实验室常用的细菌作用及其选择.doc

实验室常用的细菌作用及其选择.doc

《实验室常用的细菌作用及其选择.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《实验室常用的细菌作用及其选择.doc（11页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

第一篇：

JM109，DH5a，BL21这些感受态有何区别

1：

DH5a菌株

DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。

E.coliDH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。

可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。

基因型：

F-，φ80dlacZΔM15，Δ（lacZYA-argF）U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17（rk-，mk+），phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1

2：

BL21（DE3）菌株

该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。

T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。

该菌适合表达非毒性蛋白。

基因型：

F-，ompT，hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3）

3：

BL21（DE3）pLysS菌株

该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。

PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。

该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。

基因型：

F-，ompThsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3，pLysS，Camr

4：

JM109菌株

该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α－互补，从而显示β－半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株

基因型：

recA1，endA1，gyrA96，thi－1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac－proAB）/F’[traD36，proAB+，lacIq，lacZΔM15]

5：

TOP10菌株

该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。

基因型：

F-，mcrAΔ（mrr-hsdRMS-mcrBC），φ80，lacZΔM15，△lacⅩ74，recA1，araΔ139Δ（ara-leu）7697，galU，galK，rps，（Strr）endA1，nupG

6：

HB101菌株

该菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验

基因型：

supE44，hsdS20（rB-mB－），recA13，ara－14，proA2，lacY1，galK2，rpsL20，xyl-5，mtl-1，leuB6，thi-1

第二篇：

JM110或SCS110

大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶，前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基，后者在CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶C-5位置上引入甲基。

常用的菌株都会产生dam,dcm，从而受到甲基化的影响.

部分限制性内切酶对甲基化的DNA不能切割，如FbaI和MboI等，一般生物公司提供的内切酶说明中均有说明。

大多数酶切位点的甲基化不影响切割，而有些会影响，如XbaI,BclI等。

而且甲基化只发生在特定序列，以XbaI为例，只有在位点序列旁出现GA或TC，该XbaI位才会被甲基化。

而要解除这种限制修饰作用通常有两种方法：

（1）选用上述酶的同功酶，如Sau3AI，DNA识别切割位点与MboI相同；但不受甲基化影响；

（2）利用甲基化酶缺失的受体细胞进行DNA的制备，如E.coliJM110和链霉菌等，前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出，而后者细胞内本就没有甲基化酶，从这些细胞中抽提的DNA就能被上述酶切割。

E.coliJM110

要排除dam,dcm甲基化的影响，需要用特定的dam-,dcm-的菌株，如JM110

如果由JM110或SCS110等甲基化缺失的菌株产生的质粒，则不会被甲基化.

第三篇：

各种感受态细胞的区别用途特征

Xl1-Blue菌株

基因型：

endA1gyrA96（nalR）thi-1recA1relA1lacglnV44F‘[Tn10proAB+lacIqΔ（lacZ）M15]hsdR17（rK-mK+）。

特点：

具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性。

用途：

分子克隆和质粒提取。

BL21（DE3）菌株

基因型：

F–ompTgaldcmlonhsdSB（rB-mB-）λ（DE3[lacIlacUV5-T7gene1ind1sam7nin5]）。

特点：

该菌株用于以T7RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。

T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3区的lacUV5启动子，该区整合于BL21的染色体上。

该菌适合于非毒性蛋白的表达。

用途：

蛋白质表达。

BL21（DE3）ply菌株

基因型：

F-ompTgaldcmlonhsdSB（rB-mB-）λ（DE3）pLysS（cmR）。

特点：

该菌株带有pLysS，具有氯霉素抗性。

此质粒还有表达T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能够降低目的基

因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达。

适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。

用途：

蛋白质表达

DH5α菌株

基因型：

F-endA1glnV44thi-1recA1relA1gyrA96deoRnupGΦ80dlacZΔM15Δ（lacZYA-argF）U169,hsdR17（rK-,λ–

特点：

一种常用于质粒克隆的菌株。

其Φ80dlacZΔM15基因的表达产物与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。

recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。

用途：

分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。

JM109菌株

基因型：

endA1glnV44thi-1relA1gyrA96recA1mcrB+Δ（lac-proAe14-[F‘traD36proAB+lacIqlacZΔM15]hsdR17（rK-mK+）。

特点：

部分抗性缺陷，适合重复基因表达,可用于M13克隆序列测定和蓝白斑筛选。

用途：

分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。

第四篇：

E.coliElectro-Cells

E.coliElectro-CellJM109

制品名TaKaRaCode包装量价格（人民币元）

E.coliElectro-CellJM109D90221Set（50μl×10支）300

■Genotype

E.coliJM109

recA1,endA1,gyrA96,thi-1,hsdR17,supE44,relA1,

Δ（lac-proA/F'[traD36,proAB+,lacIq,lacZΔM15]

■细胞浓度

1～2×1010Bacteria/ml

■保存

-80℃

■制品说明

用高电压脉冲电流瞬间击穿大肠杆菌，从而导致DNA转入大肠杆菌内的转化方法称为电穿孔法。

电穿孔法是各种转化方法中效率最佳的方法之一，比Ca2+处理的感受态细胞的转化效率高，在转化少量DNA时，特别能发挥其特有的威力。

TaKaRa使用独自开发的菌体培养法，制作出了效果极佳的E.coliElectro-CellJM109。

■细胞种类

α-互补性选择宿主E.coliJM109

E.coliJM109在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13phage载体进行转染时,由于载体DNA产生的LacZα多肽和JM109F'编码的lacZΔM15的结合，显示β-半乳糖苷酶活性（α-互补性）。

利用这一特性，可以很容易鉴别重组体菌株。

因为具有F'质粒，除可用于制作基因库、进行亚克隆等之外，也可作为M13载体DNA的宿主，调制单链DNA。

■质量标准

使用10pg的质粒DNA进行转化时：

50μlE.coliJM109Electro-Cell/10pgpUC19plasmid转化时产生的菌落数

>1×109transformants/1μgpUC19plasmid

F'质粒的稳定性检测

对E.coliJM109使用pUC19DNA进行电穿孔法转化后，在含有100μg/ml的Ampicillin、0.2mM的IPTG,40μg/ml的X-Gal的L-琼脂平板培养基上，产生的白色菌落在1%以下。

50μl的E.coliJM109Electro-Cell在含有100μg/ml的AmpicillinL-琼脂平板培养基上不产生菌落。

--------------------------------

BL21（DE3）pLysS细菌菌株

BL21（DE3）pLysS细菌菌株可以表达T7控制并核糖体结合位点的高效蛋白表达。

BL21（DE3）pLysS对λDE3

（1）是溶源性的。

λDE3含有T7噬菌体基因I，编码的T7RNA聚合酶受lacUV5启动子的控制。

BL21（DE3）pLysS含有pLysS质粒，他携带编码T7溶菌酶基因。

在T7启动子控制下，T7溶菌酶降低靶基因的背景表达但并不干扰由IPTG诱导的表达水平。

包装：

P9811500μl

第五篇：

JM109，DH5a，BL21感受态有何区别

1：

DH5a菌株

DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。

E.coliDH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。

可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。

基因型：

F-，φ80dlacZΔM15，Δ（lacZYA-argF）U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17（rk-，mk+），phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1

2：

BL21（DE3）菌株

该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。

T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。

该菌适合表达非毒性蛋白。

基因型：

F-，ompT，hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3）

3：

BL21（DE3）pLysS菌株

该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。

PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。

该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。

基因型：

F-，ompThsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3，pLysS，Camr

4：

JM109菌株

该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α－互补，从而显示β－半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株

基因型：

recA1，endA1，gyrA96，thi－1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac－proAB）/F’[traD36，proAB+，lacIq，lacZΔM15]

5：

TOP10菌株

该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。

基因型：

F-，mcrAΔ（mrr-hsdRMS-mcrBC），φ80，lacZΔM15，△lacⅩ74，recA1，araΔ139Δ（ara-leu）7697，galU，galK，rp