食品中环己基氨基磺酸钠的测定方法.docx

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食品中环己基氨基磺酸钠的测定方法

食品中环己基氨基磺酸钠的测定方法

　　中华人民共和国国家标准GB13112-91

　　食品中环己基氨基磺酸钠的测定方法

　　Methodfordeterminationofsodiumcyclamateinfoods

　　1　主题内容与适用范围

　　本标准规定了食品中环己基氨基磺酸钠的三种测定方法──气相色谱法、比色法、薄层层析法。

　　本标准气相色谱法及比色法适用于饮料、凉果等食品中环己基氨基磺酸钠的测定;薄层层析法适用于饮料、果汁、果酱、糕点中环己基氨基磺酸钠的含量测定，样品中含有/kg环已基氨基磺酸钠即可检出，最低检出量为3～4μg环己基氨基磺酸钠。

　　第一篇　气相色谱法

　　2　原理＿

　　在硫酸介质中环己基氨基磺酸钠与亚硝酸反应，生成环己醇亚硝酸酯（〈　〉-ONO），利用气相色谱法进行定性和定量。

　　3　试剂

　　本标准所用试剂，凡未指明规格者，均为分析纯（AR），水为蒸馏水。

　　　正己烷。

　　　氯化钠。

　　　层析硅胶。

　　50g/L亚硝酸钠溶液。

　　100g/L硫酸溶液。

　　　环己基氨基磺酸钠标准溶液：

精确称取环己基氨基磺酸钠，加水溶解并定容至100mL，此溶液每毫升含环己基氨基磺酸钠10mg。

　　4　仪器

　　　气相色谱仪附氢火焰离子化检测器。

　　　旋涡混合器。

　　　离心机。

　　10μL微量注射器。

　　　色谱条件

　　　色谱柱：

长2m，内径3mm,U形不锈钢柱。

　　　固定相：

ChromosorbWAWDMCS80～100目，涂以10％SE-30。

　　　测定条件

　　柱温：

80℃；汽化温度：

150℃；检测温度：

150℃。

流速：

氮气40mL/min；氢气30mL/min；空气300mL/min。

　　5　样品处理

　　　液体样品：

摇匀后直接称取。

含二氧化碳的样品先加热除去，含酒精的样品加40g/L氢氧化钠溶液调至碱性，于沸水浴中加热除去，制成试样。

　　　固体样品：

凉果、蜜饯类样品将其剪碎制成试样。

　　6　分析步骤

　　　试料制备

　　　液体试样：

称取试样于100mL带塞比色管，置冰浴中。

　　　固体试样：

称取已剪碎的试样于研钵中，加少许层析硅胶研磨至呈干粉状，经漏斗倒入100mL容量瓶中，加水冲洗研钵，并将洗液一并转移压容量瓶中，加水至刻度，不时摇动，1h后过滤，即得试料，准确吸取20mL于100mL带塞比色管，置冰浴中。

　　　测定

　　　标准曲线的制备，准确吸取mL环己基氨基磺酸钠标准溶液于100mL带塞比色管中，加水20mL，置冰浴中，加入5mL50g/L亚硝酸钠溶液，5mL100g/L硫酸溶液,摇匀,在冰浴中放置30min，并经常摇动，然后准确加入10mL正己烷，5g氯化钠，摇匀后置旋涡混合器上振动1min，待静止分层后吸出己烷层于10mL带塞离心管中进行离心分离，每毫升已烷提取液相当1mg环己基氨基磺酸钠，将标准提取液进样1～5μL于气相色谱仪中，根据响应值绘制标准曲线。

　　　样品管按自”加入5mL50g/L亚硝酸钠溶液……”起依法操作，然后将试料同样进样1～5μL，测得响应值，从标准线图中查出相应含量。

　　7　计算

　　A×10×1000　　10A

　　X=────────=───..................

（1）

　　　m×V×1000　　　mV

　　式中：

X──样品中环己基氨基磺酸钠的含量，g/kg；

　　　m──样品质量,g；

　　　V──进样体积，μL；

　　10──正己烷加入量，mL；

　　　A──测定用试料中环己基氨基硝酸钠的含量，μg。

　　8　精密度和允许误差

　　重复测定变异系数<7％。

　　两次平行测定相对允许误差绝对值≤10％，平行测定结果用算术平均值表示，保留二位小数。

　　第二篇　比色法

　　9　原理

　　在硫胺介质中环己基氨基磺酸钠与亚硝酸钠反应，生成环己醇亚硝酸酯，与磺胺重氮化后再与盐酸萘乙二胺偶合生成红色染料，在550nm波长测其吸光度，与标准比较定量。

　　10试剂

　　　三氯甲烷。

　　　甲醇。

　　透析剂：

称取二氯化汞和氯化钠于烧杯中,以mol/L盐酸溶液定容至100mL。

　　10g/L亚硝酸钠溶液。

　　100g/L硫酸溶液。

　　　100g/L尿素溶液。

　　100g/L盐酸溶液。

　　10g/L磺胺溶液：

称取1g磺胺溶于10％盐酸溶液中，最后定容至100mL。

　　109　1g/L盐胺萘乙二胺溶液。

　　环己基氨基磺酸钠标准溶液：

精确称取环己基氨基磺酸钠，加水溶解，最后定容至100mL，此溶液每毫升含环己基氨基磺酸钠1mg。

　　　临用时将环己基氨基磺酸钠标准溶液稀释10倍。

此液每毫升含环己基氨基磺酸钠。

　　11仪器

　　　分光光度计。

　　　旋涡混合器。

　　　离心机。

　　　透析纸。

　　12试样处理

　　　同第5章。

　　13分析步骤

　　　提取

　　　液体试料：

称取试料于透析纸中，加10mL透析剂，将透析纸口扎紧，放入盛有100mL水的200mL广口瓶内，加盖，透析20～24h得透析液。

　　　固体试料：

准确吸取经”“处理后的试料提取液于透析纸中，以下操作按”“项下进行。

　　　测定

　　　取2支50mL带塞比色管，分别加入10mL透析液和10mL标准液，于0～3℃冰浴中，加入1mL10g/L亚硝酸钠溶液，1mL100g/L硫酸溶液，摇匀后放入冰水中不时摇动，放置1h，取出后加15mL三氯甲烷，置旋涡混合器上振动1min，静置后吸去上层液，再加15mL水，振动1min，静止后吸去上层液，加10mL100g/L尿素溶液，2mL100g/L盐酸溶液，再振动5min，静置后吸去上层液，加15mL水，振动1min，静置后吸去上层液，分别准确吸出5mL三氯甲烷于2支25mL比色管中。

另取一支25mL比色管加入5mL三氯甲烷作参比管。

　　于各管中加入15mL甲醇，1mL10g/L磺胺，置冰水中15min，取出回复常温后加入1mL1g/L盐酸萘乙二胺溶液，加甲醇至刻度，在15～30℃下放置20～30min，用1cm比色杯于波长550nm处测定吸光度，测得吸光度A及As。

　　　另取2支50mL带塞比色管，分别加入10mL水和10mL透析液，除不加10g/L亚硝酸钠外，其他按”“项下进行，测得吸光度Aso及Ao。

　　14　计算

　　c　　A-Ao　　100+10　　1　　1000

　　X=─×────×────×───×───.................

（2）

　　m　　As-Aso　　V　　　1000　　1000

　　式中：

X──样品中环己基氨基磺酸钠的含量，g/kg；

　　　m──样品质量，g；

　　　V──透析液用量，mL;

　　　c──标准管浓度，μg/mL；

　　As──标准液吸光度;

　　Aso──水的吸光度；

　　　A──试料透析液吸光度；

　　Ao──不加亚硝酸钠的试料透析液吸光度。

　　15精密度和允许误差

　　重复测定变异系数＜10％。

　　两次平行测定相对允许误差绝对值≤10％，平行测定结果用算术平均值表示，保留二位小数。

　　　第三篇　薄层层析法

　　16原理

　　样品经酸化后，用乙醚提取，将样品提取液浓缩，点于聚酰胺薄层板上，展开，经显色后，根据薄层板上环己基氨基磺酸的比移值及显色斑点深浅，与标准比较进行定性、概略定量。

　　17试剂

　　除另有规定外，所用的试剂为分析纯试剂，水为蒸馏水或同等纯度水。

　　　异丙醇。

　　正丁醇。

　　　石油醚：

沸程30～60℃。

　　　乙醚。

　　　氢氧化胺。

　　　无水乙醇。

　　　氯化钠。

　　　硫酸钠。

　　　c（HCl）＝6mol/L盐酸:

取50mL，盐酸加到少量水中，再用水稀释至100mL。

　　聚酰胺粉：

200目。

　　环己基氨基磺酸标准溶液：

精密称取环己基氨基磺酸，用少量无水乙醇溶解后移入10mL容量瓶中，并稀释到刻度，此溶液每毫升相当于2mg环己基氨基磺酸，二周后重新配制。

　　展开剂

　　　正丁醇-浓氨水-无水乙醇。

　　　异丙醇-浓氨水-无水乙醇。

　　显色剂：

称取溴甲酚紫溶于100mL50％乙醇溶液，用％氢氧化钠溶液调至pH8。

　　18仪器

　　　吹风机。

　　　层析缸。

　　　玻璃板：

5cm×20cm。

　　　微量注射器：

10μL。

　　　玻璃喷雾器。

　　19分析步骤

　　　样品提取

　　　饮料、果酱：

称取已经混合均匀的样品,置于25ml带塞量筒中，加氯化钠至饱和，加c（HCl）＝6mol/L盐酸酸化,用15、10mL乙醚提取两次，每次振摇1min，静止分层，用滴管将上层乙醚提取液通过无水硫酸钠滤入25mL容量瓶中，用少量乙醚洗无水硫酸钠，加乙醚至刻度，混匀。

吸取mL乙醚提取液分两次置于10mL带塞离心管中，在约40℃水浴上挥发至干，加入无水乙醇溶解残渣，备用。

　　　糕点：

称液糕点样品，研碎，置于25mL带塞量筒中，用石油醚提取3次，每次20mL，每次振摇3min，弃去石油醚，让样品挥干后，加入c＝6mol/L盐酸酸化，再加约1g氯化钠，以下按自”用15、10mL乙醚提取2次……”起依法操作。

　　　测定

　　　聚酰胺粉板的制备：

称取4g聚酸胺粉，加可溶性淀粉，加约14mL水研磨均匀合适为止，立即倒入涂布器内制成面积为5cm×20cm，厚度为的薄层板6块，室温干燥后