重要文件生化实验报告08级.docx
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重要文件生化实验报告08级
生物化学实验报告
姓名：
周丹
班级：
食品08-2班
学号：
080424209
指导老师：
林善枝
1、实验一SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定种子蛋白分子量1
2、实验二过氧化物酶（POD）活性的测定5
3、实验三细胞色素C的制备和测定8
4、实验四溶菌酶的提取和系列性质测定17
实验一SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定种子蛋白分子量
一、实验目的
1、学会使用SDS-PAGE方法测定蛋白质分子量。
2、掌握生物化学实验基本方法。
二、实验原理
经过SDS-PAGE和沸水浴处理过的蛋白质完全变性和解聚，带有大量的负电荷，并由于电泳的作用，这些带有负电荷的蛋白质将定向向电极的正极移动。
在这些蛋白移动时，使它们通过事先制备的聚丙烯酰胺凝胶，由于聚丙烯酰胺有分子筛的作用，小分子蛋白质容易通过凝胶孔径，阻力小，迁移速度快；大分子蛋白质则受到较大的阻力而被滞后，这样蛋白质在电泳过程中就会根据其各自分子量的大小而达到分离。
为了使各种蛋白质同时进入分离胶，即把蛋白质排在一条线上，所以就需要制备浓缩胶，浓缩胶具有较大的孔径，各种蛋白质都可以不受凝胶孔阻碍自由通过，但由于浓缩胶的pH值比较低，就可以把蛋白质样品压缩成浓缩成很短的区带。
蛋白质通过电泳之后，再用溴酚蓝染色，之后脱色去除凝胶中未与蛋白结合的背底染料，这样就可以清晰地观察到凝胶中被染色的蛋白质区带，再把它与标准蛋白对比，即可以得到未知蛋白质的分子量。
三、实验材料和设备
1、材料：
新鲜的绿豆芽和绿豆
2、试剂：
1分离胶：
20ml
丙烯酰胺浓度
13%
分离胶贮液
8.5ml
分离胶缓冲液
2.50ml
10%SDS
0.20ml
100%TEMED
12µl
蒸馏水
8.7ml
10%AP
0.12ml
2浓缩胶：
10ml
丙烯酰胺浓度
3%
分离胶贮液
1.2ml
浓缩胶缓冲液
3ml
10%SDS
0.10ml
100%TEMED
12µl
蒸馏水
5.6ml
10%AP
0.07ml
3电极缓冲液
4样品缓冲液
50.1%溴酚蓝溶液
6标准蛋白
7考马斯亮蓝溶液
8脱色液
四、实验操作步骤
9、脱色：
从染色剂中取出后用水冲洗，之后放在脱色剂中放入冰箱脱色。
五、实验结果分析以及实验注意事项
Ⅰ实验结果：
实验失败，样品蛋白没有均匀跑过分离胶，而是在分离胶上形成“八”字形，所以没有进行染色和脱色。
Ⅱ分析原因：
1浓缩胶的配制出现问题，导致浓缩胶无法干，拔出梳子之后无法形成整齐的凹槽。
另外，浓缩胶的成分可能添加有误，使得其浓缩效果不好，导致其无法教样品蛋白压成很窄区带，各种蛋白无规则跑过分离胶——有的已经跑下来，而有的还没有进入分离胶，这也是蛋白形成“八”字形的最主要原因。
2在重置电解槽把玻璃片换方向时，没有按紧玻璃片，导致玻璃片中进入大量气泡，这也是蛋白质样品在电泳时跑偏的原因之一。
3拔梳子时用力不均匀，使得浓缩胶形成的凹槽参差不齐。
Ⅲ注意事项：
1先把电解槽装好之后检查梳子是否能插进玻璃片之间，不能太松也不能太紧。
2加入分离胶与浓缩胶的时候要在两边同时加，使其在玻璃片中分布均匀，防止气泡产生。
3检查分离胶是否干的方法：
ⅰ看在烧杯中剩余的分离胶是否干
ⅱ看注入的水层有没有与分离胶形成一条清晰地分界线，可将电解槽微微倾斜看分离胶有没有和水一起向下流，如果没有，说明分离胶已经干了。
4边研磨样品边加入样品缓冲液，一般情况下，加入缓冲液的量是1gFW/1-1.5ml，表示1g鲜重的样品加入1到1.5ml样品缓冲液，这个量也可通过样品含水量进行调节。
样品研的要细，最后要达到浆糊的效果。
5离心时需要再取一个离心管装入和样品同样重量的水，同时装入离心机，保持平衡。
6判断浓缩胶是否干的方法：
按住梳子一端，轻轻抬起另一端，如果梳子和浓缩胶很好的分离，说明浓缩胶已经干了。
拔出梳子的时候注意用力均匀，避免出现气泡。
7将玻璃片换方向时，一定要用手按紧玻璃片，避免进入气泡。
8电泳时，注意电压的变化，如果电压忽然升的很高，立即打开电解槽，在内槽内加入电解液，然后继续电泳。
★后用绿豆重新进行了实验，由于环境院分离胶和浓缩胶的配制方法稍有改动（具体数据见实验四溶菌酶的提取和系列性质测定）
这次由于样品加得过多，导致看不到跑出的带，全被染色剂覆盖住了，只有旁边的Mac标准蛋白能明显看到三条标准线。
又由于本组的分离胶内出现气泡，所以只加了一组样品。
（具体如图1-1）
绿豆Mac蛋白
图1-1
实验二过氧化物酶（POD）活性的测定
一、实验目的
1掌握用分光光度法测定酶活性
2熟悉使用分光光度计的方法
3进一步熟悉生物化学实验的基本规则以及方法
二、实验原理
过氧化物酶可以利用H2O2将代谢中一些化合物氧化，这种酶的活性与呼吸作用和其他一些生理过程有关。
利用这种酶催化H2O2氧化愈伤木酚作为被氧化的基质。
将一定量的酶液加入到一定量的愈伤木酚和H2O2的混合溶液中，会立即发生酶催化反应，从而使H2O2氧化愈伤木酚，而这种反应的程度可通过分光光度计定量测定，利用分光光度计测定的光密度值（OD），可将酶的活性定量测定出来。
根据测定的光密度值随时间的变化可以计算酶的相对活性，用OD470/g/min×50作为酶活性单位。
三、实验材料、试剂及仪器
Ⅰ实验材料
马铃薯皮
Ⅱ实验试剂
磷酸样品缓冲液（PBS:
Na2PO4和NaH2PO4的混合缓冲液，Ph6.0）
反应混合液（磷酸缓冲液、愈伤木酚和H2O2的混合物）
Ⅲ实验仪器
移液管研钵离心管离心机比色皿分光光度计
四、实验步骤
2将糊状酶液移入离心管放入冰箱冷冻30min左右。
1称取马铃薯外皮0.39g，加入1.50ml磷酸缓冲液一起在研钵里研磨，研磨至糊状为止。
5在比色皿中加入20ul酶液，再加入2.50ml反应混合液，立即放入分光光度计中，每30s记录一次光密度值。
五、实验数据
1过氧化物酶活性记录表
时间（s）
30
60
90
120
150
180
210
240
光密度值（OD）
0.100
0.180
0.252
0.318
0.380
0.439
0.500
0.560
2酶液用量记录表
植物材料
马铃薯皮
材料用量
0.39g
磷酸缓冲液用量
1.50ml
酶液量
1.50ml
酶液使用量
20ul
六、反应进程曲线，计算酶的相对活性
1计算过程
△OD=（ODMAX-ODMIN）/t=（0.560-0.100）/4=0.460/4=0.115（OD470/min）
m=0.39*20*10-3/1.5=0.0052g
OD470/g/min=0.115/0.0052=22.12
所以酶的活度OD470/g/min×50为：
22.12*50=1106
2酶促反应进程曲线
七、实验注意事项
1制成的酶试剂尽量使其保持在低温，避免失活。
2在比色皿中先加入酶制剂，再加入样品，是样品和酶充分混合
八、思考题
1比较过氧化物酶和过氧化氢酶在催化反应中的主要区别
答：
过氧化物酶是催化过氧化物与底物发生反应，是底物作为被氧化的基质；而过氧化氢酶是催化氧化H2O2使其反应生成水，氧化基质是H2O2。
2为什么在酶促反应实验中强调混匀？
为何不用煮死的酶液，而是在反应混合液中不加
H2O2作为空白对照？
答：
酶液与反应液混匀，反应液与酶充分接触，使得反应充分，避免溶液局部光密度与整体不同而导致实验有误差。
若用煮死的酶液并且加入H2O2的话，因为H2O2本身也有氧化性，就算酶液是煮死的，也会导致有一小部分愈伤木酚发生反应，使得溶液光密度值发生微小变化，无法作为参比溶液。
实验三细胞色素C的制备和测定
一实验目的
1、掌握制备蛋白制品的一般方法，学会吸附和洗脱等一般的操作。
2、学会运用吸光度表示蛋白质浓度。
3、熟练掌握配溶液等实验室基本操作。
4、学习紫外可见分光光度计、离心机等实验室基本仪器的使用方法。
5、培养独立思考和独立解决问题的能力。
二实验原理
细胞色素是包括各种传送电子的含铁的蛋白质总称。
它广泛存在各种动植物组织和微生物中。
细胞色素是呼吸链中极为重要的电子传递体，细胞色素C（Cytc）只是细胞色素的一种，主要存在于线粒体中，需氧最多的组织如心肌酵母细胞中，细胞色素C含量丰富，所以本次实验材料为猪心。
细胞色素C溶于水，在酸性溶液中溶解度更大，所以可以从酸性水中提取，制品分为氧化型和还原型两种，前者水溶液呈深红色，后者水溶液呈桃红色。
细胞色素C对热、酸和碱都比较稳定，但三氯乙酸和乙酸可以使之变性引起某些失活。
本实验就采用猪心为材料，经过酸溶液提取，人造沸石吸附，硫酸铵溶液洗脱和三氯乙酸沉淀等步骤制备细胞色素C，并使用分光光度计测量其含量。
三实验材料、试剂、器材
Ⅰ材料
冷冻猪心
Ⅱ试剂
2mol/LH2SO4
1mol/LNH4OH（氨水）溶液
0.2%NaCl溶液
25%（NH4）2SO4溶液（100ml溶液中含有25g（NH4）2SO4，约为25℃时40%的饱和度）
BaCl2试剂（称取BaCl22g溶于100ml蒸馏水中）
20%三氯乙酸（TCA）溶液
人造沸石（Na2O·Al2O3·xSiO2·yH2O）白色颗粒（实际上是黄色），不溶于水
联亚硫酸钠（Na2S2O4·2H2O）
0.2—0.3mol/LNaOH和1mol/LNaCl混合溶液
Ⅲ器材
绞肉机，电磁搅拌器，电动搅拌器，离心机（可控温），722型分光光度计，玻璃柱（2.5×30cm），烧杯，量筒，移液管，洗耳球，铁架台，玻璃搅棒，透析纸，纱布，镊子、试管，1cm比色皿等
四操作方法
㈠总体流程
3、中和
2、提取
1、材料处理
在进行前三步的时候，同时进行人造沸石的再生，给第四步备用。
㈡具体步骤以及步骤分析
1、材料处理
从冰箱中取出已经搅碎的冷冻猪心，用镊子除尽猪心的非心肌组织，如脂肪、血管、韧带和积血。
★虽然猪心已经搅碎，但其中还有很多脂肪组织等，白色和黄色组织多为脂肪组织，一定要除去，否则搅拌后溶液表面会浮出一层油腻物质，会严重影响后面的操作步骤。
另外，深红色部分多为血管和积血，与心肌组织很难区分，出去时要特别注意，不要将心肌组织也除去，浪费太多会导致制品量不足。
2、提取
用数层纱布压挤过滤，收集滤液。
3—4层即可，本组用4层纱布过滤了一遍。
3、中和
用1mol/LNH4OH溶液将上述提取液调pH至7.2，静置适当时间过滤。
过滤完毕取出80ml放在冰箱备用，其余的滤液继续进行以下步骤。
★pH调至7.0即可，静置30—40分钟。
过滤的时候用滤纸和漏斗，因为过滤时间会比较长，漏斗用铁架台固定。
前面几次先用自来水洗，到pH为7—8时，用蒸馏水洗最后一遍，然后再加入少量蒸馏水，放在旁边备用。
4、吸附
将第3步得到的其余的红色滤液与再生完的人造沸石混合到一个烧杯中，不停搅拌，使细胞色素C充分吸附到人造沸石上面。
★此步骤也十分重要若不吸附充分，很可能无法提取出细胞色素C，所以这一步需持续8个小时以上，并且在每次沸石沉降下来之后，立即搅拌。
搅拌完成后沸石的颜色不会有明显变化，只能感觉比再生后稍微加深，不过可以明显看到红色滤液的颜色变浅，达到这个程度之后，将上清液轻轻倒掉。
5、洗脱
装柱之前，柱子底端的膜上需要垫一层滤纸，防止膜被弄破。
柱子准备好之后，先在柱内放入少量蒸馏水，防止沸石装入的时候堵住膜的孔，以致液体流不下来。
然后才可以将沸石缓慢装柱，待沸石沉降后在打开管口的夹子，先让上层的水漏下来至沸石上1—2cm后停止。
之后再加入（NH4）2SO4溶液至柱口处，打开夹子。
开始的澄清液体直接放出，直到柱子下端的管中出现了红色再开始收集。
流速大概十几秒钟一滴。
收集的同时还要注意沸石上方不要流干。
将第三步取出的80ml备用品和上一步收集到的洗脱液共同进行以下步骤。
6、盐析
离心15min左右，收集红色透亮的上清液，即细胞色素C滤液。
离心的同时尽量保持较低的温度。
7、三氯乙酸沉淀
收集沉淀的细胞色素C，加入蒸馏水用玻璃棒搅拌使之溶解。
立即离心，之后倾去上清液。
如果离心之后上清液还带有少许红色，可以继续滴加一些三氯乙酸，直到离心之后上清液完全无色为止。
8、透析
将溶解后的细胞色素C装入透析袋，放进大烧杯中（用电磁搅拌器搅拌），对蒸馏水透析，15min换水一次，直到用BaCl2试剂检验SO4-2已经被除净为止（透析液滴入BaCl2试剂中没有出现浑浊即可）。
将透析液过滤，即得到清亮的细胞色素C粗提取溶液。
放入小离心管中，在冰箱中备用。
★由于透析之后溶液本身清亮无沉淀，所以没有进行过滤。
9、含量测定
本实验方法制备的细胞色素C是还原型和氧化型的混合物，因此在测量时，要加入联二硫酸钠，是混合物中的氧化型细胞色素C变为还原型。
还原型细胞色素C水溶液在波长520nm处有最大吸收值。
根据这一特性，用紫外可见分光光度计作出细胞色素C浓度和对应的光吸收值的标准曲线，然后根据所测溶液的光吸收值，由标准曲线的斜率求出所测样品含量。
取所制得的细胞色素C溶液0.5ml加入1.35ml水和0.15ml的联二硫酸钠，放入1cm比色皿中，用分光光度计测量吸光度。
五实验数据
①测量原始数据
加入水的量（ml）
1.35
加入细胞色素C的量（ml）
0.5
加入联二硫酸钠的量（ml）
0.15
总体积（ml）
2.0
520nm下的吸光度
0.495
表3-1
②细胞色素C标准样品的吸光度值和浓度关系
加入细胞色素C溶液的量（ml）
0
0.1
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
加入水的量（ml）
3.0
2.9
2.8
2.6
2.4
2.2
2.0
加入联二硫酸钠的量（ml）
0.1
标准品浓度（mg/ml）
3.3
细胞色素C的浓度（mg/ml）
0
0.106
0.213
0.426
0.639
0.852
1.065
在520nm下的吸光度值
0
0.076
0.160
0.322
0.443
0.616
0.781
表3-2
浓度的计算方法：
因为细胞色素C的标准品浓度为3.3mg/ml
所以C=C0×V0/V
所以C1=0
C2=3.3×0.1/3.1=0.106
C3=3.3×0.2/3.1=0.213
C4=3.3×0.4/3.1=0.426
C5=3.3×0.6/3.1=0.639
C6=3.3×0.8/3.1=0.852
C7=3.3×1.0/3.1=1.065
4准曲线的绘制（横坐标为加入标准细胞色素C的体积）
5
图3-1
④标准曲线的绘制（横坐标为加入标准细胞色素C的浓度）
图3-2
六实验结果
根据图3-2易求出吸光度对应细胞色素C浓度的斜率
K=∑A520/∑C
所以K=0+0.076+0.160+0.322+0.443+0.616+0.781/0+0.106+0.213+0.426+0.639+
0.852+1.065
=2.398/3.301=0.726
因为K=A520/C
所以0.726=0.495/C
所以C=0.682mg/ml
因为取所制得的细胞色素C溶液0.5ml加入1.35ml水和0.15ml的联二硫酸钠
所以所制得的细胞色素C溶液的浓度为C样品=C×V总/V=0.682×2.00/0..5
=2.728mg/ml
七实验分析
⑴实验第三步骤中预留的80ml红色滤液本应和洗脱后的细胞色素C做同样的处理，但是，本组在未用盐析的方法除尽杂蛋白的情况下，不慎直接加入三氯乙酸进行细胞色素C的沉淀。
之后我们尝试用水重新溶解沉淀，并除去杂蛋白再继续进行其他操作，但是没有成功。
所以预留样品我们使用的是别组同学的。
⑵同样的，我们取预留的样品0.5ml加入1.35ml水和0.15ml的联二硫酸钠，放入1cm比色皿中，用分光光度计测量吸光度，结果A520的值为0.045，说明未经过沸石吸附的滤液细胞色素C的浓度是很小的。
实验四溶菌酶的提取和系列性质测定
实验目的：
1了解和掌握研究酶的基本过程。
2掌握溶菌酶的提取方法。
3学习酶性质测定的基本方法。
4熟悉有关生物化学技术的基本原理和基本操作。
Ⅰ溶菌酶的提取
一实验原理
研究酶的性质时需要使用高度纯化的酶制剂避免干扰，然而，酶的提纯工作往往要求多种分离方法交替使用，才能够得到较为满意的效果。
常用的提纯方法有盐析、有机溶液沉淀、选择性变性、离子交换层析、凝胶过滤、亲和层析等等。
酶蛋白在分离提纯过程中容易变性失活，为了获得尽可能高的产率和纯度，在提纯操作中要始终注意保持酶的活性而在低温下操作，这样才能达到很好的分离效果。
溶菌酶是一种碱性蛋白质，并且对温度和酸不敏感，溶菌酶在鸟类的蛋清中含量最丰富，含量大约是0.3%左右。
本实验用鸡蛋作原料，通过离子交换层系，硫酸铵沉淀，分子筛层析等步骤提取溶菌酶。
二实验仪器、材料与试剂
㈠仪器
1、高速冷冻离心机
2、核酸、蛋白检测仪
3、恒流泵
4、部分收集器
5、层析柱（一粗一细两种规格）
6、透析袋等
㈡材料
1、阳离子交换树脂
2、分子筛
3、新鲜鸡蛋3个
实验室中已经准备好的是0.5mol/LpH为7的磷酸缓冲溶液。
4、磷酸氢二钠（Na2HPO4）
5、磷酸二氢钠（NaH2PO4）
6、氯化钠（NaCl）
7、硫酸铵（（NH4）2SO4）
8、氢氧化钠（NaOH）
9、甘油（丙三醇）
10、盐酸（HCl）
㈢试剂以及配制方法
1、0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液，pH7.0
2、0.5mol/LNaOH溶液
3、0.5mol/LHCl溶液
取20ml0.5mol/LpH为7的磷酸缓冲溶液，30ml蒸馏水，50ml甘油混合，摇匀备用即可。
取0.5mol/LpH为7的磷酸缓冲溶液200ml，在1L的容量瓶中定容即可。
4、含50%甘油的0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液，pH7.0
5、含0.05mol/LNaCl的0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液，pH7.0
6、含0.5mol/LNaCl的0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液，pH7.0
200ml0.5mol/LpH为7的磷酸缓冲溶液和25.85g氯化钠，合并定容至1L。
200ml0.5mol/LpH为7的磷酸缓冲溶液和29.25g氯化钠，合并定容至1L。
取200ml0.5mol/LpH为7的磷酸缓冲溶液，称取2.925g氯化钠，合并定容至1L。
7、含0.1mol/LNaCl的0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液，pH7.0
三实验步骤
㈠总体流程
3硫酸铵沉淀
1蛋清样品的准备
2阳离子交换层析
5透析浓缩
㈡具体步骤以及步骤分析
1蛋清样品的准备
也可用3—4层纱布过滤两次，本组使用四层纱布过滤了两次。
2阳离子交换层析
先用水洗过之后，再进行此步骤，无论是用水洗还是用酸和碱浸泡，放入的量一定要少，没过阳离子交换树脂1—2cm即可，否则会很难沉降。
并且一定要等到阳离子树脂全部沉降才能倾倒上层液体。
用水洗后若还不能到达中性，可以适当加入少许酸和碱调至中性。
平衡：
在烧杯中将再生好的用0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液，pH7.0平衡。
阳离子交换树脂的再生：
阳离子交换树脂用0.5mol/LNaOH浸泡30min，再用0.5mol/LHCl浸泡30min，水洗至中性。
装柱之前，检测层析柱是否畅通，并在柱底端先滴入少量0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液，pH7.0，防止柱子底端的膜被阳离子交换树脂堵住，导致液体无法流出来。
在洗杂蛋白的时候，先将0.05mol/LNaCl的0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液，pH7.0加满，待树脂完全沉降下来，再让其流下来，流速保持在1—2滴/s，一定要注意不能流干，在液体距树脂平面还有1—2cm时，加紧架子，用滴管轻轻沿着柱壁再加满缓冲液。
整个过程2—3h。
不要求一定要用100ml磷酸缓冲液洗三遍，只要洗过之后上清液的pH为7.0即可。
装柱洗杂蛋白：
将树脂搅拌均匀装入2.6×30cm（粗规格）的层析柱中再用300—350ml含0.05mol/LNaCl的0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液，pH7.0洗涤杂蛋白。
洗涤：
停止搅拌，待阳离子交换树脂完全沉降下来之后留0.4ml上清液加入等体积的50%甘油冻存备用。
（定为步骤Ⅱ样品）然后倒去其余上清液，树脂用100ml0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液，pH7.0洗涤三遍。
搅拌力度一定要轻，并且要一直持续，不能停止，绝对不能让阳离子交换树脂沉降下来。
吸附：
在已经平衡好的阳离子交换树脂中加入蛋清样品，搅拌1.5小时左右。
（不能用磁力搅拌器）
用滴管慢慢滴加洗脱液，尽量不要让树脂面出现浑浊。
流速保持在1—2s/滴，一旦出现吸收峰，立即收集，最后留下最大吸收峰收集的部分。
（本组只出现一个吸收峰）整个过程大约5h左右。
（具体吸收情况见图4-1）
3硫酸铵沉淀
后面还需要测定指标，可以多留一些，本组取0.10ml备用。
4分子筛层析
缓慢滴加，尽量不要使分子筛界面模糊，放下来的速度保持在6—7s/滴即可，因为速度本身比较慢，可以把夹子完全打开，但是一定不能流干。
将洗脱液加到层析柱顶端再打开夹子开始洗脱，速度还是6—7s/滴。
一定要时刻注意吸光度的变化，因为在某段时间内，数值会急剧上升，此时要立即收集。
同时还要注意上方的洗脱液不要流干。
（吸收峰见图4-2）
5透析浓缩
用含有50%甘油的0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液，pH7.0透析浓缩4个小时，加入等体积的50%甘油冻存备用。
（定为步骤Ⅴ样品）
★将样品装入透析袋，夹紧夹子之后，放在摇床上等待即可。
透析浓缩的另一种方法：
直接使用含有20%—30%的甘油溶液透析，放置摇床一个小时之后，再加入少许甘油，如此做法一到两次即可，总共只是用了两到三个小时，比较节省时间。
Ⅱ酶活力、蛋白浓度的测定
一实验原理
染料考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后，形成蓝色复合物，最大吸光度是595nm，在一定蛋白浓度范围之内，蛋白和染料的结合符合朗伯比尔定律，通过测定595nm处的吸光度值的增加量可对蛋白质浓度进行定量测定。
92.5ml0.2mol/LNa2HPO4溶液和407.5ml0.2mol/LNaH2PO4溶液和1.755NaCl定容至1000ml。
即制成含30mmol/LNaCl的0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液，pH6.2
溶菌酶是一种水解酶，可以以溶壁微球菌为底物，通过测量测量光密度值的变化来测定溶菌酶的活性。
二实验仪器、材料与试剂
㈠仪器
分光光度计
㈡材料
1、所制得的溶菌酶的五种样品
2、溶壁微球菌干粉
3、乙醇
100mg样品干粉溶于100ml测活缓冲液中。
㈢试剂
1、
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