治带片中苦参碱及氧化苦参碱的HPLC法测定.docx

治带片中苦参碱及氧化苦参碱的HPLC法测定.docx

《治带片中苦参碱及氧化苦参碱的HPLC法测定.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《治带片中苦参碱及氧化苦参碱的HPLC法测定.docx（4页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

治带片中苦参碱及氧化苦参碱的HPLC法测定

治带片中苦参碱及氧化苦参碱的HPLC法测定

【摘要】目的建立治带片中苦参碱及氧化苦参碱的高效液相色谱（HPLC）测定方法。

方法色谱柱：

LichrospherNH2（×250mm，5μm），C18保护柱；流动相：

乙腈无水乙醇/L磷酸水溶液（80∶10∶10）；检测波长212nm；流速/min；柱温：

室温；进样量20μL。

结果苦参碱和氧化苦参碱线性范围均为μg/mL，回归方程苦参碱为：

C=×10-4A+，r=；氧化苦参碱为：

C=×10-4A+，r=，平均回收率分别为%和%，RSD分别为%和%。

结论本法简便快捷，结果准确，可用于该制剂的质量控制。

【关键词】治带片；苦参碱；氧化苦参碱；高效液相色谱

　　DeterminationofAlkaloidsinZhidaipianTablets　byhighperformanceliquidchromatogram

　　ABSTRACT:

ObjectiveToestablishamethodofhighperformanceliquidchromatogram（HPLC）formeasuringmatrineandoxymatrineinZhidaipianTablets.MethodsALichrospherNH2column（×250mm,5μm）wasusedwithamobilephaseconsistingofacetonitrileethanol/Lphosphoricacid（80∶10∶10）,andinaflowrateof/min.Thedetectivewavelengthwas212nm.Columntemperaturewasroomtemperatureandtheinjectionquantitywas20μL.ResultsThesampleswerewellseparated.Thelinearrangewasthesameforthetarget（μg/mL）.ThelinearequationsformatrinewasC=×10-4A+,thecorrelationcoefficientwas,andforoxymatrinewasC=×10-4A+,whilethecorrelationcoefficientwas,respectively.Themeanrecoveryratewere%and%,respectively.RSDwas%and%,respectively（n=6）.ConclusionThemethodissimple,reliable,accurateandcanbeusedtothequalitycontroloftheZhidaipianTablets.

　　KEYWORDS:

Zhidaipiantablets;matrine;oxymatrine;highperformanceliquidchromatogram

　　治带片处方由墓头回、苦参、金樱子、知母（盐炒）、苍术（炒）等组成。

清利湿热，止带。

用于湿热下注，赤带，白带，黄带等症。

方中苦参为君药，其有效成分是苦参碱和氧化苦参碱。

为有效控制药品质量,对制剂中的苦参碱和氧化苦参碱采用高效液相色谱（HPLC）法进行含量测定。

　　1材料与方法

　　仪器与试药日本岛津LC10AT高效液相色谱输液泵，SPD10AVP紫外可见检测器，岛津7725i进样器，ANASTAR色谱工作站，DL360超声波清洗器（浙江象山县石浦海天电子仪器厂，功率240W，频率35kHz），乙腈、无水乙醇为色谱纯，其他试剂为分析纯。

苦参碱和氧化苦参碱对照品由中国药品生物制品检定所提供（编号分别为110805200306和0780200004），供含量测定用。

治带片由西安阿房宫制药有限公司提供（批号20030611-20030613）。

　　对照品溶液的配制精密称取苦参碱、氧化苦参碱对照品适量，用乙腈无水乙醇（8∶1）溶解，分别制成/mL溶液作为苦参碱、氧化苦参碱对照品储备液。

　　供试品溶液的制备取治带片2片，研细，称，于100mL磨口锥形瓶中，加入20mL氯仿及浓氨液，密塞，称定重量。

超声处理30min，放冷，用氯仿补足失去的重量，摇匀、过滤，取续滤液5mL，通过中性氧化铝柱（100-200目5g，装前于高温电炉400℃处理2h，冷却后装于内径1cm层析柱中）。

依次用氯仿、氯仿甲醇（7∶3）各20mL洗脱，合并洗脱液，挥去并赶尽溶剂，残渣用乙腈无水乙醇（8∶1）溶解并定容至，测定时再用乙腈无水乙醇（8∶1）稀释5倍并过μm微孔滤膜，取续滤液测定。

　　阴性对照溶液的制备依处方工艺制成不含苦参药材的片剂，再按方法制成阴性对照溶液。

　　2结果

　　色谱条件色谱柱LichrospherC18（×250mm，5μm），C18保护柱（部件号：

011200002）；流动相为乙腈无水乙醇/L磷酸水溶液（80∶10∶10），使用前经μm微孔滤膜过滤并脱气；检测波长212nm；流速/min；柱温：

室温；进样量20μL。

在此条件下，对照品、供试品及阴性对照溶液的色谱图如图1所示。

　　图1治带片HPLC色谱图（横坐标为时间：

min）

　　HPLCgraphsofmatrineandoxymatrineinZhidaipianTablets

　　a:

Standard;b:

Sample;c:

Blank;1:

Matrine;2:

Oxymatrine

　　线性关系考察用乙腈无水乙醇（8∶1）稀释为分别含10μg/mL的苦参碱和氧化苦参碱的对照品溶液，制成含、、、、、μg/mL苦参碱和氧化苦参碱的对照品溶液，进样，测定。

以峰面积A对对照品溶液的浓度C作曲线，进行线性回归，回归方程苦参碱为：

C=×10-4A+，r=；氧化苦参碱为：

C=×10-4A+，r=。

说明苦参碱和氧化苦参碱质量浓度在μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。

　　供试品溶液制备方法的考察实验采用正交法对氯仿体积、超声时间、氧化铝重量等影响因素进行了考察。

　　因素水平A氯仿体积（mL）：

A1=10，A2=20，A3=30。

B超声时间（min）：

B1=15，B2=30，B3=45。

C氧化铝重量（g）：

C1=3，C2=4，C3=5。

　　实验方法及结果精密称取研细的同批号相同重量供试品于100mL磨口锥形瓶中，分别按L9（34）正交表（表1）进行试验，测定苦参碱峰面积（ofmatrine）和氧化苦参碱峰面积（ofoxymatrine），用统计软件进行分析处理，结果见表2-4。

　　供试品溶液制备条件的优化上述实验结果表明，对苦参碱而言，因素A、C对实验结果均无显着性影响（），B对结果有显着性影响（），B1与B2、B3间有显着性差异（），B2、B3间无显着性差异（）；对氧化苦参碱而言，因素A、B、C对实验结果均无显着性影响（）。

考虑到实验操作便易等因素，供试品溶液最佳提取工艺为A2B2C3。

　　表1苦参碱和氧化苦参碱提取方法正交试验L9（34）表

　　Table1Theresultsoforthogonaltestforextractiontechnologyofmatrineandoxymatrine

　　表2苦参碱提取方法多因素方差分析

　　Table2Testsofbetweensubjectseffectsforextractiontechnologyofmatrine

　　表3苦参碱不同超声时间提取的方差分析表

　　Table3Multiplecomparisonsofdifferentultrasonicextractingtimesofmatrine

　　表4氧化苦参碱提取方法多因素方差分析

　　Table4Testsofbetweensubjectseffectsforextractiontechnologyofoxymatrine

　　精密度试验按方法制备一份样品，重复进样5次，每次20μL，按色谱条件测定峰面积，结果苦参碱、氧化苦参碱峰面积积分值的RSD分别为%和%。

　　稳定性试验按方法制备一份样品，分别于0、2、4、6、8h精密吸取20μL，按色谱条件测定，记录峰面积积分值，结果苦参碱、氧化苦参碱峰面积积分值的RSD分别为%和%，表明供试品溶液在8h内稳定。

　　重复性试验取同批样品5份，按方法制备供试品并按色谱条件测定，结果苦参碱、氧化苦参碱质量分数的RSD分别为%、%。

　　回收率试验采用加标回收法。

取已知含量的同批样品数片，研钵中研细，称重6份，分别精密加入苦参碱和氧化苦参碱对照品，按方法制备样品并按色谱条件测定。

结果苦参碱和氧化苦参碱的平均回收率分别为%和%，RSD分别为%和%（表5），表明回收率良好。

　　表5治带片中苦参碱和氧化苦参碱回收率试验结果

　　Table5ResultsofrecoverytestformatrineandoxymatrineinZhidaipiantablets

　　样品测定按方法及方法分别测定不同生产批号的三批样品，结果三批样品含苦参碱和氧化苦参碱总量在/g之间。

按每片计，每片含苦参碱和氧化苦参碱总量在之间。

　　3讨论

　　苦参中苦参碱的含量测定药典以薄层扫描法测定[1]。

本文参照文献[25]，在碱性条件下，用氯仿提取苦参碱后，过中性氧化铝柱以消除其他干扰成分，并比较了不同氧化铝的处理方法对消除干扰成分的效果，试验证明，氧化铝在400℃高温电炉里处理2h后，效果更好。

应用HPLC，以LichrospherNH2柱（×250mm）为固定相，乙腈无水乙醇磷酸水溶液为流动相，同时测定苦参碱和氧化苦参碱含量。

通过正交L9（34）试验对氯仿体积、超声时间、氧化铝重量等影响苦参碱和氧化苦参碱提取的因素进行了考察，为测定治带片中苦参碱和氧化苦参碱的含量提供了一个可靠的方法。

【参考文献】

　　[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].2000版一部.北京：

化学工业出版社,2000:

161.

　　陈发奎.常用中草药有效成分含量测定[M].北京：

人民卫生出版社,1997:

390395.

　　邹桂欣，尤献民，姜鸿，等.龙参颗粒的质量标准研究[J].中国中医药信息杂志,2003,10（5）:

3536.

　　马长华，曹天海.HPLC法测定山豆根中苦参碱和氧化苦参碱的含量[J].药物分析杂志,2000,20（6）:

408410.

　　苏静州，刘明言，董海荣.HPLC法测定复方石韦片中苦参碱和氧化苦参碱的含量[J].中草药,2005,36（3）:

383384.

　　贾敏鸽，孙文基.苦参及其复方中苦参碱与氧化苦参碱的转化研究[J].药物分析杂志,2003,23

（2）:

9094.