生物技术总结样本.docx

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生物技术总结样本

生物技术总结

第一部分

一、外殖体消毒

（1）将需要的材料用水洗干净

（2）表面灭菌用70%酒精浸30-60s左右

（3）灭菌剂处理0.1%升汞10分钟、或在10%漂白粉上清液中浸泡10-15分钟

（4）用无菌水冲洗3-5次左右

二、论述植物生长调节物质在组织培养中的作用?

并列举常见的种类。

（1）生长素类:

主要被用于诱导愈伤组织形成,促进细胞脱分化;促进细胞伸长;诱导根的分化,促进生根。

（2）IAA（吲哚乙酸）;NAA（萘乙酸）;IBA（吲哚丁酸）;2,4—D（2,4—二氯苯氧乙酸）。

（3）细胞分裂素类:

①诱导芽的分化促进侧芽萌发生长。

②促进细胞分裂与扩大。

③抑制根的分化。

抑制衰老,减少叶绿素分解,有保鲜效果。

包括6—BA（6—苄基腺嘌呤）、Kt（激动素）、Zt（玉米素）等。

3、脱毒苗怎么鉴别:

提取脱毒苗的组织液进行病毒检测,没有检测到带毒的植株

可判定为脱毒苗。

四、原生质体融合的方法

（1）自发融合

（2）化学融合a.NaNO

法b.高pH-高钙法c.聚乙二醇诱导法d.多聚化合物法

（3）电场诱导法（细胞电融合）

（4）激光诱导法

（5）基于微流控芯片的细胞融合技术

（6）高通量细胞融合芯片

（7）其它细胞融合技术方法

五、脱分化:

已经分化的植物器官、组织或细胞,当受到创伤或进行离体（也受到创伤）培养时,已停止分裂的细胞,又重新恢复分裂,细胞改变原有的分化状态,失去原有结构和功能,成为具有未分化特性的细胞。

六、再分化:

已经脱分化的细胞在一定条件下,又可经过愈伤组织或胚状体,再分化出根和芽,形成完整植株,这一过程叫作再分化。

七、继代培养:

愈伤组织培养一段时间后必须转移到新鲜培养基上以保持培养物的正长生长,更换一次培养基称为一次继代培养。

八、细胞全能性:

指细胞经分裂和分化后仍具有形成完整有机体的潜能或特性。

九、热处理脱毒:

主要是利用病毒受热的不稳定性而失去其活性达到脱病毒目的。

十、MS培养基组成和配制的注意事项

{组成}大量元素:

NH4NO3、KNO3、CaCl2•2H2O、MgSO4•7H2O、KH2PO4、

微量元素:

KI、H3BO3、MnSO4•4H2O、ZnSO4•7H2O、　Na2MoO4•2H2O、

CuSO4•5H2O、CoCl2•6H2O铁盐:

FeSO4•7H2O、Na2-EDTA•2H2O有机成分:

ⅣA（肌醇）、ⅣB（烟酸）、盐酸吡哆醇（维生素B6）、

盐酸硫胺素（维生素B1）、甘氨酸、水、琼脂。

{注意事项}:

1配制大量元素母液时,要按照使用时高10倍的数值称取,CaCl2•2H2O要单独配制

2微量元素母液按浓缩100倍的数值称取,铁盐作为一组要单独配制

3铁盐配制时要将FeSO4•7H2O和Na2-EDTA•2H2O分别溶解,溶解时一定要加热,配置完后要调pH至5.5。

4有机物母液要求浓缩50倍,除蔗糖按3%单独临时称量

5母液最好在2~4℃保存,不宜保存时间过长,特别是有积类

6配制母液和营养培养基时,所用蒸馏水或离子水必须符合标准要求,化学药品必须是高纯度的（分析纯）

7称量药物采用高灵敏度的天平,每种药品专用一药匙

8加热琼脂时,制备培养基的过程中,不能离开。

十一、原生质体怎么获取:

采用机械法或酶解法去掉细胞壁的裸露细胞

十二、常见的培养基:

MS培养基、White培养基、B5培养基、N6培养基

十三、物理灭菌方法:

干热灭菌法（火焰灼烧、烘箱热空气灭菌）、

湿热灭菌法（巴氏消毒法、煮沸消毒法、间歇灭菌法）

加压灭菌法（高压蒸汽灭菌法）低温抑菌法（冷冻法）

十四、单倍体（花粉或花药）培养在育种学方面的作用

①缩短育种周期②提高目标基因型的选择效率③排除杂种优势对后代选择的干扰

④遗传研究的良好的实验材料体系⑤突变体的筛选⑥消除致死基因选育新型

⑦选育新型自交系⑧遗传转化的受体材料⑨克服远缘杂交后代不育

第二部分

一、限制性内切酶:

在生物体内有一类酶,它们能将外来的DNA切断,即能够限制异源DNA的侵入并使之失去活力,但对自己的DNA却无损害作用,这样能够保护细胞原有的遗传信息。

由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的,故名限制性内切酶（简称限制酶）。

二、基因工程载体结构特征

①具有外源基因重组插入的多克隆位点

②具有能够在宿主细胞中进行复制的有关元件

③载体一般具有可用于阳性克隆鉴定或者重组子筛选所需要的选择标记

④载体一般对受体细胞不具有毒性,同时对坏境不存在显著的影响

三、质粒:

存在于宿主细胞染色体之外的一种裸露的双链DNA分子或者RNA分子。

四、质粒的DNA不亲和性:

书151-152页（考选择填空或判断）

五、质粒载体构建的基本原则:

1.质粒载体具有能够自我复制的元件

2.质粒载体上具有允许外源基因插入的多克隆位点

3.质粒载体上具有可供筛选的抗生素标记

4.构建的质粒载体应该足够小

六、cos位点:

野生型入噬菌体DNA的两侧具有2个黏性末端（由12个核苷酸组成）。

七、Cosmid载体与入噬菌体载体和质粒载体相比具有哪些特点?

1.Cosmid载体具有入噬菌体的cos位点,cos位点进行相互连接一会能够像入噬菌体一样,高效转导大肠杆菌。

Cosmid载体进入大肠杆菌细胞以后,由于其装载有外源片段的载体上具有两个cos位点,因此能够实现自身的环化过程。

2.Cosmid载体上没有入噬菌体生长的全部必要基因,不能够产生溶菌和溶源周期,因此Cosmid载体不能够产生子代噬菌体颗粒。

可是,Cosmid载体能够经过添加头尾蛋白完成包装过程。

3.Cosmid载体具有质粒载体的自我复制起点ori以及抗生素的标记基因,因此Cosmid载体转化大肠杆菌以后,完全能够像质粒一样在大肠杆菌中进行繁殖。

4.Cosmid载体往往比较小,能够插入较大的外源基因片段。

大多数Cosmid载体的长度小于10kb,按照入噬菌体的包装能力,入噬菌体的最大承载外源片段能力为（105%*48kb）--Cosmid载体的长度。

由此能够计算出Cosmid载体能够克隆外源片段长度为15-45kb。

由于Cosmid载体具有大片段克隆能力,因此Cosmid载体往往用于基因组文库的构建,而入噬菌体载体往往用于cDNA文库的构建。

6、利用Cosmid载体构建基因组文库的基本过程

1.载体的制备2.基因组片段的酶切消化3.片段的分级

4.基因组片段与载体的连接5.遗传转化

九、基因克隆:

在已经知道待克隆基因的氨基酸或者核苷酸序列的基础上分离基因全长

7、克隆基因的步骤的基本过程:

基因组文库的构建、阳性克隆的筛选、阳性克隆的插入片段测序和功能基因的鉴定

8、酵母双杂交的基本原理:

真核细胞的转录激活作用是由功能相对独立的DNA结合结构域和转录活化结构域共同完成。

9、植物遗传转化分类:

1.按照遗传特性分类:

瞬时表示转化和稳定遗传转化

2.按照载体特性分类:

①生物载体介导的遗传转化:

a.病毒载体介导的遗传转化

b.农杆菌质粒载体介导的遗传转化

②非生物载体介导的遗传转化:

a.化学方法:

聚乙二醇介导

脂质体法

b.物理方法:

电穿孔法、显微注射法

基因枪法\超声波法等

10、植物转化载体必须具备的条件

1.能够将目的基因成功导入受体植物细胞中;

2.具有能够被受体植物细胞的复制和转录系统所识别的有效DNA序列,

以保证导入的外源基因能在手提植物细胞中正常复制和表示。

十一、Ti质粒:

为植物根癌土壤杆菌菌株中存在的质粒,其特定部位与

植物核内DNA组合来表示信息,使植物细胞肿瘤化。

十二、Ti质粒机构示意图包括:

T-DNA区、毒性区（Vir区）、复制区和质粒接合转移位点。

十三、中间载体:

将去除了onc基因的T-DNA片段克隆到多拷贝的大肠杆菌的质粒中

构建成卸甲载体。

14、中间载体需要具有的特征

1.具有一个或几个细菌选择标记2.含有植物选择标记

3.含有多克隆位点4.具有bom位点

15、常见的抗生素

卡那霉素链霉素氯霉素潮霉素壮观霉素等

十六、植物遗传转化:

其由成为植物转基因或植物基因工程,七研究的关键是利用充

足DNA、细胞组织培养或种质系统,转化等技术,将外源基因导

入植物细胞或组织,使之定向重组遗传物质,改良植物性状,培

育优质高产作物新品种。

十七、植物基因工程的过程:

农杆菌是从土壤中分离出来的革兰氏阴性细菌,其根癌农杆菌能将自身Tumor-inducing（Ti）质粒的一段DNA（T-DNA）转移到植物细胞中,从而使植物损伤部位形成冠瘿瘤。

T-DNA的转化是在Ti质粒上Vir区一系列Vir基因的作用下产生的。

T-DNA是质粒上一段10-30kb的序列,编码5个与致瘤有关的生长素和细胞分裂素合成酶基因。

其左右边界各有一段高度保守的25bp的同向重叠序列与T-DNA的转化有关。

其中右边界是VirD2的共价结合序列及VirD1/VirD2内切的靶序列,VirD2与右边界的共价结合及邻近右边界的过度驱动序列导致了单链T-DNA由右边界剪切并转移的极性,而VirD2与左边界的结合可能导致了载体骨架序列的转移。

农杆菌侵染时, 在单糖转运蛋白ChvE的配合下, 双元组分系统的VirA作为感受信号的天线分子受到植物伤口产生的酚类物质和糖类的诱导而自动磷酸化, 而且随后使双元组分系统的另一组分VirG磷酸化为活性状态, 进而经过vir-box激活其它Vir基因的表示, 最后由VirD1/VirD2剪切的单链VirD2-T-DNA复合体由VirB和 VirD4蛋白组装成的Type IV Secretion System（T4SS）运送到宿主细胞, 另外的几个Vir蛋白VirE2、VirE3、VirF、VirD5也同时经过这个通道运送到宿主细胞质中。

VirD2-T-DNA复合体在进入宿主细胞质中不久, VirE2就结合上去, 经过VirD2核定位信号的引导并在几个宿主蛋白和农杆菌因子的协助下向细胞核转运, 最后结合在T-DNA上的蛋白被降解, 而T-DNA经过一种尚不清楚的机制整合到宿主基因组中。

由于T-DNA转化不具有序列特异性,因此可用任何感兴趣的基因能代替内源的T-DNA基因进行转化。

十八、基因枪:

又称为生物弹法、微粒枪法或微粒轰击法,是依赖高速的金属微

粒将外源基因导入活细胞的一种转化技术。

十九、电激法:

利用高压电脉冲作用,在原生质体膜上”电激穿孔”,细胞膜上会

出现短暂可逆性开放小孔,为外源物质提供了通,借此能够导入

外援DNA、RNA、蛋白质、病毒颗粒等多种生物大分子以及核苷

酸和染料等多种小分子。

19、显微注射法:

一般需要先把原生质体或培养的细胞固定在琼脂或低熔点的琼

脂糖上,或用聚赖氨酸处理使原生质体附着在玻璃平板上,也

能够经过一固着的毛细管将原生质体吸着在管口再进行操作。

二十、PCR:

是聚合酶链式反应,它是模拟DNA聚合酶在生物体内的催化作用,在体外

进行的特异DNA序列扩增。

二十一、Southern杂交原理:

利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片

段,将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA