肝糖原的提取鉴定与定量第七实验室一类特选.docx

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肝糖原的提取鉴定与定量第七实验室一类特选

南方医科大学

生物化学实验报告

姓名：

学号：

专业年级：

组别：

生物化学与分子生物学实验教学中心

实验名称

Folin-酚试剂法测定蛋白质含量

实验日期

实验地点

合作者

指导老师

评分

教师签名

批改日期

格式要求：

正文请统一用：

小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用TimesNewRoman；标题用：

四号，黑体，加粗。

需强调的地方请用蓝颜色标出。

不得出现多行、多页空白现象。

一、实验目的

1、学习并掌握肝糖原提取和鉴定原理和方法； 

2、学习并掌握蒽酮比色测定糖原含量的原理、注意事项和操作方法；

3、学习并掌握刻度吸管和微量加样枪的使用方式；

4、正确掌握使用离心机的方法步骤；

5、熟练运用溶液混匀的各种方法；

6、正确掌握溶液转移的操作；

7、正确掌握使用分光光度计的方法步骤

二、实验原理

实验1肝糖原的提取与鉴定

糖原是生物的主要储能物质之一，主要储存与肝细胞中，采用研磨匀浆等方法可以使肝细胞破碎。

肝细胞破碎，细胞内容物流出。

低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶并且使蛋白质沉淀，糖原则能够稳定地保存在上清液中，从而达到分离糖原与蛋白质等其他成分的目的。

糖原不溶于乙醇但可溶于热水，故可以先用95%乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。

糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。

这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。

此外，糖原还可以被酸水解成葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可以判定肝组织中糖原的存在。

糖原水解溶液与班氏试剂混匀沸水浴加热2min后会出现砖红色沉淀。

CuSO4+2NaOH=Na2SO4+Cu（OH）2↓

2Cu（OH）2+C6H12O6=2CuOH+氧化型葡萄糖+H2O