微生物限度检查法.docx
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微生物限度检查法
微生物限度检查法
信息来源：
中国药典2000年版二部附录 更新时间：
2006-12-100:
26:
42
标题
微生物限度检查法
附录序号
附录ⅩⅢ
内容全文
C.微生物限度检查法
微生物限度检查法系指非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的一种检查方法。
包括染菌量及控制菌的检查。
供试品应随机抽样。
如遇有异常或可疑的样品，须选取有疑义的样品。
一般抽样量为检验用量（2个以上最小包装单位）的3倍量。
供试品在检验前不得开启，在检查前及检查中应防止供试品污染菌受损、致死或繁殖。
凡能从药品、瓶口（外盖内侧及瓶口周围）外观看出发霉、变质的药品，可直接判为不合格，无需再抽样检查。
检查的全部过程均应严格遵守无菌操作，严防再污染。
除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为30～35℃，霉菌、酵母菌培养温度为25℃～28℃，控制菌培养温度为36±1℃。
细菌、霉菌（酵母菌）计数和控制菌检查，均应作对照试验。
检验结果的报告以1g、1ml或10cm<2>为单位。
培养基及其制备方法：
1、营养琼脂培养基与营养肉汤培养基
见无菌检查法（附录ⅩⅢＢ）
2、虎红琼脂培养基
胨
5g
虎红（四氯四碘荧光素）
0.0133g
葡萄糖
10g
（或0.133％虎红溶液10ml）
磷酸二氢钾（KH2PO4）
1g
琼脂
15～20g
硫酸镁（MgSO4.7H2O）
0.5g
水
1000ml
除葡萄糖、虎红外，取上述成分，混合，加热溶化后，滤过，加入葡萄糖、虎红，分装，115℃灭菌30分钟。
3、酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基（YPD）
胨
10g
琼脂
15～20g
酵母浸出粉
5g
水
1000ml
葡萄糖
20g
除葡萄糖外，取上述成分，混合，加热融化后，滤过，加入葡萄糖，分装，115℃灭菌15分钟。
4、胆盐乳糖培养基（BL）
胨
20g
牛胆盐
1.3g
乳糖
5g
（或去氧胆酸钠0.25g）
氯化钠
5g
水
100ml
磷酸氢二钾（K2HPO4）
4.0g
磷酸二氢钾（KH2PO4）
1.3g
除乳糖、牛胆盐外，取上述成分,混合,加热使溶解,调节pH值使灭菌后为7.4±0.2,煮沸，滤清，加入乳糖、牛胆盐，分装，115℃灭菌30分钟。
5、曙红美亚甲蓝琼脂培养基（EMB）
营养琼脂培养基
100ml
2％曙红溶液
2ml
20％乳糖溶液 5ml
0.5％亚甲蓝溶液
1.3～1.6ml
取营养琼脂培养基，加热融化后，冷至60℃,按无菌操作加入灭菌的其它三种溶液,摇匀，倾注平皿。
6、麦康凯琼脂培养基（MaCC）
胨
20g
1％中性红溶液
2.5ml
乳糖
10g
琼脂
15～20g
牛胆盐
5g
水
1000ml
氯化钠
5g
除乳糖、1％中性红溶液、牛胆盐及琼脂外、取上述成分,混合，加热使溶解，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，加入琼脂，加热融化后，再加入其余各成分，摇匀，分装，115℃灭菌30分钟，冷至约60℃，倾注平皿。
7、三糖铁琼脂培养基（TSI）
胨
20g
硫酸亚铁
0.2g
牛肉浸出粉
5g
硫代硫酸钠
0.2g
乳糖
10g
0.2％酚红溶液
12.5ml
蔗糖
10g
琼脂
12～15g
葡萄糖
1g
水
1000ml
氯化钠
5g
除三糖、0.2％酚红溶液、琼脂外，取上述成分，混合，加热使溶解,调节pH值使灭菌后为7.3±0.1，加入琼脂，加热融化后，滤过，再加入其余成分，摇匀，分装,115℃灭菌30分钟，制成高底层（2～3cm）短斜面。
8、四硫磺酸钠亮绿增菌液（TTB）
胨
5g
硫代硫酸钠
30g
牛胆盐
1g
水
1000ml
碳酸钙10g
取上述成分，混合，微温使溶解，121℃灭菌20分钟。
临用前，取上述培养基，每10ml中加入碘溶液（取碘6g与碘化钾5g，溶于20ml水中）0.2ml和0.1％亮绿溶液0.1ml，混匀。
9、沙门氏、志贺氏菌属琼脂培养基（SS）
胨
5g
硫代硫酸钠
8.5g
牛肉浸出粉
5g 1％中性红溶液
2.5ml
乳糖
10g 0.1％亮绿溶液
0.33ml
牛胆盐
8.5g 琼脂
20g
枸橼酚钠
8.5g
水
1000ml
枸橼酸铁铵
1g
除糖、指示剂、琼脂外，取上述成分混合，加热使溶解，调节pH值使灭菌后为7.2±0.1，滤过，加入琼脂，加热融化后，121℃灭菌20分钟，再加入其余成分，摇匀，冷至约60℃，倾注平皿。
10、胆盐硫乳琼脂培养基（DHL）
胨
20g
枸橼酸钠
1g
牛肉浸出粉
3g
枸橼酸铁铵
1g
乳糖
10g
1％中性红溶液
3ml
蔗糖
10g
琼脂
18～20g
去氧胆酸钠
1g
水
1000ml
硫代硫酸钠
2.3g
除糖、1％中性红溶液及琼脂外,取上述成分混合，微温使溶解，调节pH值使灭菌后为7.2±0.1，加入琼脂,加热融化后,再加入其余成分，摇匀，冷至约60℃，倾注平皿。
11、十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基
胨
10g
牛肉浸出粉3g
氯化钠
5g
琼脂
15～20g
十六烷三甲基溴化铵0.3g
水
1000ml
除琼脂外，取上述成分混合，微温使溶解，调节pH值使灭菌后为7.5±0.1，加入琼脂，加热熔化后，分装，121℃灭菌20分钟，冷至约60℃，倾注平皿。
12、亚碲酸盐肉汤培养基
临用前，取灭菌的营养肉汤培养基，每100ml中加入新配制的1％亚碲酸钠（钾）溶液0.2ml，混匀，即得。
13、卵黄高盐琼脂培养基
胨
6g
10％氯化钠卵黄液100ml
牛肉浸出粉1.8g
琼脂
23g
氯化钠
30g
水
650ml
除10％氯化钠卵黄液外，取上述成分混合，微温使溶解,调节pH值使灭菌后为7.6±0.1。
121℃灭菌20分钟，待冷至约60℃，以无菌操作加入10％氯化钠卵黄液,充分摇匀,倾注平皿。
10％氯化钠卵黄液的制备
取新鲜鸡蛋一个，以无菌操作取出卵黄，放入10％灭菌氯化钠溶液100ml中，充分振摇，即得。
14、甘露醇高盐琼脂培养基
胨
10g
1％酚红溶液
2.5ml
牛肉浸出粉1g
琼脂
15～20g
甘露醇
10g
水
1000ml
氯化钠
75g
除甘露醇、1％酚红溶液及琼脂外,取上述成分混合，微温使溶解，调节pH值使灭菌后为7.4±0.2，加入琼脂，加热融化后，滤过，分装，115℃灭菌30分钟，冷至约60℃,倾注平皿。
15、蛋白胨水培养基
胰蛋白胨
10g
水1000ml
氯化钠
5g
取上述成分混合，加热融化，调节pH值使灭菌后为7.3±0.1，分装于小试管中,121℃灭菌20分钟。
16、磷酸盐葡萄糖胨水培养基
胨
7g
葡萄糖5g
磷酸氢二钾（K2HPO4）3.8g
水1000ml
取上述成分混合，微温使溶解，调节pH值使灭菌后为7.3±0.1，分装于小试管中，121℃灭菌15分钟。
17、枸橼酸盐培养基
氯化钠
5g
枸橼酸钠（无水）
2g
硫酸镁（MgSO4·7H2O）
0.2g
溴麝香草酚蓝指示液20ml
磷酸氢二钾（K2HPO4）
0.8g
琼脂
15～20g
磷酸二氢铵（NH4H2PO4）
1g
水
1000ml
除溴麝香草酚蓝和琼脂外，取上述成分，混微温使溶解,调节pH值使灭菌后为6.9±0.1，加入琼脂，加热融化，加入指示剂混匀。
分装于小试管中，121℃灭菌15分钟，置成斜面。
注：
所用琼脂应不含游离糖，用前用水浸泡冲洗。
18、糖、醇发酵培养基
基础液
胨
10g
0.5％酸性复红指示剂10ml
糖、醇0.5％
（或溴麝香草酚蓝指示液6ml）
氯化钠
5g
水
1000ml
取胨和氯化钠加入水中，微温使溶解，调节pH值使灭菌后为7.4,加入指示剂混匀,分装每瓶100ml，121℃灭菌15分钟。
配制葡萄糖发酵管时，于100ml基础液中加入0.5g葡萄糖,分装于含杜氏管（Durham）的小试管中。
121℃灭菌15分钟,配制其它糖醇发酵管时,将各种糖醇分别配成10％溶液,与基础液同时于121℃灭菌15分钟。
以无菌操作将5ml糖醇溶液加入100ml基础液内,分装于灭菌小试管中。
注：
糖醇溶液亦可采用薄膜过滤法除菌。
19、5％乳糖发酵管
胨
0.2g
乳糖
5g
氯化钠
0.3g
溴麝香草酚蓝指示液
0.6ml
磷酸氢二钠（Na2·HPO4·12H2O）
0.2g
水
1000ml
除乳糖和指示剂外，取上述成分，混合，微温使溶解，调节pH值使灭菌后为7.4,加入乳糖及指示剂，混匀，分装于含杜氏管的灭菌小试管中，115℃灭菌15分钟。
20、尿素琼脂培养基
胨
1g
葡萄糖
1g
氯化钠
5g
20％尿素溶液1000ml
磷酸二氢钾（KH2PO4）2g
琼脂
20g
0.2％酚红溶液
6ml
水
1000ml
除尿素和琼脂外，取上述成分，混合，调节pH值使灭菌后为7.2±0.1，加入琼脂，加热溶化并分装于锥形瓶，121℃灭菌20分钟。
冷至50～55℃,加入经薄膜过滤除菌的尿素溶液，混匀。
尿素的最终浓度为2％，分装于灭菌试管中，置成斜面。
21、氰化钾培养基
胨
3g
磷酸氢二钠（Na2HPO4）5.64g
氯化钠
5g
氰化钾试液
磷酸二氢钾（KH2PO4）0.225g
水
1000ml
除氰化钾试液外，取上述成分，混合,调节pH值使灭菌后为7.5±0.1，121℃灭菌20分钟，冷却后，每100ml培养基中加入氰化钾试液1.5ml,分装于12×100mm灭菌试管内，每管4ml，立即用灭菌橡皮塞塞紧，置4℃保存。
同时，以不加氰化钾试液的培养基作为对照培养基，分装于灭菌试管中。
22、赖氨酸脱羧酶试验培养基
胨
5g
1.6％溴甲酚紫乙醇溶液
1ml
酵母浸出粉3g
L-赖氨酸（DL-赖氨酸）0.5（1g）/100ml
葡萄糖
1g
水
1000ml
除赖氨酸外，取上述成分，混
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