剪将组织DNA剪碎，加入细胞裂解液及RNase，保温55℃，30min。

2.加入蛋白酶K，37℃水浴过夜。

3.酚抽提取基因组DNA。

4.测定DNA溶液的A和A，计算A/A，确定DNA的浓度和纯度。

2602802602805.PCR扩增：

PCR反应混合物（包括10×Buffer、dNTP、Taq-DNA聚合酶）＋DNA模板＋上、下游引物＋ddHO，历经变性、退火、延伸30个循环。

26.琼脂糖凝胶电泳，鉴定组织中提取的基因组DNA（大片段）和PCR扩增产物（小片段）。

注意事项：

1．酚腐蚀性强，操作时要小心，一旦溅到手上立即用水冲洗。

2．DNA纯度要达标：

A/A=1.8~2.026028011

主要仪器设备设备名称规格型号数量单价金额购置日期NO1紫外分光光度计S-54型2PCR仪P.E.TC-11000μl、3微量加样器200μl、20μl4紫外检测仪5台式高速离心机16G6水浴锅7眼科剪8眼科镊9电泳槽和电泳仪主要实验耗材耗材名称规格型号数量单价金额备注NO1.5ml、0.5ml、1E.P.管0.2μl2吸头1.0ml、200μl3琼脂糖4蛋白酶K、RNA酶5饱和酚、氯仿、异戊醇6PCR扩增试剂盒7引物8一次性手套12

实验项目脏器生化、医学酶学、蛋项目序号5项目名称白质生化与基因检测实验类型设计性适用层次本硕/本科实验课时6开设类型必修目的要求：

本教研室利用开放实验室为学生创新科研，提高动手动脑能力提供实验平台。

首先由高年资教师给学生讲解有关脏器生化、医学酶学、蛋白质生化、基因检测的实验设计，让学生组织科研小组（4-6人），通过查阅文献自己设计实验。

教师从中挑选课题设计合理、技术路线清晰、方法简便易行的，经过教师认真修改后批准实验，提供实验仪器、试剂，让学生自己动手独立完成实验，从而实现理论联系实际，培养学生提出问题，解决问题的能力，加强学生的创新意识、科研意识，为将来进入临床打下良好的基础。

实验内容：

（根据不同的实验设计安排不同内容）现以其中一个设计性实验降脂食品（黑加仑）对高脂血症大鼠食疗的研究为例，说明实验内容：

1.实验动物分组：

对照组、模型组、阳性药物对照组、给药组（大、中、小剂量）2.建立高脂血症大鼠动物模型（约9天）3.灌黑加仑（大、中、小剂量）4.取血，检测各组外周血生化指标5.统计学处理主要仪器设备设备名称规格型号数量单价金额购置日期NO1分光光度计S-22PCHD－20002核酸蛋白检测仪、记录仪型，XWT-S3PCR扩增仪P.E.TC-14凝胶成像仪13

5电泳仪、电泳槽、离心机6紫外分光光度计、超纯水仪S－22PC7微量加样器、无菌超净台8-85℃冰箱