4.比较灭菌、消毒、防腐的异同，并各举若干实例。
比较工程
灭菌
消毒
防腐
化疗
处理因素
强理化因素
较温和的理化因素
理化因素
利用化学物质
处理对象
任何物体内外
物体表面
有机质物体内外
宿主体内
微生物类型
一切微生物
有害的病原菌
霉腐微生物
有关病原微生物
对微生物作用
彻底杀灭
杀死或抑制
杀死或抑制
杀死或抑制
实例
加压蒸汽灭菌
70%酒精消毒，巴氏消毒法
冷藏，干燥，盐腌，缺氧，化学防腐
抗生素，磺胺药，生物药物素
5.什么叫典型生长曲线？
它可分为几期？
划分的依据是什么？
典型生长曲线：
将少量纯种单细胞微生物接种到恒容积的液体培养基中培养。
在适宜条件下，其群体就会有规律地生长，定时取样测定细胞含量，以细胞数目的对数值作纵坐标，以培养时间作横坐标，就可以画出一条有规律的曲线，这就是微生物的典型生长曲线。
划分的依据：
单细胞微生物。
（1>延滞期（停滞期、调整期>
（2>对数期
⑶稳定期
⑷衰亡期
6.延滞期有何特点？
如何缩短延滞期？
特点：
a.生长速率常数为零；b.细胞形态变大或增大；c.细胞内RNA尤其是rRNA含量增高，原生质呈嗜碱性。
d.合成代谢活跃；e.对外界不良条件的反应敏感。
消除：
a.以对数期的菌体作种子菌；b.适当增大接种量：
一般采用3%~8%的接种量，根据生产上的具体情况而定，最高不超过1/10。
c.培养基的成分：
种子培养基尽量接近发酵培养基。
7、指数期有何特点？
处于该期的微生物有何应用？
特点：
此时菌体细胞生长的速率常数R最大，分裂快，代时短，细胞进行平衡生长，菌体内酶系活跃，代谢旺盛，菌体数目以几何级数增加，群体的形态与生理特征最一致，抗不良环境的能力强。
应用：
指数期的微生物是研究生理、代谢等的良好材料；是增殖噬菌体的最适菌龄；是发酵生产中用做种子的最佳种龄，通过补加营养物质延长指数期。
8、稳定期为何会到来？
有何特点？
形成原因:
a.营养物尤其是生长限制因子的耗尽；b.营养物的比例失调；c.有害代谢产物的积累；d.物化条件的变化。
特点:
a.生长速率常数为零；b.菌体产量达到最高；c.活菌数相对稳定；d.细胞开始贮存贮藏物；e.芽孢在这个时期形成；f.有些微生物在此时形成次生代谢产物。
9、利用微生物的生长的4个时期对生产有何指导意义？
①延滞期：
接种对数生长期的菌种，采用最适菌龄；加大接种量；用营养丰富的天然培养基
②对数期：
因微生物整个群体的生理特性一致、细胞各成分平衡增长和生长速率恒定等优点，故用作代谢、生理等研究的良好材料，是增殖噬菌体的最适宿主，也是发酵工业中用做种子的最好材料
③稳定期：
对以生长菌体或以菌体生长相平行的代谢产物为目的的某些发酵生产来说，该期是产物的最佳收获期，对维生素、碱基、氨基酸等物质进行生物测定来说，该期是最佳测定时期；通过对该期到来原因的研究，促进了连续培养基的提出和工艺、技术的创建
④衰亡期：
有的微生物在该期会进一步合成对人类有益的抗生素
10.什么叫生长速率常数R？
什么叫代时G？
它们如何计算？
R：
每繁殖一代所需的时间
G：
生长速率常数的倒数
计算式的推导：
x2=x1·2n→lgx2=lgx1+nlg2
∴n=（lgx2-lgx1>/lg2=3.322（lgx2-lgx1>
R=n/（t2-t1>=3.322（lgx2-lgx1>/（t2-t1>
G=1/R=（t2-t1>/[3.322（lgx2-lgx1>]
11.什么叫连续培养？
有何优点？
为何连续培养的时间是有限的？
连续培养：
指微生物接种到培养基里以后的整个生长期间，微生物能持续地以比较恒定的生长速率常数进行生长，从而导致微生物的生长过程能“不断”地进行下去的一种培养方法。
优点：
高效、低耗、利于自控、产品质量稳定。
①菌种易于退化；②容易污染；③营养物的利用率低于分批培养。
因此连续时间是有限的。
12、试比较恒浊器和恒化器。
装置
控制对象
培养基
培养基流速
生长速率
产物
应用范围
恒浊器
菌体密度<内控制）
无限制生长因子
不恒定
最高
大量菌体及与菌体相平行的代谢产物
生产为主
恒化器
培养基流速<外控制）
有限制生长因子
恒定
低于最高
不同生长速率的菌体
实验室为主
13.按照微生物生长、发酵与氧气的关系，可分成哪几类？
为何氧对厌氧菌有毒害作用？
根据氧与微生物生长的关系可将微生物分为好氧、微好氧、耐氧型、兼性厌氧和专性厌氧五种类型。
因为厌氧生物细胞内缺少或没有可以消除氧在生化反应中的副作用，因而生长会受抑制甚至死亡。
14.影响湿热灭菌效果的主要因素有哪些？
在实践中应如何正确对待？
①灭菌物体含菌量：
含菌量越高需，要灭菌的时间越长
②灭菌锅内空气排出程度：
锅内空气要全部排尽
③灭菌对象pH：
pH<6.0易死亡；pH在6.0-8.0之间不易死亡
④灭菌对象的体积：
大容积培养基灭菌时必须延长灭菌时间
⑤加热与散热速度：
会影响培养基成分的破坏程度，应适当控制。
15.描述某一单细胞微生物在液体培养基中的生长行为。
在发酵过程中怎样根据生长曲线缩短发酵周期、增加产量？
<要点：
注意，这种题目最好将生长曲线画出，然后简单描述。
）
第二问就相当于如何缩短延滞期。
16.常用的灭菌、消毒方法有哪些?
各种方法的原理、适用范围、注意问题是什么?
一、灭菌方法
1）、高温灭菌法：
干热灭菌
原理：
干热可使破坏细胞膜破坏、蛋白质变性和原生质干燥，并可使各种细胞成分发生氧化变质。
应用范围：
1）烘箱内热空气灭菌法<150~170℃，1~2hr）：
金属器械、洗净的玻璃器皿。
2）火焰灼烧法：
接种环、接种针等。
湿热灭菌
原理：
干热可使破坏细胞膜破坏、蛋白质变性和原生质干燥，并可使各种细胞成分发生氧化变质。
应用范围：
1）烘箱内热空气灭菌法<150~170℃，1~2hr）：
金属器械、洗净的玻璃器皿。
2）火焰灼烧法：
接种环、接种针等。
二、消毒方法
物理消毒法：
机械消毒；热力消毒；辐射消毒
化学消毒法
17、微生物培养过程中pH变化的规律如何？
如何调整？
即使同一微生物在其生长不同阶段和不同的生理、生化过程，也有不同的最适，所以在培养时pH升高或降低。
治标：
①过酸时，加NaOH、NaCO3等碱中和
②过碱时，加H2SO4、HCl等酸液中和
治本：
①过酸时
A.加适当的氮源：
加尿素、NaNO3、NH4OH、蛋白质
B.提高通气量
②过碱时
A.加适当的碳源：
加糖、乳酸、醋酸、柠檬酸
B.降低通气量
18.归纳本章名词解释。
CFU，分批培养，代时，连续培养，灭菌，生长产量常数19、根据生长温度以及根据最适生长温度进行的微生物类群划分？
温度如何影响微生物的生长？
微生物类型 生长温度范围<℃） 分布的主要处所
最低 最适 最高
低温型 专性嗜冷 –12 5—15 15—20 两极地区
兼性嗜冷 –5—0 10—20 25—30 海水及冷藏食品上
中温型 室温 10—20 20—3535—40 腐生菌
体温 40—45 寄生菌
高温型 25—45 50—60 70—95 温泉、堆肥、土壤表层等
温度是影响微生物生长繁殖最重要的因素之一。
在一定温度范围内，机体的代谢活动与生长繁殖随着温度的上升而增加，当温度上升到一定程度，开始对机体产生不利的影响，如再继续升高，则细胞功能急剧下降以至死亡。
微生物的生长温度尽管有高有低，但总有最低生长温度、最适生长温度和最高生长温度这三个重要指标，这就是生长温度的三个基本点。
最低生长温度 是指微生物能进行繁殖的最低温度界限。
处于这种温度条件下的微生物生长速率很低，如果低于此温度则生长完全停止。
不同微生物的最低生长温度不一样，这与它们的原生质物理状态和化学组成有关系，也可随环境条件而变化。
最适生长温度 是指某菌分裂代时最短或生长速率最高时的培养温度。
但是，同一微生物，不同的生理生化过程有着不同的最适温度，也就是说，最适生长温度并不等于生长量最高时的培养温度，也不等于发酵速度最高时的培养温度或累积代谢产物量最高时的培养温度，更不等于累积某一代谢产物量最高时的培养温度。
因此，生产上要根据微生物不同生理代谢过程温度的特点，采用分段式变温培养或发酵。
例如，嗜热链球菌的最适生长温度为37℃，最适发酵温度为47℃，累积产物的最适温度为37℃。
最高生长温度 是指微生物生长繁殖的最高温度界限。
在此温度下，微生物细胞易于衰老和死亡。
微生物所能适应的最高生长温度与其细胞内酶的性质有关。
例如细胞色素氧化酶以及各种脱氢酶的最低破坏温度常与该菌的最高生长温度有关。
致死温度 最高生长温度如进一步升高，便可杀死微生物。
这种致死微生物的最低温度界限即为致死温度。
致死温度与处理时间有关。
在一定的温度下处理时间越长，死亡率越高。
严格地说，一般应以10分钟为标准时间。
细菌在10分钟被完全杀死的最低温度称为致死温度。
测定微生物的致死温度一般在生理盐水中进行，以减少有机物质的干扰。
20、pH对微生物生长的影响以及根据pH如何对微生物进行划分？
微生物生长的pH值范围极广, 一般在pH2~8之间，有少数种类还可超出这一范围，事实上，绝大多数种类都生长在pH5 ~9之间。
不同的微生物都有其最适生长pH值和一定的pH范围，即最高、最适与最低三个数值，在最适pH范围内微生物生长繁殖速度快，在最低或最高pH值的环境中，微生物虽然能生存和生长，但生长非常缓慢而且容易死亡。
一般霉菌能适应pH值范围最大，酵母菌适应的范围较小，细菌最小。
霉菌和酵母菌生长最适pH值都在5~6，而细菌的生长最适pH值在7左右。
21、图解营养物浓度对生长速度和菌体产量的影响。
22、现有的微生物保藏法可分为几类？
试用表解之。
就方法的简便与否，保藏效果的好坏，保藏对象的范围，保藏的基本原理，以及保藏期的长短等方面，列表比较几种最常见的菌种保藏法。
方法
主要措施
适宜菌种
保藏期
评价
冰箱保藏法<斜面）
低温
各大类
约1-6月
简便
冰箱保藏法<半固体）
低温、避氧
细菌、酵母菌
约6-12月
简便
石蜡油封保藏法
低温、阻氧
各大类
约1-2年
简便
甘油悬浮液保藏法
低温、保护剂
干燥、无营养
细菌、酵母菌
约10年
较简便
砂土保藏法
干燥、无营养
产孢子的微生物
约1-10年
简便有效
冷冻干燥保藏法
干燥、低温、无氧、有保护剂
各大类
>5-15年
繁而高效
液氮保藏法
超低温、有保护剂
各大类
>15年
繁而高效
23试分析麦康开培养基的各组分的主要作用是什么？
该培养基属于什么培养基？
A功能
蛋白胨
氮源
乳糖
碳源
NaCl
无机物
牛胆酸盐
生长因子
PH7.4
适宜菌生长
1%中性红
指示剂
发酵管
判断是否产气
属于半组合培养基
24从微生物学的角度分析，低酸性食品为什么？
25．引起下列食品变质的微生物主要是什么类群？
为什么？
<1）消毒牛奶<室温）<2）真空包装的蜜饯产品<3）面粉
<4）充CO2不足的碳酸饮料<5）杀菌不足的肉类罐头
A：
消毒牛奶：
细菌，因细菌表面积大，生长速度最快。
B：
真空包装的蜜饯产品：
酵母菌，在高渗情况下，Aw〈0.85，兼在厌氧的酵母菌可以活。
C：
面粉，干霉菌，因干性霉菌可以分解淀粉，引起面粉发霉。
Aw小。
D：
充CO
不足的碳酸饮料：
酵母菌，PH=4呈酸性，霉菌酵母菌可以生长，但CO
抑制了细菌的生长。
E：
杀菌不足的肉类罐头：
芽孢未杀死。
第七章<本章考点较多，大多为基本的简单的知识点）
1.历史上证明核酸是遗传是遗传物质基础的经典实验有几个？
实验者是谁？
试举其中一例加以说明。
三个，还要注意图
2.什么是影印平板培养法？
它有何理论与实际应用？
影印培养法就是一种通过盖章的方式能达到在一系列培养皿的相同位置上出现相同的遗传型菌落的接种和培养方法。
它证明了微生物的抗药性是在未接触药物前自发产生的，这一突变与相应的药物环境不相干是自发的。
利用影印平板法，可从非选择性条件下生长的微生物群体中分离到只有在选择性条件下才能分离到的相应突变株。
实际应用：
育种等方面，证明证明突变的自发性和不对应性。
3．图示平板影印培养法证明突变的自发性和不对应性。
4.证明突变的发生与环境因子间无直接对应关系的三个经典实验？
5.简述诱变育种的基本环节。
关键是什么？
何故？
工作关键：
①选择简便有效的诱变剂②挑选优良的出发菌株
③处理单孢子悬液④选用最适诱变剂量
⑤充分利用复合处理的协同效应
⑥利用和创造形态，生理和产量相关指标
⑦设计和采用高效的筛选方案方法。
⑧创造新型筛选方法。
6.什么是质粒？
它有何特点？
主要质粒有几类？
各有何理论与实际意义？
7.试述用Ames法检测致癌剂的理论依据、方法概要和优点。
鼠伤寒沙门氏菌的组氨酸营养缺陷型菌株在基本培养基的平板上不能生长，如发生回复突变成原养型后能生长。
方法大致是在含待测可疑“三致”物<例如黄曲霉毒素、二甲氨基偶氮苯、“反应停”或二垩英等）的试样中，加入鼠肝匀浆液，经一段时间保温后，吸入滤纸片中，然后将滤纸片放置于平板中央。
经过培养后，出现三种情况：
①在平板上无大量菌落产生，说明试样中不含诱变剂；②在纸片周围有一抑制圈，其外周围出现大量菌落，说明试样中有某种高浓度诱变剂存在；③在纸片周围长有大量菌落，说明试样中有浓度适当的诱变剂存在。
优点：
快速、准确和费用省等。
8.举例说明在微生物诱变育种工作中，采用高效筛选方案和方法的重要性。
通过诱变处理，在微生物群体中会出现各种突变型个体，但其中绝大部分是负变株。
要在其中把极个别的产量提高较显著的正变株筛选出来工作量会非常大。
为了花费最少的工作量，又能在最短的时间内取得最大的成效。
例如：
在柠檬酸生产菌株Aspergillususamii<宇佐美曲霉）的筛选过程中，有人把待测菌株的单孢子用特制的不锈钢多点接种器接种到浸有淀粉培养基和溴甲酚绿指示剂的厚滤纸片上，经培养后，根据黄色变色圈的直径和该菌落直径之比，就可筛选出产量较高的菌株。
此处可以列举教材p219图7-17所设计的实验。
9、为什么在进行诱变处理时，要把成团的微生物细胞或孢子制成充分分散的单细胞或孢子悬液？
一方面分散状态的细胞，可以均匀的接触诱变剂，另一方面又可避免长出不纯菌落。
在某些微生物中，由于许多微生物细胞内同时含有几个核，即使用单细胞悬浮液还是易长出不纯菌；有时虽处理了单核的细胞或孢子，由于诱变剂只作用DNA双链中某的一条单链，故某一突变还是无法反映在当代的表型上。
只有经过DNA复制、细胞分裂后，这一变异才在表型上表述，出现不纯菌落。
不纯菌落的存在，是诱变育种中初分离的菌株经传代后很快出现生产性状“衰退”的主要原因。
故对霉菌、放线菌应处理分生孢子，芽孢杆菌则应处理芽孢。
10.试用表解法概括一下筛选营养缺陷型突变株的主要步骤和方法。
营养缺陷性的筛选：
一般要经过四个环节
<1）诱变、
<2）淘汰野生型：
富集培养、抗生素法、菌丝过滤法
<3）检出营养缺陷型：
夹层培养法、限量补充培养法、逐个检出法、影印平板法
<4）鉴定营养缺陷型：
生长谱法
11.试比较E.coli的F+、F-、Hfr和F'菌株的异同，并图示四者间的联系。
F+菌株：
含游离F因子菌株为雄性菌株，还可使细胞产生1—4条性伞毛。
游离F因子，可以独立于细胞核进行复制。
Hfr菌株：
:
F因子整合到DNA的特定位置上的菌株，为高频重组菌株重组频率高。
Fˊ菌株和Fˊ因子：
F因子从细菌DNA上脱落下来，而带有细菌DNA的F因子。
Fˊ因子：
带有细菌DNA的F因子。
Fˊ菌株：
带有Fˊ因子细菌。
F-菌株：
不含F因子的菌株为F-
12.什么是原生质体融合？
其基本操作程序如何？
他在育种工作中有何优点？
原生质体融合：
就是将双亲株的微生物细胞分别通过酶解去壁，形成原生质体，然后在高渗条件下混合，并加入物理的、化学的或生物的助融条件，使双亲株的原生质体间发生相互凝集和融合的过程。
基本程序：
①筛选标记菌株；
②制备原生质体；
③原生质体融合；
④原生质体再生；
⑤选择融合子；
⑥筛选实用性菌株。
13.什么是基因工程？
简述其操作过程。
<请注意教材p237，图7-34，可能考点为图填空，此图请理解为准）
基因工程：
主要操作过程<1）获得目的基因
<2）选择基因载体
<3）体外重组
<4）外源基因导入<细菌、植物、动物、基因枪）
<5）筛选和鉴定
<6）应用
14.试述微生物在基因工程中的重要地位。
15.菌种衰退的原因是什么？
如何区分衰退、饰变与杂菌污染？
菌种退化即生产性能退化，遗传标记丢失，原有典型的性状变得不典型。
衰退原因1、自发突变2、通过诱变获得的高产菌株本身不纯3、培养、保藏条件
衰退指由于自发突变的结果而使某物种原有一系列生物学性状发生量或质变的现象。
饰变是指外表的修饰性改变，即一种不涉及及遗传物质结构改变而只发生在转录、转译水平上的表型变化。
杂菌污染则是指混入其它菌。
16.试述菌种保藏的目的、原理，各种保藏方法的理论依据、适用对象及保藏期如何？
菌种保藏原理：
根据微生物生理、生化特点，选用优良的菌株，最好是他们的休眠体，人工的创造适合休眠的环境条件，即干燥、低温、缺乏氧气和养料等使其代谢活动处于最低状态，但又不至于死亡，从而达到保藏的目的。
冷冻干燥保藏法：
1、准备安管2、准备菌种3、制各菌悬液及分离4、冷冻：
迅速降温至-40~-70摄氏度5、抽真空：
完成时有干燥块6、抽真空，封口7、冰箱保藏
冷冻干燥保藏法原理：
通过洗涤液体的所有对细胞生长有害的物质，脱脂牛奶或糖、甘油等可以与
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