PPARγ2基因Pro12Ala多态性与肥胖的相关性.docx

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PPARγ2基因Pro12Ala多态性与肥胖的相关性

PPARγ2基因Pro12Ala多态性与肥胖的相关性

【摘要】目的探讨PPARγ2基因Pro12ALa多态性与肥胖相关性。

方法将研究对象按体质量指数（BMI）分为肥胖组（n=62）和非肥胖组（n=121）。

再将所有对象分为糖尿病组（DM组,n=79）、对照组（NC组,n=104）；DM组和NC组再分别根据BMI分为肥胖组与非肥胖组。

应用聚合酶链反应限制性内切酶片段长度多态性方法检测PPARγ2基因Pro12Ala多态性。

比较肥胖与非肥胖组、DM组中的肥胖与非肥胖人群、NC组中的肥胖与非肥胖人群基因型频率及等位基因频率。

结果肥胖组和非肥胖组基因型频率和等位基因频率无显著性差异（P>0.05）。

进一步分组，DM组中肥胖组和非肥胖组基因型频率、等位基因频率之间无显著性差异（P>0.05），NC组中肥胖组和非肥胖组基因型频率无显著性差异（P>0.05），而等位基因频率有显著性差异（P<0.05）。

结论PPARγ2基因Pro12Ala多态性与无T2DM家族史的正常人群肥胖有关，与糖尿病组中肥胖人群无关。

【关键词】过氧化物酶体增殖物激活受糖尿病型肥胖症多态性限制性片断长度聚合酶链反应

肥胖和糖尿病有密切关系。

调查发现，70%～80%的2型糖尿病（T2DM）患者同时是肥胖者，它们可能有共同的遗传因素。

过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisomeproliferatoractivatedreceptor,PPAR）γ是由配体激活的核转录因子，属Ⅱ型核受体超家族成员，PPARγ2与脂肪细胞分化、肥胖、胰岛素抵抗关系密切而成为近年来研究的热点。

PPARγ2基因外显子B的第12密码子的脯氨酸替换为丙氨酸，即Pro12Ala是PPARγ2最常见的多态位点。

目前有关PPARγ2基因Pro12Ala多态性肥胖相关性国内外研究不一致[13]。

笔者应用聚合酶链反应限制性内切酶片段长度多态性（PCRRFLP）方法，对西安地区肥胖与非肥胖组、糖尿病组中的肥胖与非肥胖人群、对照组中的肥胖与非肥胖人群PPARγ2基因Pro12Ala多态性研究，探讨PPARγ2基因Pro12Ala多态性与肥胖的相关性。

1对象与方法

1.1对象来源于2001年我院门诊、住院病人及健康查体者。

首先将研究对象按体质量指数（BMI）分2组：

（1）肥胖组（BMI≥25kg/m2，n=62）。

男性41例，女性21例，年龄（52.84±8.23）岁（43～74岁）。

（2）非肥胖组（BMI<25kg/m2，n=121）。

男性70例，女性51例，年龄（53.47±7.54）岁（45～73岁）。

再将研究对象按文献[4]标准分为2组：

（1）糖尿病组（DM组，n=79），均为T2DM患者，且其家族中有血缘关系的T2DM患者≥2人，男性44例，女性3例，年龄（54.41±7.30）岁（46～74岁）；

（2）对照组（NC组，n=104），均与T2DM无血缘关系，经口服糖耐量（OGTT）试验排除T2DM且符合糖耐量正常的诊断标准，男性67例，女性37例，年龄（53.90±8.41）岁（43～72岁）。

然后再按BMI将DM组分为肥胖组（n=29）与非肥胖组（n=50）；将NC组分为肥胖组（n=33）与非肥胖组（n=71）。

研究对象由医护人员在标准条件下按统一规范测量身高、体质量，并计算BMI。

1.2方法

1.2.1主要试剂全基因组DNA小量制备试剂盒（天为时代有限公司）；PCR引物和内切酶HpaⅡ（北京赛百盛基因技术有限公司）。

1.2.2基因组DNA的提取每位对象空腹12～14h后抽取静脉血1mL，EDTA抗凝，按全基因组DNA小量制备试剂盒提取DNA，-20℃保存。

1.2.3PPAR基因PCR扩增

引物序列[5]：

上游：

5′GCCAATTCAAGCCCAGTC3′

下游：

5′GATATGTTTGCAGACAGTGTATCAGTGAAGGAATCGCTTTCCG3′

PCR反应体系总体积13μL。

包括Mix6μL，上游引物2μL，下游引物2μL，蒸馏水2μL，模板DNA1μL。

反应条件：

94℃5min→94℃45s→56℃45s→72℃30s，共30个循环，最后72℃延伸7min。

1.2.4PPARγ2Pro/Ala基因型鉴定PCR产物用

HpaⅡ酶切。

酶切体系为：

总体积20μL，包括10μLPCR产物、0.5μLHpaⅡ（5单位内切酶）、7.5μLDDW、2μl10×缓冲液，37℃水浴箱中，消化约4h；酶切产物用30mg/L琼脂糖凝胶电泳（80V，1h）、265nm的紫外灯下观察结果。

Pro12纯合子（PP）电泳带型为224bp、43bp，Ala12纯合子（AA）电泳带型267bp，Pro/Ala杂合子（PA）电泳带型267bp、224bp、43bp,以此计算基因型频率及等位基因频率。

比较各组基因型频率及等位基因频率。

1.3统计学处理使用SPSS10.0统计软件包。

基因型频率及等位基因频率分布比较使用χ2检验，以P＜0.05为差异显著性阈值。

2结果

2.1肥胖与非肥胖组基因型频率、等位基因频率比较无统计学意义（P>0.05，表1）。

2.2DM组中肥胖组和非肥胖组基因型频率、等位基因频率比较无统计学意义（P>0.05）。

NC组中肥胖组和非肥胖组基因型频率比较无统计学意义（P>0.05），但等位基因频率比较有统计学意义（P<0.05，见表2）。

表1肥胖组与非肥胖组PPARγ2基因Pro12Ala多态性比较表2对照组及糖尿病组PPARγ2基因Pro12Ala多态性比较表中数据为例数（%）.PP:

Pro12纯合子;PA:

Pro12/Ala12杂合子;AA:

Ala12纯合子.

3讨论

肥胖是糖尿病、高血压及冠心病等常见代谢病的主要因素，对肥胖发病的遗传及环境因素的研究日益受到重视。

PPARγ2的基因存在多态性表现，其氨基酸端含有一个不依赖于配体而依赖于胰岛素的活化区域，脯氨酸转变为丙氨酸即Pro12Ala位于该区域内，脯氨酸有防止α螺旋形成的作用，而丙氨酸有促进α螺旋形成的作用，该氨基酸的改变将造成PPARγ2结构的改变，从而影响其活性[6]。

本研究结果，肥胖组中基因型频率、等位基因频率较非肥胖组高，但两者统计学分析无显著性差异。

说明Pro12Ala基因的多态性与西安地区肥胖无关。

进一步分组分析，在DM组中PA基因型频率、A等位基因频率在肥胖组中高于非肥胖组者，但无统计学意义；在NC组中PA基因型频率在肥胖组中高于非肥胖组，亦无统计学意义，而A等位基因频率在肥胖组中显著高于非肥胖组，说明Pro12Ala变异可能与NC组人群肥胖有关，而与T2DM患者的肥胖无相关性，这与一些国内外研究一致[711]。

目前，Pro12Ala基因的多态性的A等位基因增加肥胖易感性的确切机理尚未清楚，携带A基因的人群由于PPARγ2转录活性下降，解偶联蛋白2（UCP2）表达不足，机体能量消耗减少，导致PPARγ2主要表达部位，即腹部皮下脂肪组织蓄积引起肥胖。

Pro12Ala基因的多态性与正常对照人群的肥胖有关，而与糖尿病组的肥胖人群无关可能还有其他机制。

研究显示，A等位基因具有一定的改善胰岛素抵抗的功能，可增加胰岛素的敏感性[12]。

体质量增加可能与胰岛素敏感性增加，特别是脂质降解减少有关，后者引起生理胰岛素分泌（如餐后）过程中储存于甘油三酯内的游离脂肪酸水平的过度增加[13]。

在这种假设下，肥胖可能是由于胰岛素敏感性增加而不是A等位基因直接作用的结果。

在对照组中没有多种T2DM易感基因作用引起的胰岛素抵抗和胰岛素分泌的轻度减退，Pro12Ala多态性可以增加胰岛素的敏感性和减少T2DM的发生，但较T2DM组易于发生肥胖。

而糖尿病组中A等位基因具有的改善胰岛素抵抗的功能可能被抵消，因而与肥胖无关。

由此可以推出在携带A基因的糖尿病人群由于PPARγ2转录活性下降，使用噻唑烷二酮类增敏剂可能会更加有效,且不必担心胰岛素增敏剂所引起的肥胖。

当然肥胖也是一种发生于多基因、多因素基础上的常见代谢失调症，今后在此方面还需扩大样本量进一步分析研究。

笔者认为，PPARγ2基因Pro12Ala多态性与西安地区汉族无T2DM家族史的正常人群肥胖有关，而与T2DM肥胖人群不相关。

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