支气管肺泡灌洗液SHOX2、RASSF1A甲基化检测在肺癌诊断中的研究.pdf

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支气管肺泡灌洗液SHOX2、RASSFlA甲基化检测在肺癌诊断中的研究论文作者签名：

至超指导教师签名：

之刍：

兰彖论文评阅人1：

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答辩委员会主席：

谢鑫友教授浙江大学医学院附属邵逸夫医院委员1：

周永列教授浙江省人民医院委员2：

张钧主任医师浙江大学医学院附属邵逸夫医院委员3：

委员4：

委员5：

答辩日期：

2017年2月23Et万方数据川|lff川Ifff|删洲JJfIIfY3187721浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。

除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝江盘鲎或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。

与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。

学位论文作者签名：

至务签字日期：

I7年2，月五多日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解逝鎏盘堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。

本人授权逝江盘鲎可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。

（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：

多莠薅导师签名：

签字日期：

I年。

Z月弓日签字日期：

衫堋纱葶形年一哆们1，确叼万方数据浙江大学硕士学位论文致谢致谢本研究是在导师许颂霄老师的悉心指导下完成的。

衷心感谢许颂霄老师对我的指导和关怀。

在许老师的带领下，整个实验室有一种积极向上的学术氛围。

通过每周一的外文文献学习讨论，使我明白通过学习别人的研究方向和方法可以了解国内外的研究动态和拓宽自己的思路。

在这里工作和科研同时进行，下班后还有你们忙碌的身影，这些都给我留下了深刻的印象。

许老师严谨、务实的治学态度，潜移默化地感染了我，使我更加细心并也拥有了严谨的科学态度和良好的习惯。

感谢邵逸夫医院病理科金梅主任对我学习、工作和生活上的关心，您的和蔼可亲和热情关怀让我觉得这里是一个温暖的集体。

感谢病理科分子病理诊断中心的江均昌、任敏蒲和陈辉，在我对分子病理和科研还不是很熟悉的时候，是你们带着我从DNA的提取到跑PCR再到跑电泳，使我从刚开始的紧张到慢慢熟悉再到独立做实验，有了你们的帮助，整个过程就变得容易多了。

感谢小师姐余小丽同学在学习工作中给予的帮助和鼓励，同时也感谢病理科和分子病理诊断中心的其他同事的无私帮助和支持!

借此论文完成之际，特别向我的家人致以诚挚的感谢，感谢你们鼓励我读研、做课题和写论文，感谢你们分担了家务，让我有更多的时间做实验和写论文，是你们给了我前进的动力，让我没有后顾之忧。

万方数据浙江大学硕士学位论文中文摘要支气管肺泡灌洗液SHON2、RASSFlA甲基化检测在肺癌诊断中的研究浙江大学医学院临床检验诊断学硕士研究生导师王春华许颂霄中文摘要背景和目的：

肺癌是当今世界范围内最常见的恶性肿瘤，严重危害人类生命健康。

肺癌的生存率与临床分期有关，临床中很多患者确诊为肺癌时已是中晚期。

需要寻找创伤较小而有效的检查手段帮助及早发现肺癌，从而提高肺癌患者的生存率。

抑癌基因启动子区域的甲基化异常是基因失活的重要机制之一，与肿瘤的发生发展有着密切联系。

DNA基因启动子的异常甲基化在多种恶性肿瘤中可被检测到，有望成为一种早期诊断标志物。

本课题通过检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中SHOX2和RASSFlA基因启动子甲基化，分析其在肺癌组和良性疾病组中的表达情况，从而评估SHOX2和RASSFIA甲基化检测在肺癌诊断中的价值。

方法：

收集浙江大学医学院附属邵逸夫医院2014年7月至2015年lO月的BALF，通过实时荧光定量PCR法（ImPCR）和测序法检测SHOX2和RASSFlA基因启动子甲基化，并统计组织学和液基细胞学结果。

结合组织学病理诊断结果，计算II万方数据浙江大学硕士学位论文中文摘要SHOX2和RASSFlA甲基化诊断肺癌的灵敏度和特异性，并比较甲基化和液基细胞学结果对肺癌的诊断效能。

结果：

1收集2014年7月至2015年10月患者的支气管灌洗液305份，包括男性178例（584），女性127例（416），年龄范围23-85岁，主要集中在50-,69岁。

原发肺癌为123例，其他部位恶性肿瘤为18例，肺部良性病变为112例，肺部阴影或结节（不明确性质）52例。

2RT-PCR法检测支气管肺泡灌洗液SHOX2甲基化阳性为97例，阴性为208例，RASSFlA甲基化阳性为72例，阴性为233例。

SHOX2和RASSFlA甲基化在肺癌组的阳性率为642和504，在对照组的阳性率分别为77和38，两组之间有显著性差异（P001）。

SHOX2和RASSFlA基因甲基化联合检测原发肺癌的灵敏度为715，较单独检测可提高肺癌的诊断灵敏度。

3测序法检测支气管肺泡灌洗液SHOX2阳性为94例，阴性为211例，RASSFlA阳性为72例，阴性为233例。

4RT-PCR与测序法检测SHOX2和RASSFlA甲基化的一致率分别为99和100。

5在原发肺癌123例中，液基细胞学明确诊断癌有7例，诊断癌疑或异型细胞有16例。

SHOX2和RASSFlA基因甲基化检测原发肺癌的灵敏度显著高于液基细胞学的灵敏度。

结论：

1RT-PCR法检测SHOX2和RASSFlA甲基化在肺癌组的阳性率高于对照组，两者具有显著统计学差异。

IIl万方数据浙江大学硕士学位论文中文摘要2SHOX2和RASSFlA甲基化在肺鳞癌、小细胞癌中的阳性率高于肺腺癌。

3RT-PCR和测序法检测SHOX2和RASSFlA基因甲基化有较高的一致性。

4SHOX2和RASSFlA甲基化检测较细胞学检查具有更高的灵敏度。

5SHOX2和RASSFlA甲基化联合检测灵敏度较高，联合检测SHOX2和RASSFlA甲基化有望成为肺癌早期诊断的生物标记物。

关键词：

SHOX2；RASSFlA；甲基化；肺癌；支气管肺泡灌洗液IV万方数据浙江大学硕士学位论文英文摘要StudyonMethylationAnalysisofSHOX2andRASSFlAinBronchoalveolarLavageFluidforLungCancerDiagnosisMedicalschoolofZhejiangUniversityBackgroundandobjective：

ClinicallaboratorydiagnosticsPostgraduateChunhuaWangSupervisorSongxiaoXuAbstractLungcanceristhemostcommonmalignanttumorintheworldtoday,whichcausesseriousdamagetohumanlifeThesurvivalrateoflungcancerisassociatedwithclinicalstage，whilemanypatientswereinthemiddleorlatestagewhentheyhavebeendiagnosedwithlungcancerToimprovethesurvivalrateofpatientswitlllungcancer,weneedtolookforlesstraumaandeffectiveexamforearlydetectionoflungcancerAbnormalDNAmethylationoftumorsuppressorgenesinthepromoterregionisoneoftheimportantmechanismsofgeneinactivation，andcloselyrelatedtotheoccurrenceanddevelopmentoftumorTheabnormalmethylationofgenepromoterCanbedetectedinavarietyofmalignanttumors，anditisexpectedtobecomeanearlydiagnosisoflungcancerBydetectingSHOX2andRASSF1Agenepromotermethylationinthebronchoalveolarlavagefluidinourreseach，weanalyzetheirstatusinlungcancerandbenigndiseasegroup，andthenassessthevalueofSHOX2andRASSF1AmethylationdetectioninthediagnosisoflungcancerV万方数据浙江大学硕士学位论文英文摘要Methods：

BronchoalveolarlavagefluidofRunRunShawHo