XXXHPLC分析方法的验证方案.docx

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XXXHPLC分析方法的验证方案

ＸXX产品HPLＣ分析方法

确认方案

XXX制药有限公司

确认方案审批表

确认方案名称:

　ＸＸＸ产品HPＬC分析方法确认方案

确认方案编号：

ＫY－ＺL-YZ-ＦF—00４0０

审批

程序

部门

签名

日期

起草

检验室

审核

检验室主任

质量保证部

批准人

质量负责人

目　录

１概述

2确认目的

３　确认范围

4　确认小组成员与职责

5　确认方案的审核与批准

6　进度计划

7　　确认内容

8变更与偏差

9　　确认结果与评价报告

10确认合格证书

１　概述

我公司产品ＸＸX产品采自《中国药典》２０10年版二部,含量及有关物质、A、B、C的检验均使用高效液相色谱仪进行检验，两个检验项目检验参数等条件完全相同,且我公司未对《中国药典》2010年版二部中的方法进行过任何改变,因此按照2010新版ＧＭP要求,需要进行分析方法确认。

本确认方案使用LＣ-２010ＡＨ型高效液相色谱仪对ＸXＸ产品采用《中国药典》20１0年版二部“含量"、“有关物质”及“A、B、Ｃ”的检验方法进行确认,证明此方法在本公司实验室的适用性.根据《药品ＧＭP指南（质量控制实验室与物料系统）》分册要求，“含量”、“有关物质”及“A、B、C"项需确认项目如下：

确认项目

准确度

精密度

专属性

定量限

含量

是

是

是

否

有关物质

否

是

是

是

A、B、C

否

是

是

是

“是”代表该项内容需确认，“否”代表该项内容不需要确认

2确认目的

通过对ＸＸX产品含量及有关物质A、B、C的检验方法的确认，证明此方法在本公司实验室的适用性。

3确认范围

本确认方案适用于XXX产品含量及有关物质A、B、C、的检验方法进行确认。

4确认小组成员与职责

部门及职务

确认工作中职责

检验员

确认执行人:

负责起草确认方案，执行确认方案,负责验

证过程中相关的检验操作，收集整理数据，起草确认报告。

质量保证部

负责确认方案、确认报告审核;审核确认过程中发生偏差的解决方案，以及采取纠正行动。

检验室主任

确认小组组长:

组织确认实施,负责确认方案的审核、组织起草确认报告并审核。

质量负责人

确认总负责人：

负责确认方案、报告的批准

5确认方案的起草与审批

5。

1确认方案的起草与审批:

确认方案由检验室起草，确认小组会审，质量负责人批准实施.

5.2确认方案的培训：

确认方案经批准后,实施前由确认方案的起草部门组织确认方案的参与者进行培训。

5.3确认方案的修改:

确认方案如需修改,由质量负责人批准实施,在确认报告中体现。

６进度计划

整个确认活动实施时间:

确认时间：

从_＿_＿＿年___月_＿日　至_____年__月__　日；

起草报告:

从____＿年＿__月__日　至_____年__　月__　日；

7　确认内容

7.1确认前仪器及材料检查

7．1.1确认前,对下列试验用仪器和材料进行检查

7。

1.1。

1岛津　　　　　　高效液相色谱仪　

７。

1。

１.2TG－332A型分析天平　　　　　　

7．1。

１.３色谱柱：

Ｃ18（4。

6＊250㎜）

7。

1.1．4对照品和试剂：

产品X二醇物对照品、对硝基苯甲醛对照品、产品X对照品、羟苯甲酯对照品、羟苯乙酯对照品、羟苯乙酯对照品、庚烷磺酸钠,乙腈（色谱级），甲醇（色谱级）,磷酸二氢钾、三乙胺、磷酸、蒸馏水

７。

１．1．5其他一些辅助的玻璃仪器（如量瓶、移液管等）

7．1.2可接受标准：

仪器和用具经校验且在效期内;对照品、试液、试剂与试药符合验证要求且在效期内；色谱柱使用状态正常。

７。

1.3结果记录:

将结果记录在附件１《确认前仪器及材料检查表》中。

7.２确认涉及文件检查

7．2。

1确认前，对与此次确认相关的文件进行检查

7.２。

1.1XＸX产品成品检验操作规程（KＹ—ZL－SOＰ－CP－００40０）

7。

２.１．２　　　　　型高效液相色谱系统标准操作及维护保养规程（KY—SB-ＳOP-ＪY—037０0）

7。

２.1.3　　　　　　型高效液相色谱系统维护保养及清洁操作规程（KY—WS－SＯP—ＪＹ—0370０）

7．2。

1．4TG—332A型分析天平标准操作规程（KY-SＢ-ＳOP－JY—０２300）

7.2。

1．5ＴＧ—３32A型分析天平维护保养及清洁标准操作规程（KY－WS—SOＰ—ＪＹ-023０0

7.2．1。

６高效液相色谱法标准操作规程（KY－ＺL—ＳＯP－ZＫ－03300）

7。

2．1．7ＸXX产品HＰLC分析方法的验证方案（KＹ-YZ－ＳＯP-ＪＹ—00400）

7。

2。

1。

8ＸXX产品生产工艺规程（ＫＹ-ＳC-JＢ-GY-004０0）

7.2。

１。

9检验方法验证（确认）管理程序（KY—ZL-SＭP－０5800）

7．2.２可接受标准:

所有文件都应为现行版本,且经过批准.

７．2。

３结果记录:

将结果记录在附件2《确认前文件检查表》中。

７．３人员培训确认

７。

3.1检查并确认所有参与执行确认的人员是否已得到培训,并在培训记录上签字。

7.3．2可接受标准:

验证小组成员均已经过培训,并在培训记录上签字。

7．3.3确认结果:

将确认结果填入附件３《人员培训、参与情况确认记录》中。

7.4确认项目

7．4．1　“含量”项确认

7.4.1。

１重复性/准确度

7.４.１.1.１空白基质的制备：

精密称定硼酸：

１3．1２5g硼砂:

０。

6g玻璃酸钠：

１g羟苯乙酯：

０。

5g按照XXX产品生产工艺规程（ＫY-ＳC—JB—GY-０0４００）配制加注射用水至10０0ml。

7．4．1.1.2对照液制备：

称取产品Ｘ对照品用注射用水配制成１ml含2.5mｇ的溶液，取本品用流动相定量稀释制成每1mｌ中含0.1mｇ的溶液摇匀，作为对照液备用。

对照液平行制备2份，标识为S—1、S—2（浓度为标示量的1０0%）。

７.4。

1．1.3样品制备：

称取产品X对照品用空白基质水溶解后定容，摇匀，备用。

平行制备浓度梯度为标示量8０％、100％、120%的样品各3份，标识为A—1、A—2、A—3、A－4、A－5、A—６、A—７、Ａ－8、A—9。

７。

4。

1．1.4照《高效液相色谱仪标准操作规程》测定。

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相A为0。

０1mol/L庚烷磺酸钠缓冲溶液（取磷酸二氢钾6.８g,用0.01moｌ/L庚烷磺酸钠溶液溶解并稀释至1０00ml，再加三乙胺5ml,混匀，用磷酸调节ＰＨ值至2。

５），流动相B为甲醇;检测波长为277ｎm；按下表进行线性梯度洗脱。

另取产品X对照品、产品X二醇物对照品、对硝基苯甲醛对照品、羟苯甲酯、羟苯乙酯与羟苯丙酯对照品各适量，加甲醇适量（产品X每１0mg加甲醇1ml）使溶解，用流动相定量稀释成每1ｍl中含产品X0。

5mg、产品X二醇物40ug与对硝基苯甲醛3uｇ、羟苯甲酯40uｇ、羟苯乙酯５０ug和羟苯丙酯20ug的混合溶液。

精密吸取该溶液1０µl注入色谱仪,作为系统适用性溶液。

记录色谱图。

各相邻峰间的分离度均应符合要求）（应大于1。

５）。

时间（分钟）

流动相Ａ（％）

流动相B（%）

0

1５

４0

50

60

68

68

35

68

68

3２

32

６5

32

32

7。

4.１。

1。

5测定:

精密量取上述A—1、A-２、A－3、Ａ－4、A－5、A－6、A－7、Ａ-8、A-9溶液用流动相定量稀释制成每1ml中含0.１mg的溶液,摇匀,精密量取10ul，注入液相色谱仪，记录色谱图。

1）取S—1精密量取１0ul，注入液相色谱仪记录色谱图，该溶液连续进样2针。

２）取S－２精密量取1０ｕl,注入液相色谱仪，记录色谱图，该溶液连续进样1针。

３）分别精密量取稀释后的A-1、Ａ-2、A—3、A－4、A－５、Ａ-６、Ａ-7、Ａ-8、A—9溶液各10ul，注入液相色谱仪，记录色谱图.

4）计算Ｓ-1和Ｓ-2的F值，相对标准偏差应≤2.０％，以外标法计算稀释后的A—1、A－2、A-3、A-4、A－５、Ａ-6、Ａ—７、A—8、A－9溶液的含量。

结果计算

含量（cx）＝CR×Ａｘ／AＲ

cｘ－－－---—－　为供试品的浓度；

ＣR-－-—－-－-－为对照品的浓度；

Ax—－－-——-—　为供试品的峰面积；

ＡＲ—－－-—－-－—为对照品的峰面积。

7．4.１。

1.6可接受标准：

稀释后的A-1、A－２、A-３、A－４、A-５、A—6、A－7、A-8、Ａ-９各浓度的含量均应在标示量的±3％，且各浓度样品含量的ＲSD%值应≤２.0％。

７.4.1.1.７确认记录和数据

确认数据和结果记录于附件4《含量精密度/准确度确认数据和结果》中。

7。

4．1。

2专属性

7．4．1。

2.1测试方法：

７．4。

1.2。

1.1取空白基质进样1针,记录色谱图。

７.4．1．2.1.2精密量取样品（用成品即可）用流动相A—Ｂ（68：

３2）定量稀释制成每1ml中含产品X0。

1mｇ的溶液,作为供试品溶液，精密量取10ul，注入液相色谱仪，进样1针，记录色谱图，获得产品X的保留时间。

７.4．1。

2．1。

3取产品X对照品用流动相定量稀释制成每1ml中含产品X0.１ｍg的溶液,作为对照品溶液，注入液相色谱仪，进样1针，记录色谱图,获得产品X的保留时间。

7.4．1.2．1。

4可接受标准：

溶剂空白相应的峰对样品测定有无明显的干扰；供试品图谱中产品X主峰保留时间与对照品图谱中产品X主峰保留时间一致。

7．4。

１。

2．1.５确认记录和数据

确认数据和结果记录于附件5《专属性确认数据和结果》中。

7.4.2“有关物质"及“A、B、C”项确认

7．４.2.1专属性

7。

4.2。

1．1精密量取样品（用成品即可）用流动相Ａ－B（68：

32）定量稀释制成每1ml中含产品Ｘ0.5mｇ的溶液，作为供试品溶液。

7．4。

2。

1.2对照溶液；取产品Ｘ对照品、产品Ｘ二醇物对照品、对硝基苯甲醛对照品、羟苯甲酯、羟苯乙酯与羟苯丙酯对照品各适量,加甲醇适量（产品Ｘ每１０mg加甲醇１ml）使溶解,用流动相定量稀释成每1ｍl中含产品X0.5mg、产品X二醇物４０ug与对硝基苯甲醛3ug、羟苯甲酯40ug、羟苯乙酯50ｕg和羟苯丙酯20ｕg的混合溶液。

作为对照溶液;照含量项下的色谱条件,取对照品溶液10ul，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使产品Ｘ二醇物的峰高约为满量程的64％。

7.4。

2.１．3精密量取供试品溶液与对照品溶液各10ul，分别注入液相色谱仪，进样1针,记录色谱图.

7。

４．2。

１。

４可接受标准：

供试品图谱中产品Ｘ、产品Ｘ二醇物、对硝基苯甲醛、羟苯甲酯、羟苯乙酯和羟苯丙酯各峰的保留时间与系统适用性图谱中相对峰的保留时间一致。

溶剂空白相应位置无峰的干扰。

７.4．2。

1。

5确认记录和数据

确认数据和结果记录于附件5《专属性确认数据和结果》中。

7．4。

2。

2精密度

7．4.２．２.１测试程序

７．４.2.２。

1。

1取含量项下系统适用性溶液作为对照溶液D-1；另按同法制备一份对照品作为对照溶液D—2。

7。

４．2。

2.1．2取样品用含量测定项下的流动相A-B（68：

32）定量稀释制成每1ml中含产品X0.５ｍg的溶液，配制６分平行样品作为供试品溶液分别为B-1~B-6。

7.4.2.２.1。

３D-1进样2针,D-2进样1针，然后B－1~B－6分别进针，记录色谱图。

7．4．2．2。

1．4各相邻峰之间的分离度应≥1。

5

7．4。

2。

2.1．５计算D－1和D—2的F值，相对标准偏差应≤2．0％,