课题固相肽合成中的接肽方法田少雷.docx

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课题固相肽合成中的接肽方法田少雷

固相肽合成中的接肽方法_田少雷

减肥多肽腰T的固相合成及纯化制备工艺研究摘要随着生活水平的不断提高，肥胖症已成为一种世界性的慢性疾病，并伴随多种并发症，威胁人类健康。

人们对体重调节机制认识的深入，使很多新的减肥药物不断研制出来，部分药物已在动物试验中取得较好疗效，有些己深入到分子水平，实验结果也不断地向人类展示着健康瘦身的美好前景，减肥效果明显同时副作用小的减肥药更加受到青睐．本文中的多肽JFT是用肽库技术筛选出的模拟多肽，能增加能量消耗，刺激机体产热而减轻体重，是极具医药价值的多肽，具有良好的市场前景。

本研究在于建立JFT多肽的固相合成方法并优化其工艺，降低生产成本。

Rink-Amide本研究选择以FMOC氨基酸为原料，FMOCMBHA树脂为载体，首次成功合成了多肽JFT。

实验考察了缩合试剂、脱保护试剂、切割试剂等条件对结果的影响，通过封闭残余树脂活性位点和困难氨基酸，引入临时取代基等提高了缩合率，将多肽的氨基酸进行D型取代，从而合成活性更强、稳定性更高的多肽，确定了优化的合成工艺，合成的多肽经MALDI-TOFMS鉴定与其理论分子量一致。

使用反相高效液相色谱对粗品进行分离纯化，确定了分离纯化条件，在保证纯度的前提下，提高了产品得率，降低了成本。

得到纯度为98．12％的多肽产品，最终收率达到56．4％。

此合成纯化工艺操作简单、周期短、合成效率高、成本低、适合于规模化生产。

关键词：

多肽固相合成；FMOC．氨基酸；反相高效液相色谱；分离纯化知识水坝@damdocStudiesonSolid―PhaseandSynthesis，PurificationofJFTPreparationpeptideAbstractWiththeofthehasbeenalldevelopmentstandard,obesityworldwidelivingchromclotsdiseaseofwhichwasharmfulfofhunmanfollowingcomplicationsveryandmoremedicinesforhavebeenrese黜hcdout、以thhealthy．Morereducmgweightaboutthemechanismcognitionofofthemedicinesdeeplyweight．Someregulatinghavedidanimalandhadatreatmentresult．someresearcheswe他onexperimentsgoodthemolecularlevel．Themedicinewhichahavetreatmentresultandlittlesidegoodeffectsaremoreandmoreofthearenicefuturepopular,resultsexpementsashowingontoUS．reducingweighthealthlyTheinthisJFrthesisissievedthebankwhichcallinherepeptidebyofpeptidestimulatetotoourthetheformofheat．energyconsumed,andenergybodychangeThiswithmedicalvaluehasamasket．Theaimispeptidegoodlargeofthisthesisamethodwhichcallalsofmdingoptimizedsolid-phasepeptidesynthesisreducethecost．methodisusedinthiswasSolid-phasesynthesisthesis,JFTpeptidepepfidesynthesizedatfirsttimewiththerawmaterialofFMOC―aminoacidandsueeessgullyFMOCRink-AmideMBHAresinasthevector．WediscussedtheinfluencetothefinaUresultofcombination、debloekandsynthesisbychoosingcleavagereagents．Thecombinationratewastheasincreasedtheactivethronghwaysfllows：

blcekingoftheresinafterthefirstaminoacidontheactiveregimentconnectingit,blockingoftheaminoacidwhichisdifficulttoaregimentelongate,conjuctingtemporarytotheconformationofthechainwhichcanbecleavedregimentpeptidechangeeasily．WehaveaacidwhichCanmakethemoreofD-aminoactiveandreplacementpeptidewasidentifiedMALDI--MSthatthehavethesamestablly．ItbysynthesizedpeptidemassraWwiththetheoreticalolle．Thewasmadweightpeptidesep盯atedpurifiedbyRP-HPLC．WethethethefinallwaswillIof98．12％．and56．4gotproductpurityyield知识水坝为您倾心整理小店如需格式转换服务请发豆丁站内信或联系QQ@座机电话号码23n知识水坝@damdoc％．Thismethodisandconvenientwhichhaveashortsynthesis-separationsimplecosttoandalowcycleamplify．Keysynthesis；FMOC-amino∞id：

words：

Solid-phasepepfideandRP-HPLC；sqmrationpurificaton知识水坝为您倾心整理小店如需格式转换服务请发豆丁站内信或联系QQ@座机电话号码23mAbbreviationBOC………………………………………………………………………叔丁氧羰基CHCA……………………………………………………………．．氰基4羟基肉桂酸DCC………………………………………………………………二环己基碳二亚胺DCM…………………………………………………………………………．二氯甲烷D也A……………………………………………………………………二异丙基乙胺DMF……………………………………………………………．N'N一二甲基甲酰胺DVB………………………………………………………………………．．交联度EDT…………………………………………………………………………。

乙二硫醇ESI-MS……………………………………………………………………．电喷雾质谱FMOC…………………………………………………………………。

9-芴甲氧羰基GFC……………………………………………………………………凝胶过滤层析HOBt……………………………………………………………．1．羟基．苯并．三氮唑Hmb………………………………………………………………～2．羟基．4甲氧基苄IEC……………………………………………………………………离子交换色谱MALDIMS……………………………………………．基质辅助的激光解吸附质谱MeOH……………………………………………………………………………．甲醇SPPS……………………………………………………………………．固相多肽合成TBTU………………………………1．氧．3．双二甲胺羰基苯骈三氮唑四氟化硼盐TFA…………………………………………………………………………．．三氟乙酸Thioanisole…………………………………………………………………苯甲硫醚TIS…………………………………………………………………………三异丙基硅TOF―SⅡ垤S…………………………………………………．时间飞跃二级离子质谱RP-HPLC…………………………………………………………反相高效液相色谱西北大学学位论文知识产权声明书本人完全了解学校有关保护知识产权的规定，即：

研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属于西北大学。

学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版。

本人允许论文被查阅和借阅。

学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。

同时，本人保证，毕业后结合学位论文研究课题再撰写的文章一律注明作者单位为西北大学。

保密论文待解密后适用本声明。

学位论文作者签名：

：

建趔指导教师签名：

沙，7年‖月，『日年jj葫§日西北大学学位论文独创性声明本人声明：

所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。

据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，本论文不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得西北大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。

与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。

学位论文作者签名：

能掘J‘沙司年6窍|B第一章文献综述1．1生物活性肽概述人类很早以前就发现人体内能够产生具有对各种疾病防治的一类物质。

随着近年来分子生物学的发展，人类遗传基因组的解码，基因工程技术，多肽合成技术的兴起，人们寻求分离、合成、生产这类生物活性物质作为新药是药物研究中最活跃的一个领域，多肽类药物就是生物活性物质领域中最重要的一类。

多肽是涉及生物体内各种细胞功能的生物活性物质，它是分子结构介于氨基酸和蛋白质之间的一类小分子化合物，由构成生物体内各种蛋白质的20种氨基酸按一定的顺序排列通过肽键结合而成的。

现代科技表明人类许多抗病作用都是由各类多肽来完成的葛文光，1996。

由于多肽药物在研究、生产、治疗功效、产品利润、技术壁垒保护、对人体的毒副作用及生产无环境污染等方面，都具有化学合成药物、生物提取药物和其它类药物所不能比拟的优越性。

因此，从上世纪末，多肽药物的研制开发在全世界都受到广泛的重视，成为生物制药领域的一大亮点黄自然等，2001。

Active生物活性肽Biological活动或具有某些生理活性作用的一类肽的总称。

无论是从结构还是功能来说，生物活性肽都是较复杂和多变的化合物，是涉及生物体内各种细胞功能的生物活性物质。

自从生物化学家用人工方法合成多肽40多年以来，伴随着分子生物学、生物化学技术的飞速发展，多肽的研究取得了惊人的进展李虹奇，1993；徐小飞等，2003。

人们发现存在于生物体的多肽已有数万种，并且发现所有的细胞都能合成多肽。

同时，几乎所有细胞也都受多肽调节，它涉及激素、神经、细胞生长和生殖等各个领域。

它们是沟通细胞间与器官间信息的重要化学信使，通过内分泌、神经内分泌乃至神经分泌等作用方式行使其微妙的信息传递功能，从而使有机体组合成一系列高度严密的控制系统，调节生长、发育、繁殖、代谢和行为等生命过程，对于发育和新陈代谢的过程有着包括复杂调节和直接作用的多重生物功能刘自元等，1998。

1．1．1多肽药物的特点1多肽化学组成清楚，结构简单，产品易于纯化药品的审批对产品的要求首先是对其化学组成、结构及功能清楚，产品必须纯一，无不良杂质。

而生物制品往往由细胞中分泌释放出来，或从细胞中提取．难以将微量的有效成份与其它不明组分分开，这也是我国目前有自主产权的生物药物难以上市的重要原因之一。

而多肽由于研发时其组成和结构已十分清楚，由小分子氨基酸合成为大分子的生物多肽，其过程是一个化学反应过程，因而结构过程中主要的难题，和花费最大的过程，需要用较长的时间和巨大的费用，而多肽生产则要简单容