考点19 基因的结构和基因工程.docx
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考点19基因的结构和基因工程
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【考点19】基因的结构和基因工程
2011年高考题
II（9分）家蚕细胞具有高效表达外源基因的能力。
将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养，可提取干扰素用于制药。
（1）进行基因操作前，需用___________________酶短时处理幼蚕组织，以便获得单个细胞。
（2）为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的_____和______之间。
（3）采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞。
该PCR反应体系的主要成分应包含：
扩增缓冲液（含Mg2+）、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA,_______和______。
（4）利用生物反应器培养家蚕细胞时，贴壁生长的细胞会产生接触抑制。
通常将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反应器中，这样可以______,增加培养的细胞数量，也有利于空气交换。
II．
（1）胰蛋白（或胶原蛋白）
（2）启动子终止子
（3）对干扰素基因特异的DNA引物对TaqDNA聚合酶
（4）扩大细胞贴壁生长的附着面积
2010年高考题
6．在白花豌豆品种栽培园中，偶然发现了一株开红花的豌豆植株，推测该红花表现型的出现是花色基因突变的结果。
为了确定该推测是否正确，应检测和比较红花植株与白花植株中B
A．花色基因的碱基组成B．花色基因的
序列
C．细胞的
含量D．细胞的
含量
2．在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错误的是（A）
A．用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸
B．用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体
C．将重组DNA分子导入烟草原生质体
D．用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞
解析：
本题考查基因工程的有关知识,基因工程的一般过程:
①用限制性核酸内切酶切割含目的基因的DNA分子（除草剂基因）和运载体（质粒）,
用DNA连接酶连接切割好的目的基因和运载体
重组DNA分子导入受体细胞,因为是植物可以说是原生质体
用相应的试剂和病原体筛选转基因细胞
用植物组织培养技术培养抗除草剂的转基因烟草（表达）.所以答案是A
5.下列叙述符合基因工程概念的是
A．B淋巴细胞与肿瘤细胞融合，杂交瘤细胞中含有B淋巴细胞中的抗体基因
B．将人的干扰素基因重组到质粒后导入大肠杆菌，获得能产生人干扰素的菌株
C．用紫外线照射青霉菌，使其DNA发生改变，通过筛选获得青霉素高产菌株
D．自然界中天然存在的噬菌体自行感染细菌后其DNA整合到细菌DNA上
5．下图为人WNK4基因部分碱基序列及其编码蛋白质的部分氨基酸序列示意图。
已知WNK4基因发生一种突变，导致1169位赖氨敬交为谷氨酸。
该基因发生的突变是
A．①处插入碱基对G—C
B．②处碱基对A—T替换为G—C
C．③处缺失碱基对A—T
D．④处碱基对G—C替换为A—T
答案：
B
解析：
本题主要考查基因突变、转录、翻译等基础知识，及突变对性状的影响。
第一步先根据基因结构和氨基酸种类先确定密码子的排列顺序，即mRNA上建基排列顺序（…GGGAAGCAG…）。
由于1169位赖氨敬（AAG）交为谷氨酸（GAAGAG），结合题干意思即①②③④四处只有一处发生突变可确定谷氨酸密码子是（GAG）从而推出是②处碱基对A—T替换为G—C。
所以选B项。
32．[生物—现代生物科技专题]（10分）
红细胞生成素（EPO）是体内促进红细胞生成的一种糖蛋白，可用于治疗肾衰性贫血等疾病由于天然EP0来源极为有限，目前临床使用的红细胞生成素主要来自于基因工程技术生产的重组人红细胞生成素（rhEPO）期间要生产流程如右图
（1）图中①所指的是技术。
（2）图中②所指的物质是，③所指的物质是。
（3）培养重组CHO细胞时，为便于清除代谢产物，防止细胞严物积累对细胞自身造成危害，应定期更换。
（4）检测rhEPO外活性需用抗rhEPO单克隆抗体。
分泌单克隆抗体的细胞，可由rhEPO免疫过的小鼠B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合而成
答案：
（1）PCR
（2）mRNArhEPO（3）培养液（4）杂交瘤
解析：
本题主要以人红细胞生成素生产为材料来考查基因工程和细胞工程中动物细胞培养技术、制备单克隆抗体技术。
获取目的基因的方法有四种（从基因文库中获取、用PCR扩增技术、用反转录法、用化学合成法）由图以核DNA为模板获得目的基因的方法可知①为PCR技术。
进行反转录的模板是mRNA。
由题意可知重组CHO细胞适用于生产重组人红细胞生成素（rhEPO），所以重组CHO细胞能过表达出重组人红细胞生成素（rhEPO）或者红细胞生成素。
培养动物细胞是用液体培养基——即培养液，细胞从培养液中吸收营养，并同时向培养液中排放代谢废物，当代谢废物积累时会危害细胞，因此要不断更新培养液。
制备单克隆抗体是让淋巴B细胞与骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞，然后由杂交瘤细胞来分泌抗体。
2009年高考题
1.（2009·安徽高考）2008年诺贝尔化学奖授予了“发现和发展了水母绿色荧光蛋白“的三位科学家。
将
绿色荧光蛋白基因的片段与目的基因连接起来组成一个融合基因，再将该融合基因转入真核生物细胞内，表达出的蛋白质就会带有绿色荧光。
绿色荧光蛋白在该研究中的主要作用是（ ）
A．追踪目的基因在细胞内的复制过程
B．追踪目的基因插入到染色体上的位置
C．追踪目的基因编码的蛋白质在细胞内的分布
D．追踪目的基因编码的蛋白质的空间结构
【解析】选C。
将绿色荧光蛋白基因的片段与目的基因连接起来组成一个融合基因，将该融合基因转入真核生物细胞内，表达出的蛋白质带有绿色荧光，从而可以追踪目的基因编码的蛋白质在细胞内的分布。
2.（2009·浙江高考）下列关于基因工程的叙述，错误的是（ ）
A．目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物
B．限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶
C．人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性
D．载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达
【解析】选D。
基因工程中目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物；常用的工具酶是限制性核酸内切酶和DNA连接酶；人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性，只有经过一定的物质激活以后，才有生物活性。
载体上的抗性基因主要是有利于筛选含重组DNA的细胞，不能促进目的基因的表达。
3.（2009·广东理基）钱永健先生因在研究绿色荧光蛋白方面的杰出成就而获2008年诺贝尔奖。
在某种
生物中检测不到绿色荧光，将水母绿色荧光蛋白基因转入该生物体内后，结果可以检测到绿色荧光。
由此可知（ ）
A．该生物的基因型是杂合的
B．该生物与水母有很近的亲缘关系
C．绿色荧光蛋白基因在该生物体内得到了表达
D．改变绿色荧光蛋白基因的1个核苷酸对，就不能检测到绿色荧光
【解析】选C。
某种生物中检测不到绿色荧光，将水母绿色荧光蛋白基因转入该生物体内后，结果可以检测到绿色荧光，说明绿色荧光蛋白基因在该生物体内得到了表达。
4.（2009·重庆高考）下表有关基因表达的选项中，不可能的是（ ）
基因
表达的细胞
表达产物
A
细菌抗虫蛋白基因
抗虫棉叶肉细胞
细菌抗虫蛋白
B
人酪氨酸酶基因
正常人皮肤细胞
人酪氨酸酶
C
动物胰岛素基因
大肠杆菌工程菌细胞
动物胰岛素
D
兔血红蛋白基因
兔成熟红细胞
兔血红蛋白
【解析】选D。
抗虫棉叶肉细胞中存在细菌抗虫蛋白基因，细菌抗虫蛋白基因能够表达产生细菌抗虫蛋白；正常人皮肤细胞中含有人酪氨酸酶基因，人酪氨酸酶基因能够表达产生人酪氨酸酶；大肠杆菌工程菌细胞存在动物胰岛素基因，动物胰岛素基因能够表达产生动物胰岛素；兔成熟红细胞中无细胞核，所以无兔血红蛋白基因不能表达产生兔血红蛋白。
此题为容易题，识记理解类。
5.（2009·上海高考）科学家运用基因工程技术将人的胰岛素基因与大肠杆菌的
质粒DNA分子重组，并且在大肠杆菌体内获得成功表达。
图示a处为胰岛素
基因与大肠杆菌质粒DNA结合的位置，它们彼此能结合的依据是（ ）
A．基因自由组合定律 B．半保留复制原则
C．基因分离定律D．碱基互补配对原则
【解析】选D。
本题考查基因工程的相关知识，重组质粒依据的是黏性末端的碱基互补配对原则。
6.（2009·天津高考）水稻种子中70％的磷以植酸形式存在。
植酸易同铁、钙等金属离子或蛋白质结合
排出体外，是多种动物的抗营养因子，同时，排出的大量磷进入水体易引起水华。
（1）磷元素除了形成植酸外，还可以出现在下列_____________分子或结构中（多选）。
A.核糖B.ATPC.核糖体D.核膜
（2）种植芦苇能有效抑制水华的发生，表明芦苇与引起水华的藻类关系是_____________。
（3）植酸酶可降解植酸，在谷物类饲料中添加植酸酶可提高饲料的_____________的利用率。
（4）酵母菌中植酸的活性较高。
下图是从不同类型酵母菌的发酵液中提取植酸酶的工艺流程。
据图回答：
①植酸酶________________（Ⅰ/Ⅱ）属于分泌蛋白。
②若植酸酶Ⅰ和Ⅱ的肽链组成不同，其差异体现在_________________。
③提纯的植酸酶需做活性条件测定。
右图为测定结果。
图中的自变量可为____________________________（答一种）；
因变量可以通过测定______________________来表示。
（5）为从根本上解决水稻中的高植酸问题，可将植酸酶基因导入水稻，培育低植酸转基因水稻品种。
下图是获取植酸酶基因的流程。
据图回答：
①图中基因组文库____________（小于/等于/大于）cDNA文库。
②B过程需要的酶是______________；A、C过程中_____________（可以/不可以）使用同一种探针筛选含目的基因的菌株。
③目的基因Ⅰ和Ⅱ除从构建的文库中分离外，还可以分别利用图中___________和_____________为模板直接进行PCR扩增，该过程中所用酶的显著特点是_________________________。
（6）已获得的转植酸酶基因水稻品系植酸含量低，但易感病，下图为选育低植酸抗病水稻品种的过程。
图中两对相对性状分别由两对基因控制，并独立遗传。
采用上图育种过程，需从_______________代开始筛选，经筛选淘汰后，在选留的植株中低植酸抗病纯合体所占的比例是__________。
选留植株多代自交，经筛选可获得低植酸抗病性状稳定的品种。
【解析】本题考查物质的元素组成、生物的种间关系、蛋白质、酶、基因工程、遗传定律的相关知识，涉及的知识点较多，综合性很强。
（1）只有核糖中不含磷元素，ATP（磷酸基团）、核糖体（含RNA）、核膜（含磷脂）中均含有磷元素。
（2）芦苇能抑制水华的发生，表明芦苇与水华的藻类关系是竞争。
（3）植酸易同铁、钙等金属离子或蛋白质结合排出体外，是多种动物的抗营养因子，而植酸酶可降解植酸，因此在谷物类饲料中添加植酸酶可提高饲料的营养成分的利用率。
（4）分析图可知，植酸酶Ⅱ需要经过两次离心，因此植酸酶Ⅰ属于分泌蛋白。
若植酸酶Ⅰ和Ⅱ的肽链组成不同，其差异体现在氨基酸的种类、数量和排列顺序的不同。
从图中可看出，自变量可为温度或pH，因变量可以通过测定单位时间内植酸的降解量或植酸降解量产物的生成量来表示。
（5）分析获取植酸酶基因的流程图可知，图中基因组文库大于cDNA文库。
B过程需要的酶应该是逆转录酶，因为A、C过程都能获得含目的基因的菌株，所以可以使用同一种探针进行筛选。
目的基因Ⅰ和Ⅱ除从构建的文库中分离外，还可以分别利用图中DNA和cDNA为模板直接进行PCR扩增，该过程中所用酶的显著特点是耐高温。
（6）根据上图育种过程，所需性状在F2代中才开始出现，所以应从F2代开始筛选。
从图中可以看出，低植酸抗病是双显性（在F2中占9/16），经筛选淘汰后，在选留的植株中纯合体所占的比例是1/9。
【答案】
（1）BCD
（2）竞争关系（3）营养成分
（4）①I②氨基酸的种类、数量和排列顺序不同
③温度（或PH）单位时间内植酸的降解量（或植酸降解产物的生成量）
（5）①大于②逆转录酶可以③DNAcDNA 耐高温
（6）F21/9
７.（2009·重庆高考）小鼠基因敲除技术获得2007年诺贝尔奖，该技术采用基因工程、细胞工程、杂交
等手段使小鼠体内的某一基因失去功能，以研究基因在生物个体发育和病理过程中的作用。
例如现有基因型为BB的小鼠，要敲除基因B，可先用体外合成的突变基因b取代正常基因B，使BB细胞改变为Bb细胞，最终培育成为基因敲除小鼠。
（1）基因敲除过程中外源基因是否导入受体细胞，可利用重组质粒上的检测。
如果被敲除的是小鼠抑癌基因，则可能导致细胞内的被激活，使小鼠细胞发生癌变。
（2）通过基因敲除，得到一只AABb小鼠。
假设棕毛基因A、白毛基因a、褐齿基因B和黄齿基因b均位于常染色体上，现要得到白毛黄齿新类型小鼠，用来与AABb小鼠杂交的纯合亲本的基因型是，杂交子代的基因型是。
让F1代中双杂合基因型的雌雄小鼠相互交配，子代中带有b基因个体的概率是。
不带B基因个体的概率是。
（3）在上述F1代中只考虑齿色这对性状，假设这对性状的遗传属X染色体伴性遗传，则表现黄齿个体的性别是，这一代中具有这种性别的个体基因是。
【解析】
（1）作为质粒的条件之一就是要具有标记基因，以检测外源基因是否导入受体细胞。
癌变的产生就是原癌基因由抑制态变为激活态。
（2）根据题意AABb基因敲除小鼠的表现型是棕毛褐齿，现要得到白毛黄齿新类型小鼠（aabb），推断应选取用与AABb小鼠杂交的纯合亲本的基因型，用图解表示：
亲本：
AABb × ―――
子代：
aabb
则此亲本必含有a基因，而又是纯合的基因型只能为aabb或aaBB，而aabb是要培育的新品种不可能有，所以只能选用基因型为aaBB的亲本，
亲本：
AABb × aaBB
子一代：
1/2AaBb 1/2AaBB
F1代中双杂合基因型AaBb的雌雄小鼠相互交配即自交,由于是常染色体遗传,即Bb自交后代的基因型及比例为:
1/4BB、2/4Bb、1/4bb，带有b基因个体的概率是3/4，不带B基因个体的概率是1/4。
（只考虑B和b这一对基因的计算，用基因分离定律）
也可两对同时计算用自由组合定律，AaBb自交得1/4AA×1/4BB、1/4AA×2/4Bb、1/4AA×１/4bb、2/4Aa×1/4BB、2/4Aa×2/4Bb、24Aa×１/4bb、1/4aa×1/4BB、1/4aa×2/4Bb、1/4aa×１/4bb、可得带有b基因个体的概率是12/16，不带B基因个体的概率是4/16。
（3）假设齿色性状的遗传属X染色体伴性遗传，则亲本都为褐齿，基因型为XBXb 和 XＢY，则F1代的基因型为XBXb、XＢXＢ、XBＹ、XbY，其中XbY为黄齿是雄性个体，雄性个体基因还有XBＹ。
此题考查学生对两大遗传定律的理解与掌握情况及基因工程的有关知识。
【答案】
（1）标记基因；原癌基因
（2）aaBB；AaBb；12/16（3/4）；4/16（1/4）
（3）雄性（♂）；XBY、XbY
８.（2009·江苏高考）苏云金杆菌（Bt）能产生具有杀虫能力的毒素蛋白。
下图是转Bt毒素蛋白基因
植物的培育过程示意图（
为抗氨苄青霉素基因），据图回答下列问题。
（1）将图中①的DNA用HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后，反应管中有种DNA片段。
（2）图中②表示HindⅢ与BamHⅠ酶切、DNA连接酶连接的过程，此过程可获得种重组质粒；如果换用Bstl与BamHⅠ酶切，目的基因与质粒连接后可获得种重组质粒。
（3）目的基因插入质粒后，不能影响质粒的。
（4）图中③的Ti质粒调控合成的vir蛋白，可以协助带有目的基因的T—DNA导入植物细胞，并防止植物细胞中对T—DNA的降解。
（5）已知转基因植物中毒素蛋白只结合某些昆虫肠上皮细胞表面的特异受体，使细胞膜穿孔，肠细胞裂解，昆虫死亡。
而该毒素蛋白对人类的风险相对较小，原因是人类肠上皮细胞。
（6）生产上常将上述转基因作物与非转基因作物混合播种，其目的是降低害虫种群中的
基因频率的增长速率。
【解析】本题考查基因工程的相关知识。
（1）由于上述两种酶形成的末端不一样，所以被两种不同的限制酶切割之后所形成的片段有AA、AB、BA、BB四种切法形成的四种片段。
（A表示HindⅢ，B表示BamHⅠ）
（2）同时被两种限制酶切割有两种不同的目的基因，即AB和BA，所以重组质粒有两种。
Bstl与BamHⅠ酶切割的末端一样，所以同时用这两种限制酶切割只能形成一种目的基因，所以只能形成一种重组质粒。
（3）质粒要进行复制才能更多的表达出产物，所以重组之后要能复制。
（4）酶具有专一性，对T—DNA的降解酶为DNA水解酶。
（5）生物的细胞表面的受体具有特异性，人类肠上皮细胞没有昆虫肠上皮细胞表面的特异受体。
所以该毒素蛋白对人类的风险相对较小（6）自然选择是普遍存在的，纯种种植自然选择会使害虫抗性基因频率快速增长。
所以混合种植会降低害虫的抗性基因频率的增长速率。
【答案】
（1）4
（2）21（3）复制（4）DNA水解酶
（5）表面无相应的特异性受体（6）抗性
９.（2009·上海高考）人体细胞内含有抑制癌症发生的P53基因，生物技术可对此类基因的变化进行检测。
（1）目的基因的获取方法通常包括________和________。
（2）上图表示从正常人和患者体内获取的P53基因的部分区域。
与正常人相比，患者在该区域的碱基会发生改变，在上图中用方框圈出发生改变的碱基对，这种变异被称为________。
（3）已知限制酶E识别序列为CCGG,若用限制酶E分别完全切割正常人和患者的P53基因部分区域（见上图），那么正常人的会被切成________个片段，而患者的则被切割成长度为________对碱基和________对碱基的两种片段。
（4）如果某人的P53基因部分区域经限制酶E完全切割后，共出现170、220、290和460碱基对的四种片段，那么该人的基因型是________（以P+表示正常基因，P-表示异常基因）。
【解析】本题主要考查基因工程相关知识。
（1）目的基因的获取方法有直接分离和化学方法人工合成两种；
（2）仔细对比正常人与患者的基因序列可知是CG碱基对变为了TA碱基对，这种变化属于基因突变；
（3）正常人P53基因含有两个限制酶E的识别序列，完全切割后可产生三个片段，患者P53基因中有一个限制酶E的识别序列发生突变，且突变点位于识别位点内，这样患者就只有一个限制酶E的识别序列，切割后产生两个片段，分别为290+170=460对碱基，220对碱基；
（4）正常人经限制酶E完全切割后产生三个片段，290对碱基、170对碱基和220对碱基，患者产生两个片段460对碱基和220对碱基，则该人的基因型应为P+P-。
【答案】
（1）从细胞中分离通过化学方法人工合成
（2）见图
基因碱基对的替换（基因突变）
（3）3460220
（4）
2008年高考题
1.（2008·海南高考）图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶
切位点，ampR为青霉素抗性基因，tctR为四环素抗性基因，P启动子，T为终止子，ori为复制原点。
已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。
据图回答：
（1）将含有目的基因的DNA与质粒该表达载体分别用EcoRI酶切，酶切产物用ＤＮＡ连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有、、三种。
若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行。
（2）用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。
之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是；若接种到含有青霉素的培养基中能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是________________。
（3）目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是_________，其合成的产物是___________。
（4）在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是。
【解析】
（1）连接酶连接黏性末端时，是不区分质粒还是目的基因的，所以可产生目的基因-载体连接物、载体-载体连接物、目的基因-目的基因连接物。
要想得到分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行分离纯化。
（2）在含四环素的培养基中，因为酶切位点破坏四环素抗性基因tctR，所以只有载体-载体连接产物才可能存在。
含青霉素的培养基中，酶切位点没有破坏青霉素抗性基因ampR，只要含有目的基因-载体连接物、载体-载体连接物都可以生存。
（3）同时选用两种酶之后目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的黏性末端不相同，就不会发生任意链接。
【答案】
（1）目的基因-载体连接物载体-载体连接物目的基因-目的基因连接物
分离纯化
（2）载体-载体连接物目的基因-载体连接物、载体-载体连接物
（3）启动子mRNA（4）EcoRI和BamHI
2007年高考题
1．（2007·全国卷II）下列有关基因工程中限制内切酶的描述，错误的是（ ）
A.一种限制性内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列
B.限制性内切酶的活性受温度的影响
C.限制性内切酶能识别和切割RNA
D.限制性内切酶可从原核生物中提取
【解析】选C。
生物体内有能识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切酶，它是可以将外来的DNA切断的酶。
由于这种切割作用是在DNA分子的内部进行的，故名限制性内切酶（简称限制酶）。
限制性内切酶只能识别和切割DNA，不能识别和切割RNA。
2．（2007·江苏生物）在采用鸡血为材料对DNA进行粗提取的实验中，若需进一步提取杂质较少的DNA，可
以依据的原理是（ ）
A．在物质的量浓度为0．14mol／L的氯化钠溶液中DNA的溶解度最小
B．DNA遇二苯胺在沸水浴的条件下会染成蓝色
C．DNA不溶于酒精而细胞中的一些物质易溶于酒精
D．质量浓度为0．1g／mL的柠檬酸钠溶液具有抗凝血作用
【解析】选C。
由于DNA不溶于酒精，而混杂在DNA中的某些细胞中的物质易溶于酒精，因此向含有杂质的DNA中加入95%的冷却酒精能进一步提纯DNA。
3．（2007·广东高考）香蕉原产热带地区，是我国南方重要的经济作物之一。
广东省冬季常受强寒潮和
霜冻影响，对香蕉生长发育影响很大。
由香蕉束顶病毒（BBTV，单链环状DNA病毒）引起的香蕉束顶病，对香蕉生产的危害十分严重。
当前香蕉栽培品种多为三倍体，由于无性繁殖是香蕉繁育的主要方式，缺少遗传变异性，因此利用基因工程等现代科技手段提高其种质水平，具有重要意义。
请根据上述材料，回答下列问题：
（1）简述香蕉大规模快速繁殖技术的过程。
（2）脱毒香蕉苗的获得，可采用＿＿＿的方法，此方法的依据是＿和。
（3）建立可靠的BBTV检测方法可以监控脱毒香蕉苗的质量，请问可用哪些方法检测病毒的存在？
（列举两种方法）
（4）某些深海鱼中发现的抗冻蛋白基因afp对提高农作
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