《植物组织培养技术》组培基本操作技术.docx
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《植物组织培养技术》组培基本操作技术
《植物组织培养技术》组培基本操作技术
模块介绍
掌握组培基本操作技术是做好组织培养工作的前提和关键。
本模块介绍了培养基制备、无菌操作等组培基本操作技术，主要内容包括培养基的种类、成分、特点和配制技术，以及外植体处理、接种方法、无菌操作规程等理论知识和技术方法。
两个项目共设计6个工作任务，以工作任务为载体，开展项目实践活动，旨在培养学生无菌意识、团队精神和操作技能，使学生初步具备培养基制备工、接种工的基本素质与工作能力。
模块结构设计见表1。
表1模块结构设计
项目名称
工学任务
项目1培养基制备
任务1－1母液配制
任务1－2培养基配制
任务1－3培养基灭菌
项目2无菌操作
任务2－1外植体采集与处理
任务2－2接种用品准备
任务2－3接种训练
任务2－4微茎尖剥离
项目1培养基制备
一、学习目标
（一）终极目标
能够根据培养对象和培养目的准确配制培养基。
（二）促成目标
1．准确识记组培药品及其作用；
2．熟记植物激素的种类、生理作用、理化性质与配制要求；
3．清楚常用基本培养基的种类与特点；
4．掌握母液和培养基的配制目的与操作流程，能够熟练配制母液和培养基；
5.熟练使用相关设备与用具；
6.具备无菌意识，具有团队精神、创新意识和和责任心。
。
二、学习内容
1．培养基的种类、特点与成分；
2．激素种类、理化性质、生理作用与配制要求；
3.母液配制目的与方法；
4．培养基配制的目的与方法；
5.培养基灭菌方法。
三、知识点
1．培养基的种类、特点与成分；
2．母液配制目的与方法；
3．培养基配制的目的与方法；
4.培养基灭菌方法。
四、技能点
1.母液配制；
2.培养基配制；
3.培养基灭菌。
五、教学重点
1.培养基的种类、成分与特点；
2.激素种类、理化性质、生理作用；
3.母液和培养基配制的目的与方法；
4.培养基灭菌方法。
六、教学难点
1.MS大量元素母液、激素母液和铁盐母液的配制；
2.培养基配制操作的规范度和熟练度；
3.影响培养基湿热灭菌效果的因素；
4.培养基中加入活性炭、抗生素的作用；
5.配制螯合铁的目的。
七、教学设计
教学任务
教学设计
任务1-1
母液配制
1.教师提前下发工单，学生按单要求自学（课下完成）；
2.个别小组协助实验员做好实训准备（课下完成）；
3.教师检查自学效果，审定方案，宣布现场教学安排及实训要求（10min）[启发式]；
4.学生准备所需药品及用具（5min）[现场教学]；
5.组长负责，分组按工单、交叉配制MS母液和激素母液（50min），在现场可随时观看课件和动画，教师巡回指导[现场教学、任务导向、动画辅助]；
6.填写母液配制登记表并上交，组间互检（5min）[现场教学、任务导向、小组考核]；
7.师生讨论问题点（10min）[讨论式]；
8.师生现场评价（10min）[以考促训]。
任务1-2
培养基配制
1.同任务1－1；
2.同任务1－1；
3.教师检查自学效果，宣布教学安排及实训要求（10min）；
4.各组宣讲配制方案，师生点评（10min）[学导式]；
5.学生修订方案，准备所需药品及用具（5min）[任务导向、启发式]；
6.组长负责，分组按工单配制模拟培养基和真实培养基（50min），教师巡回指导[现场教学、任务导向、动画辅助]；
7.填写培养基配制登记表并上交（5min）；[现场教学、任务导向、小组考核]。
任务1-3
培养基灭菌
8.现场随机口试，考查学生对高压灭菌锅使用方法的掌握程度，师生讨论培养基湿热灭菌时的易发问题（5min）[讨论式]；
9.教师安排1个小组进行培养基灭菌（包括接种工具、自来水、滤纸和实验服等灭菌），时间1h左右（以后小组轮流灭菌）,其它小组同步进行移母液、封口等培养基配制技能环节的强化训练，并随机讨论相关理论与操作问题[现场教学、讨论式、启发式]；
10.组内、组间技能比赛（口试+操作），统计各小组学生的初始操作成绩（10min）[以赛促练、现场教学]；
11.学生总结，教师点评（5min）[启发式]；
12.学生课下完成实训报告。
八、拓展学习
1.MS干粉培养基；
2.螯合剂与鳌合物；
3.培养基保存；
4.培养基不凝固的原因；
5.无土栽培营养液与组培培养基的区别。
九、学习建议
1.重视培养基制备。
因为这项工作是组培日常工作之一，也是组培非常重要的技术环节。
2.先从培养基成分、种类入手，然后过渡到培养基种类的比较学习，最后再操作。
3.培养基制备前要清楚母液和培养基配制流程与配制方法，特别要重点学习各操作环节的具体要求。
4.先按流程及技术要求操作，然后在规范操作的前提下，反复多次练习技能操作，最后达到熟练。
十、教学评价
项目1评价单1
教学模块
组培基本操作技术
项目名称
项目1培养基制备
总分
任务名称
任务1.1母液配制
项目组别
项目组长
组员
评价项目与标准
标准分值
评价形式
小组自评（20%）
教师评价
（80%）
课前准备：
有母液配制方案
5
配制方案制定科学合理、内容全面、条理性强
10
自学效果好
5
现场操作：
用品准备齐全、适用，选用合理
5
按照母液配制流程操作
10
操作规范、有序
10
操作熟练
10
计算、称量、定容准确，药品混合顺序正确
10
母液配制登记表设计科学合理，记录完整
10
母液澄清透明，无混浊、沉淀和结晶析出现象
15
小组表现：
组长认真负责，分工合理
5
小组成员积极参与，配合默契
5
总分
100
教师点评：
组长签字
教师签字
签字日期
年月日
签字日期
年月日
项目1评价单2
教学模块
组培基本操作技术
项目名称
项目1培养基配制
总分
任务名称
任务1.2培养基配制；任务1.3培养基灭菌
项目组别
项目组长
组员
评价项目与标准
标准分值
评价形式
小组评价
（20%）
组间互评
（80%）
教师评价
（80%）
课前准备：
配制方案制定科学合理，内容全面，条理性、针对性强
10
配制方案
用品准备齐全、适用
5
现场观察
培养基配制与灭菌：
母液移取准确，操作规范、熟练，2min内移完母液。
10
现场操作
现场观察
定容操作规范、迅速，溶液凹面与刻度线卡齐
10
糖和琼脂的用量计算、称量准确
10
培养基熬制时间适宜，澄清透明
10
pH值检测准确，调整准确
10
趁热分装，垂直注射，培养基不能溅留在培养瓶口
5
封口速度快、位置适宜，松紧适度。
5
灭菌操作规范、熟练、彻底
10
小组表现：
操作前准备充分，分工合理，积极主动，配合默契
10
现场观察
小组成员具有质量意识、成本意识、创新意识和责任心
5
总分
100
教师点评：
组长签字
教师签字
签字日期
年月日
签字日期
年月日
项目2无菌操作
一、学习目标
（一）终极目标
能够根据培养对象和培养目的熟练进行无菌操作。
（二）促成目标
1．正确理解理解灭菌与消毒的含义，准确识记各种灭菌剂与灭菌原理；
2．掌握外植体选择的原则和处理的一般方法，会正确处理外植体；
3．掌握无菌操作规程、接种方法与注意事项，清楚接种所需用品，能够熟练、规范进行无菌操作；
4．能够根据不同植物材料确定灭菌方案，选择接种方法；
5．会准确剥离微茎尖；
6.熟练使用超净工作台、解剖镜和接种器具；
7.具有无菌意识、全局观念和团队精神，养成注重细节和一丝不苟的工作作风。
二、学习内容
1.外植体选择的原则与方法；
2.外植体预处理方法；
3.外植体灭菌方法；
4.外植体修整要求与外植体大小；
5.接种所需用品；
6.微茎尖剥离的方法与要求；
7.无菌操作规程；
8.接种方法与注意事项。
三、知识点
1.外植体选择原则与外植体预处理方法；
2.外植体修整要求与外植体大小；
3.外植体表面灭菌原则与方法；
4.常用的灭菌剂与灭菌原理。
5.接种所需用品；
6.微茎尖剥离方法与要求；
7.无菌操作规程；
8.接种程序、接种方法与注意事项；
四、技能点
1.外植体采集与修整；
2.外植体预处理；
3.外植体表面灭菌；
4.微茎尖剥离；
5.接种。
五、教学重点
1.外植体选择原则；
2.外植体表面灭菌原则与方法；
3.接种程序、接种方法与注意事项；
4.无菌操作规程；
5.微茎尖剥离方法与要求。
六、教学难点
1.灭菌方案的制定；
2.灭菌与消毒的区别；
3.外植体表面灭菌；
4.接种操作；
5.微茎尖剥离。
七、教学设计
教学任务
教学设计
任务2-1
外植体选择与处理
1.教师提前下发工单，学生按单要求自学（课下完成）；
2.材料采集用品准备（10min）[现场教学]；
3.教师检查自学效果，师生互动（10min）；[问答式]
4.外植体选择与采集（生态环境观察、植物器官识别、母本植株选择）（10min）；[现场操作、讨论式、启发式、任务导向]
5.室外预处理（喷杀菌剂、杀虫剂、套袋）（20min）；[现场操作、任务导向]
6.外植体采集（40min）；[现场操作
7.教师精讲器官识别要点与外植体表面处理方法与要求（10min）；[学导式、讨论式、问答式]
8.外植体修整，流水冲洗（45min）；[现场操作、任务导向]
9.外植体表面灭菌（分组确定灭菌方案，外植体灭菌处理）（20min）[现场操作、任务导向]
10.组内讨论问题点（10min）；[讨论式、启发式]
11.师生评价（5min）。
[以考促训]
任务2-2
接种用品准备
任务2-3
无菌操作
1.教师提前下达工单，学生自学相关理论知识，并列出接种用品清单（课下完成）；
2.教师指派1组学生协助实验员做好接种前准备（以学期为单位，各小组轮流训练），教师检查自学（10min）；[现场操作、任务导向]
3.教师检查小组接种准备情况（组长参与，5min）；[以考促训]
4.安排学生看动画（5min），教师演示并精讲无菌操作规程与方法，明确操作要求与注意事项（15min）；[学导式、启发式、动画辅助]
5.学生分组进行外植体表面灭菌（15min）；[现场操作、任务导向]
6.学生分组进行葡萄或草莓的茎段、叶片等外植体接种操作，组长组织协调，教师巡回指导（100min）；[现场操作、任务导向]
7.组内开展接种技能比赛，师生现场指导与考评（10min）；[以考促训，以赛促练]
8.收拾台面，填写记录，清洗培养瓶等（5min）；[现场操作、任务导向]
9.学生对照评价单自检，讨论接种操作存在哪些问题（10min）；[讨论式]
10.师生进行现场评价（5min）。
重复安排一次实训。
任务2-4
微茎尖剥离
1.教师提前下达工单，学生按单自学（课下完成）；
2.教师指派1组学生协助实验员做好课前准备（10min）；
3.教师检查小组接种准备情况（组长参与，5min）；
4.教师讲解微茎尖剥离的目的意义，演示具体操作方法（10min）；[启发式、现场示范]
5.教师介绍解剖镜的构造与使用方法，现场演示剥离微茎尖（10min）；[讲授、启发式、现场示范]
6.学生练习解剖镜使用（10min）；[现场操作]
7.学生先徒手剥离茎尖，后转入解剖镜下继续剥离微茎尖，教师现场指导（30min）；[现场操作、任务导向]
8.师生讨论交流（10min）；[讨论式、启发式]
9.教师总结（5min）。
重复安排一次实训。
八、拓展学习
1.除培养基之外的接种器械用品的消毒灭菌方法；
2.接种器具消毒器、超净工作台、解剖镜的使用。
九、学习建议
1.无菌操作是组培关键技术环节，广义上的无菌操作涉及空间、培养基、材料、接种用具等灭菌，狭义上的无菌操作是指接种操作。
学习时建议采取比较法、联想法等学习方法，分项学习，并比较不同物质灭菌方法上的不同。
2.接种前先了解无菌操作规程及防止交叉污染的可能原因，然后按规程分解操作。
练习操作时先注重规范度，后期反复练习，注意逐渐提高操作速度和手、眼和工具的协调应用。
3.最后针对一些不正当的操作，反思其后果及如何避免。
十、教学评价
项目2评价单1
教学模块
组培基本操作技术
项目名称
项目2无菌操作
总分
任务名称
任务2.1外植体选择与处理
项目组别
项目组长
组员
评价内容
标准分值
小组自评
（20%）
组间互评（20%）
教师评价
（60%）
外植体采集：
用品要求齐全、适用。
5
现场观察认真、全面、细致，正确识别器官等取材部位及其特征
10
采集及预处理方法正确，操作熟练
15
材料修整与处理：
材料修整方法正确
10
流水冲洗操作正确，时间确定合理
5
材料灭菌：
灭菌方案科学合理、具有可操作性和可行性
10
操作规范、熟练
15
灭菌效果良好
10
小组表现：
组长认真负责，分工合理
5
小组成员积极参与，配合默契
5
小组成员分析问题能力较强
10
总分
100
教师点评：
组长签字
教师签字
签字日期
年月日
签字日期
年月日
项目2评价单2
教学模块
组培基本操作技术
项目名称
项目2无菌操作
总分
任务名称
任务2.2接种用品准备；任务2.3无菌操作
项目组别
项目组长
组员
评价内容
标准分值
小组自评
（20%）
组间互评（20%）
教师评价
（60%）
用品准备：
齐全、适用。
5
材料灭菌：
灭菌方案科学合理
10
灭菌操作正确
10
灭菌操作熟练
10
灭菌效果良好
10
接种：
严守无菌操作规程
10
材料修整合理，外植体规格适宜、整齐一致
10
操作规范，动作协调、熟练，无违规现象
20
外植体布局合理
5
小组表现：
组长认真负责，分工合理
5
小组成员积极参与，配合默契
5
总分
100
教师点评：
组长签字
教师签字
签字日期
年月日
签字日期
年月日
项目2评价单3
教学模块
组培基本操作技术
项目名称
项目2无菌操作
总分
任务名称
任务2.4微茎尖剥离
项目组别
项目组长
组员
评价内容与标准
标准分值
小组自评（40%）
教师评价（60%）
解剖镜使用：
熟悉解剖镜构造
5
解剖镜操作规范
15
解剖镜操作熟练
15
微茎尖剥离：
操作方法正确
15
操作熟练
15
微茎尖剥离到位，大小适宜
20
实训表现：
认真听讲，态度积极、认真
5
注重细节
10
总分
100
教师点评：
组长签字
教师签字
签字日期
年月日
签字日期
年月日
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