推荐下载关于商品肉豆蔻药材的指纹图谱研究.docx
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关于商品肉豆蔻药材的指纹图谱研究
【编者按】：
医药论文是科技论文的一种是用来进行医药科学研究和描述研究成果
的论说性文章。
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求，解决您在论文写作中的难题。
关于商品肉豆蔻药材的指纹图谱研究
作者：
袁子民,贾天柱,张艳秋,祖凤英
【摘要】目的建立商品肉豆蔻药材甲醇提取液的指纹图谱分析方法,以考察不同地
区市售肉豆蔻药材质量的均一性。
方法采用高效液相色谱法,色谱柱为ZORBAX
EclipseXDB-C18（4.6mm150mm,5流动相：
甲醇-乙腈-水（25∶35∶40）,流速1mL/min,
柱温：
30℃;检测波长：
270nm。
以去氢二异丁香酚为参照物。
结果建立了肉豆蔻药
材的指纹图谱,共有17个共有峰,指纹图谱相似度均在0.9以上。
结论不同地区市售的
商品肉豆蔻药材无差异性,该法准确、可靠,为肉豆蔻药材的质量控制提供了科学依据。
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【关键词】肉豆蔻;去氢二异丁香酚;指纹图谱;高效液相色谱法
Keywords：
nutmeg;dehydrodiisoeugenol;fingerprint;HPLC
肉豆蔻为肉豆蔻植物肉豆蔻Myristicafragranshoutt.的干燥种仁[1]。
由于受到产地来
源、贮存时间不详、质量控制标准较低等原因影响,因此,肉豆蔻药材内在质量的稳定、
均一、可控研究尤为重要。
本试验采用高效液相色谱法（HPLC）,以不同地区商品肉豆蔻
药材为研究对象,建立其甲醇提取液的指纹图谱分析方法,该法简便、灵敏、准确,为肉豆
蔻药材的质量标准研究提供了科学依据。
1材料
1.1仪器
Agilent1100高效液相色谱仪（chemistationsystem工作站）。
1.2试药
2
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去氢二异丁香酚对照品[2],沈阳药科大学提供,经高效液相色谱法面积归一化法测定,
纯度98.0%;肉豆蔻药材购于不同地区,经鉴定为肉豆蔻科植物肉豆蔻（Mysticafragrans
Houtt.）的干燥种仁,肉豆蔻对照药材购于中国药品生物制品检定所,批号120926-
200304。
甲醇、乙腈为色谱纯,水为重蒸水。
1.3数据处理软件
国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004）
A版（中南大学设计）。
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱为ZORBAXEclipseXDB-C18（4.6mm150mm,5流动相：
甲醇-乙腈-水（25∶
35∶40）,流速1.0mL/min;柱温：
30℃;检测波长：
270nm。
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2.2参照物溶液的制备
精密称取去氢二异丁香酚对照品适量,加甲醇制成每1mL含去氢二异丁香酚0.10mg
的溶液,即得。
2.3供试品溶液的制备
取肉豆蔻粉末（过40目筛）0.5g,精密称定,置具塞三角瓶中,精密加入甲醇25mL,称定
重量,超声处理30min,取出,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤
液过0.45m滤膜,即得供试品溶液。
2.4检测方法
tips:
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【编者按】：
医药论文是科技论文的一种是用来进行医药科学研究和描述研究成果
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HPLC法测定藤黄中藤黄酸和新藤黄酸含量
作者：
周安,李庆林,彭代银,吴鸿飞,范琪,王效山
【摘要】目的建立藤黄中藤黄酸和新藤黄酸的含量测定方法。
方法采用反相高效
液相色谱法,色谱柱为HypersilODSC18（4.6mm250mm,5流动相：
甲醇-0.1%冰醋酸水
溶液（93∶7）,流速1.0mL/min;检测波长为360nm,外标法定量。
结果藤黄酸线性范围为
2.45～49g,回归方程Y=11334.8+232781X（r=0.9999,n=5）,平均回收率
99.3%,RSD=1.02%（n=6）;新藤黄酸线性范围为2.55～51g,回归方程Y=75197.5+226
301X（r=0.9997,n=5）,平均回收率100.5%,RSD=1.48%（n=6）。
结论本法精密度高,重复性
好,简便、可靠,可作为藤黄的质量控制方法。
【关键词】高效液相色谱法;藤黄;藤黄酸;新藤黄酸;含量测定
Keywords：
HPLC;Gamboge;Gambogicacid;Gambogenicacid;Contentdetermination
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藤黄系藤黄科植物藤黄GarciniahanburyiHook.f.所分泌出的干燥树脂,性寒,味酸、
辛、涩,有毒,具破血散结、解毒、止血、杀虫之功效,用于治疗瘰疠、痈疽、疖肿等顽
疾。
近20年来研究发现,藤黄酸、新藤黄酸具有显著的抗肿瘤活性,医药工作者对其尤
为重视。
国内外特别是我国学者对藤黄及其活性成分藤黄酸和新藤黄酸的含量测定方
法做了大量的研究工作,其中大部分采用TLC法和HPLC-ELSD法[1-2]。
为了进一步完
善中药藤黄的质量控制,本试验采用HPLC-DAD法同时对藤黄酸和新藤黄酸进行含量
测定,此法简便、可靠,可作为中药藤黄的质量控制方法。
1仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱仪（包括G1313A自动进样器,
G1315ADAD检测器,G1311A四元剃度洗脱泵,G1316A柱温箱,色谱工作站）;BP2110
电子分析天平（德国Sartorius1/100000）;KQ-300VDB超声波清洗器（昆山超声仪器有限
公司）。
甲醇为色谱纯,水为双蒸水。
藤黄酸对照品、新藤黄酸对照品均由安徽中医学院
药物研究所提取分离,HPLC归一化法测定其纯度,分别为99.3%和99.9%。
2方法与结果
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2.1色谱条件
色谱柱：
大连依利特产HypersilODS（5m,4.6mm250mm）;流动相：
甲醇-0.1%冰醋
酸水溶液93∶7;流速1.0mL/min;检测波长：
360nm;柱温：
25℃;进样量：
25L。
在该
色谱条件下,新藤黄酸和藤黄酸的保留时间分别为5.5、7.5min。
理论塔板数按新藤黄
酸计算不低于3000,新藤黄酸和藤黄酸分离度均大于1.5。
色谱图见图1。
2.2样品溶液的制备
将藤黄原料药粉碎,过40目筛,取藤黄药材粉末0.2g,精密称定,置于50mL量瓶中,加
甲醇溶解并稀释至刻度,超声提取20min后,补足甲醇至刻度,精密吸取1mL至10mL
容量瓶中,定容至刻度,经0.45m微孔滤膜过滤,滤液作为供试品溶液。
2.3对照品溶液的制备
精密称取藤黄酸对照品9.8mg和新藤黄酸对照品各10.2mg,置于10mL容量瓶中,加
甲醇定容,精密移取0.5mL至10mL容量瓶中,制成每1mL分别含0.049mg和0.051
mg的混合溶液,作为对照品溶液。
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2.4线性关系考察
精密量取2.3项下对照品溶液0.5、1、2、4mL置10mL容量瓶中,加甲醇定容,分别
吸取25L注入液相色谱仪,在360nm波长下测定。
以峰面积积分值为纵坐标、对照品
浓度（g）为横坐标作图及回归处理,得藤黄酸和新藤黄酸回归方程,分别为：
Y=11
334.8+232781X,r=0.9999（n=5）;Y=75197.5+226301X（r=0.9997,n=5）。
结果表明：
藤黄
酸在2.45～49g、新藤黄酸在2.55～51g范围内呈良好线性关系。
2.5精密度考察
分别吸取2.4项下4mL溶液配置成的对照液25L,连续进样5次,测定峰面积,外标法
计算含量,计算RSD值。
结果表明：
藤黄酸和新藤黄酸含量的RSD分别为0.18%和
0.24%,本试验进样精密度良好。
2.6重复性试验
取同一批次样品,按供试品溶液制备方法处理样品6份,测得藤黄酸和新藤黄酸的平均
含量,分别为30.87%和11.66%;RSD分别为1.1%和2.3%。
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2.7稳定性试验
室温下,精密吸取已知浓度的藤黄粗提物溶液25L,于0、0.5、1、2、3、4、5h进样
测定,结果藤黄酸和新藤黄酸峰面积的RSD分别为0.66%和0.94%,表明供试品溶液在5
h内稳定。
2.8加样回收率试验
取已知含量的藤黄药材（藤黄酸30.21%、新藤黄酸11.59%）粉末约0.2g,6份,精密加
入藤黄酸及新藤黄酸含量80%、100%、120%的藤黄酸和新藤黄酸,按照2.2项下供试
品溶液制备方法制备,回收率测定用加样样品并依法测定。
结果见表1。
表1加样回收
率试验结果（略）
2.9含量测定
精密称取同一批藤黄药材0.2g,6份,按照2.2项下条件制成供试品溶液,按上述色谱
条件测定。
结果见表2。
表2藤黄药材中藤黄酸和新藤黄酸的含量测定结果（略）
3讨论
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参照[《中华人民共和国药
典》2005年版（一部）附录ⅥD]试验,分别精密吸取参照物溶液及供试品溶液各10L,注入
液相色谱仪,记录70min的色谱图,即得。
2.5精密度试验
精密吸取同一供试品溶液10L,在所建立的测定条件下连续进样5次,采用中药色谱指
纹图谱的相似性计算软件计算,结果5次进样的色谱图其相似度均为0.9以上,表明仪器
精密度良好,符合指纹图谱要求。
2.6重复性试验
精密称取同一批样品各5分,分别按供试品溶液制备方法,精密吸取各供试品溶液10
L,分别注入液相色谱仪,测定指纹图谱。
采用中药色谱指纹图谱的相似性计算软件对5
次测定结果进行计算,结果各供试品色谱图其相似度均为0.9以上,表明方法的重复性良
好,符合指纹图谱要求。
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2.7稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液5L,按0、2、4、6、8、12、24h所建立的测定条件进行检
测,采用中药色谱指纹图谱的相似性计算软件对所得结果进行计算,其相似度均为0.9以
上,结果表明,在24h内肉豆蔻的色谱指纹图谱基本稳定,没有明显的变化,符合指纹图谱
的要求。
2.8样品测定
按上述样品溶液的制备方法及测定方法,对10批不同地区商品肉豆蔻药材进行测定,
记录色谱图,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统,对测定结果进行处理,得到各批次样
品的相似度。
结果见表1。
表110批商品肉豆蔻药材指纹图谱的相似度（略）
2.9指纹图谱的建立及分析（见图1～图4）
按上述方法检测10批肉豆蔻的指纹图谱,结果表明,10批肉豆蔻药材的指纹图谱有17
个比较稳定的特征峰,其中4号峰为去氢二异丁香酚色谱峰。
由相似度评价结果可以看
出,10批不同地区商品肉豆蔻药材HPLC指纹图谱的相似度均在0.9以上,未发现离群样
本。
表明各药材之间相似性良好,初步说明目前各地区市售的商品肉豆蔻药材无差异性,
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质量较为稳定。
3讨论
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试验中对流动相进行了考
察,分别采用甲醇-水（70∶30）、甲醇-乙腈-水（30∶30∶40）、甲醇-乙腈-水（25∶35∶40）
为流动相,结果发现以甲醇-乙腈-水（25∶35∶40）为流动相条件下,分离度好,特征峰全面;
方法学考察试验结果证明,该方法准确、可靠,可用于肉豆蔻药材指纹图谱的分析测定
[3]。
供试品溶液制备时,曾对提取方法（回流、索氏提取、超声）、提取时间、提取溶剂（甲
醇、乙醇、70%乙醇）进行了考察,结果采用甲醇超声处理30min即可提取完全,方法简
便、可行,且甲醇对肉豆蔻中挥发性及非挥发性成分均能提取,色谱峰较多。
去氢二异丁香酚是肉豆蔻中非挥发性成分,含量较高,具有较强的抑菌作用,为肉豆蔻中
的活性成分,且性质稳定,故选择其为参照物峰,同时结合其吸收波长及色谱峰数量、分离
程度,经筛选确定测定波长为270nm。
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肉豆蔻主要含有挥发油、脂肪油、木脂素类等多种有效成分,本试验采用HPLC法对
其进行指纹图谱的初步研究。
指纹峰不仅包含非挥发性成分,还能包含挥发性成分,化学
成分检测的较多,相比采用气相色谱法,更能代表肉豆蔻化学成分的整体性。
肉豆蔻药材
多为进口,其产地、贮存时间等不太明确,在指纹图谱研究中发现虽然相似性均在0.9以
上,但10批商品肉豆蔻药材共有指纹蜂相对峰面积变化变异较大,同时也反映不同地区
商品肉豆蔻化学成分及本身个体种仁间也可能存在差异,还需进一步研究。
【参考文献】
1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：
化学工业出版社,2005.90.
[2]李秀芳,吴立军,贾天柱,等.肉豆蔻的化学成分[J].沈阳药科大学学报,2006,23（11）：
698-699.
[3]周欣,李章万,张雪琴,等.银杏叶片剂中银杏黄酮的HPLC指纹图谱研究[J].中国药
学杂志,2006,23（11）：
698-699.
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