全血细胞计数doc.docx
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全血细胞计数doc
大庆油田总医院集团乘风医院检验科
质量手册
1.全血细胞分析(血常规)检测
第1页、共13页第1版、第3次修订
规程编写:
戴涛日期:
2006-6-2
附件3:
SOP文件、临检
审核:
王崇波日期:
2011-3-30
1.仪器检测原理
定量地吸取血液取样,按规定的倍率稀释后,被送入各检测器容器,在检测容器中,有孔眼状细孔,在其两侧的电极之间通有直流电。
当浮游在稀释试样中的血球,通过细孔时,电极之间的直流电阻将发生变化。
根据直流电阻的变化血球的大小作为电脉冲被检测出来。
根据电脉冲的个数,可算出血球数。
另外,可通过求该脉冲大小,就可按血球的大小描出粒度分布,并且,通过解析粒度分布,可得到各种解析数据。
1.1WBC、HGB检测原理
(1)全血模式:
1)血液通过吸液管被吸入旋转阀;
2)由旋转阀定量的6μL的血液,用稀释液1.994ML被移送到WBC检测器的同时,添加WBC/HGB溶血剂1.0ML,成1∶500的稀释试样。
这个状态下约使其反应10秒后,在白细胞膜保持原来的状态下,红细胞发生溶血,血小板收缩。
同时血红蛋白变成红色的正铁化的血红蛋白。
3)WBC检测器中的被稀释/溶血后的试样中,约1ML被移送到HGB检测器。
4)WBC检测器中的试样,通过细孔被吸引500μL,这时,根据PC检测法,对血球通过细孔时的脉冲数进行计数。
5)在HGB测量器中,由发光二极管照射波长为555NM的光,能照射到HGB细胞中的试样。
此试样的浓度作为吸光率的测量,与试样进入前测量的只有稀释液时的吸光率相比较,以求出HGB(血红蛋白值)。
(2)稀释模式:
1)事先用清洗液稀释成1∶26的血液试样,通过吸液管被吸入旋转阀。
2)由旋转阀定量的78μL稀释血液,用稀释液1.922ML被送到WBC检测器的同时,添加WBC/HGB溶血剂1.0ML,成1∶1000的稀释试样。
这个状态下约使其反应溶血,血小板收缩。
同时血红蛋白变成红色的正铁化的血红蛋白。
3)WBC检测器中的被稀释溶血后的试样中,约1ML被移送到HGB检测器。
4)WBC检测器中的试样,通过细孔吸引500μL,这时,根据DC检测法,对血球通过细孔时的脉冲数进行计数。
5)在HGB测量器中,由发光二极管照射到HGB细胞中的试样。
此试样的浓度作为吸光度被测量,与试样进入前测量的只有稀释液时的吸光度相比较,以求出HGB(血红蛋白值)。
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1.2RBC、PLT测量原理
(1)全血模式:
1)血液通过吸液管被吸入旋转阀。
2)由旋转阀定量4.0μL血液,用稀释液1.996ML稀释成1∶500,作为稀释试样被移送到搅拌容器。
(第一次稀释)。
3)接着,被稀释成1∶500的试样用旋转阀定量40μL,用稀释液1.960μL稀释成1∶25000,被移送到RBC/PLT检测器。
(第二次稀释)
4)RBC/PLT检测器中的试样,通过细孔被吸取250μL。
同时,RBC及PLT由DC检测法被计数。
同时,HCT(红细胞比积),由红细胞脉波峰值检测法来求出。
(2)稀释模式:
1)用清洗液事先稀释1∶26的血液试样,用吸液管吸入旋转阀。
2)旋转阀定量2.08μL的稀释血液,用1.99792ML的稀释液被移到RBC/PLT检测器,稀释成1∶25000的稀释试样。
3)RBC/PLT检测器中的试样,通过细孔被吸引250μL,同时RBC及PLT根据DC检测法来计数。
同时,HCT(红细胞比积值)根据红细胞脉冲波峰值检测法求出。
1.3红细胞计算
红细胞常数(红细胞平均体积,红细胞平均血红蛋白量,红细胞平均血红蛋白浓度)根据RBC、HGB及HCT来求出。
(1)细胞平均体积(MCV)
根据RBC及HCT,由下式来求出。
MCV(fL)=HCT(%)/RBC(×106/μL)×10
(2)红细胞平均血红蛋白量(MCH)
根据RBC及HGB,由下式来求出。
MCH(pg)=HGB(g/dL)/RBC(106/μL)×10
(3)胞平均血红蛋白浓度(MCHC)根据HCT及HGB,由下式来求出。
MCHC(g/dL)=HGB(g/dL)/HCT(%)×100
1.4WBC的分类原理
(1)WBC粒度分布,采用4条辨别线划分3个区域,来辨别小型白细胞,中型白细胞,大型白细胞,低辨别线(LD)在30至60fL之间的最合适位置上自动决定,高鉴别线(UD)固定在300fL,用作粒度分布的异常监视。
进一步求出(LD)和(UD)之间的范围内的WBC粒度分布的谷值,最初的谷值设为TROUGH辨别线1(T1),另一个谷值设为TROUGH辨别线2(T2)。
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1)LYM=[W-SCC(小型白细胞数)]
为辨别线(LD)到(T1)间的小型白细胞数,可认为与淋巴球数有很大的关联。
2)MXD=[W-MCC(中型白细胞数)]
为辨别线(T1)到(T2)间的中型白细胞数,可认为与单核细胞,嗜碱细胞、嗜酸细胞的总数有很大关联。
3)NEUT=[W-LCC(大型白细胞数)]
为辨别线(T2)以上的大型白细胞数,可认为与中性白细胞有很大关联。
4)LYM%[W-SCR(小型白细胞比率)]
小型白细胞数相对于全部白细胞数(WBC)的比率。
5)MXD%[W-MCR(中型白细胞比率)]
中型白细胞数相对于全部白细胞数(WBC)的比率。
6)NEUT%[W-LCR(大型白细胞比率)]
大型白细胞数相对于全部白细胞数(WBC)的比率。
(2)白细胞粒度分布异常标志:
WL:
低辨别线(LD)的相对度数超过规定值。
可认为是血小板凝聚或含有多数大型血小板的原因。
T1:
当低的谷值辨别线不能决定时。
T2:
当高的谷值辨别线不能决定时。
F1:
小型白细胞分布异常。
T1的相对度数超过规定值。
F2:
中型白细胞分布异常。
T1或T2的相对度数超过规定值。
F3:
大型白细胞分布异常。
T2的相对度数超过规定值。
WU:
高辨别线(UD)的相对度数超过规定值。
溶血不充分(对于溶血剂的
红细胞膜电极极强的标本等),或含有多数异常血球等的情况。
AG:
为小于低辨别线(LD)的粒子数超过规定值时。
可推测为发生血小板聚集。
这对白细胞测量没有影响,但有可能造成血小板数偏低,而对血小板有异常标记。
1.5RBC/PLT粒度分布解析
(1)RBC粒度分布:
RBC可由,分别在25—75fL、200—250fL之间自动决定的低、高2个辨别线(LD)和(UD)之间的粒子数来求出。
粒度分布,分别对各个辨别线上的相对度数是否有异常,是否有2个以上的峰值,分布幅的异常等进行检查。
1)红细胞分布幅(RDW-CV),求出全粒度面积68.26%,度数时的点L1和
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L2,然后由下式来求出:
RDW-CV(%)=L2-L1/L2+L1×100
2)RDW-SD:
设峰值的高度为100%时,度数为20%处的分布幅作为红细胞分
布幅RDW-SD。
(2)RBC粒度分布异常标志:
RL:
在低辨别线(LD)处的相对度数超过规定值。
可认为是燥声的影响、红细胞形态异常、血小板凝聚等原因。
RU:
在高辨别线(LD)处的相对度数超过规定值。
可认为是燥声的影响。
MP:
具有2个以上粒度分布峰值时。
DW:
设峰值的高度为100%时,20%度数的粒度分布幅出现异常。
20%度数与粒度分布不相交2次时标有此标记。
(3)PLT粒度分布:
血小板粒度分布解析,使用3条辨别线来进行。
分别为2-6FL和12-30FL之间自动决定的2条辨别线(LD)和(UD),以及固定辨别线12FL。
1)血小板分布幅(PDW):
设峰值高度为100%时20%度数处的分布幅为PDW。
其单位为FL(=10-15L)
2)平均血小板容积(MPV):
由下式来求出。
MPV(FL)=PLT(%)/PLT(×103/μL)×1000
3)大型血小板比率(P-LCR)
12FL辨别线以上的大型血小板的比率。
作为12FL固定辨别线和(UD)之
间粒子数占(LD)之间的粒子数的比率来求出。
(4)PLT粒度分布异常标志:
PL:
低辨别线(LD)处的相对度数超过规定值时。
可认为是燥声的影响。
PU:
高辨别线(UD)处的相对度数超过规定值。
可认为是血小板凝聚或燥声的影响。
MP:
具有2个以上粒度分布峰值时。
DW:
设峰值的高度为100%时,20%度数的粒度分布幅出现异常。
20%度数与粒度分布不相交2次时标有此标记。
2.标本采集与处理
(1)受检者(体检对象或病人)的准备:
吸烟、进食、运动和情绪激动等,均可影响血液成分。
甚至一日之间,白细胞总数,嗜酸性粒细胞绝对值,淋巴细
胞各亚群的比例等均有一定的波动。
服用某些药物可能明显干扰实验,因此采血前应询问是否服用过明显干扰药物,并尽可能在一定时间内避免干扰
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因素条件下进行。
(2)标本采集:
1)毛细血管采血:
首先用加样枪准确加入500μL血球稀释液于子弹头中。
取患者左手中指或无名指内侧-—用酒精棉签由里向外消毒-—用干棉球擦试干净-—用带刃的三棱采血针刺破皮肤,深度约2-3毫米,稍加挤压以血液能流出为宜-—擦去第一滴血-—用血红蛋白吸管准确吸取20μL血液-—加入准备好的子弹头中-—上下颠倒混匀10次,等待5分钟,上机检测。
2)静脉采血:
(1)抗凝剂:
最佳选用乙二氨四乙酸—二钾(EDTA-K2),EDTA-Na2也可,只是溶解度不如K2。
(2)抗凝剂配制(体检时用):
10%EDTA-K2溶液:
1)EDTA-K220g+H2O至100Ml完全溶解后备用。
2)取子弹头分别加上述溶液20μL。
3)静脉采血0.5-1mL加入子弹头内,颠倒混合5次以上。
(3)标本处理:
我院采用真空采血管,采血量为0.5-1ML,每日清晨由病区护士采集,早7:
30分送至检验科。
血液标本保存非常重要,采血后应在2小时内检测,血液分析仪进行细胞计数的血液只能在室温下保存,温度4℃
(4)标本拒收标准:
有凝块或微小凝块、溶血、无标签及标本与化验单不符的标本。
3.试剂
1)血球稀释液:
本科使用希森美康产的与仪器配套的稀释液。
规格:
20升/桶。
2)WBC/HGB用溶血素:
同稀释液配套。
规格:
500ML×3瓶/合。
3)清洗剂:
同稀释液配套。
规格:
50ML/瓶。
1.试剂消耗量(每一个标本):
稀释液:
约30ML。
WBC/HGB用溶血素:
约1.0ML。
2.吸引血液量:
全血模式约50μL,稀释模式约200μL(预先稀释血样)。
4.仪器
KX-21全自动血球分析仪、日本东亚。
5.操作
(1)全血模式:
打开主机右侧电源开关-—自动检查、清洗、空白校验-—进入准备测
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量状态-—在LCD画面上的系统区域中显示“WD”时检测模式为全血模式-—将试管倾斜来回晃动,充分混匀-—将试管塞取下-—将试管放入吸液管下-—按下开始键-—当LCD画面中显示“正在测量”时,将试管取下-—机器自动测量-—结束后自动打印结果-—将结果贴在报告单上,登记,即可发报告。
注:
容许空白值WBC:
0.3(×103/μL以下)、
RBC:
0.02(×103/Μl)以下
HGB:
0.1(g/dL)以下、
PLT:
10(×103/μL)以下
(2)末梢血:
打开电源机器自动清洗后在LCD画面上系统区域显示“WD”检测模式-—按下MODE键,使画面变成变更模式-—用光标键选择[稀释(PD)]-—按下ENTER键,进行切换回到主画面-—将稀释的末梢血放至吸液管下进行检测。
6.质控品水平平和频率
室内质控品:
由省临检中心提供(每年2批)。
质控频率:
每日开机检测病人标本前,先做室内质控。
具体方法见KX-21室内质控操作程序。
7.参考值
RBC:
成年男性:
(4.0-5.5)×1012/L
成年女性:
(3.5-5.0)×1012/L
初生儿:
(6.0-7.0)×1012/L
WBC:
成人:
(4-10)×109/L
初生儿:
(15-20)×109/L
6月—2岁(11-12)×109/L
Hb:
成年男性:
120-160g/L
成年女性:
110-150g/L
PLT:
(100-300)×109/L
HCT:
男0.42-0.49女0.37-0.43
MCH:
27-34pg
MCV:
80-100fl
MCHC:
320-360g/L
W-SCR:
0.20-0.40W-SCC:
1.0-3.0×109/L
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W-MCR:
0.05-0.10W-MCC:
0.3-1.0×109/L
W-LCR:
0.50-0.70W—LCC:
3.0–5.0×109/L
RDW—SD:
0.37—0.54RDW-CV:
0-0.141
MPV:
9-13fl
PDW:
9-17fl
P-LCR:
0.15-0.30
8.操作性能
(1)处理能力:
约60个标本/小时。
(2)精密度:
可靠水平95%(在一定范围内)。
(3)正确度:
1)全血模式WBC:
±3%或±0.2×109/L以内
RBC;±2%或±0.03×1012/L以内
PLT:
±5%或±10×109/L以内
2)稀释模式WBC:
±5%或±0.3×109/L以内
RBC:
±3%或±0.05×1012/L以内
PLT:
±8%或±15×109/L以内
(4)表示范围:
WBC:
0.0—299.9(×103/μl)
RBC:
0.00—19.99(×106/μl)
HGB:
0.0—25.0(g/dl)
PLT:
0—1999(×103/μl)
(5)线性:
WBC:
1.0—9.9(×103/μl)±0.3(×103/μl)以内
10.0—99.9(×103/μl)±3%以内
RBC:
0.30—0.99(×106/μl)±0.03(×106/μl)以内
1.00—7.00(×106/μl)±3%以内
HGB:
0.1—10.0(g/dl)±0.2(g/dl)以内
10.0—25.0(g/dl)±2%以内
HCT:
10.0—33.3(HCT%)±1.0(HCT%)以内
33.4—60.0(HCT%)±3%以内
PLT:
10—999(×103/μl)±10(×103/μl)
200—999(×103/μl)±5%以内(设RBC<7.00×106/μL)
9.超出可报告范围的处理
(1)如WBC.HB.PLT.过高或过低达到危急值时.需重复做一遍。
将两次结果同时帖在化验单上。
并将结果登在急诊化验单上。
将达到危急值的项目登在危急值登记本上。
将化验单送到医生手中后由医生在危急值登记本上签字。
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(2)如WBC.RBC.PLT.结果过高机器无法识别时,需手工进行计数。
如无法分类时,首先进行手工解析,如仍分不出来需进行手工推片染色用显微镜计数。
10.危急值
WBC计数:
〈2.0Ⅹ109/L或〉20.0Ⅹ109/L
血红蛋白:
小于50克或大于180克
血小板:
小于50Ⅹ109/L
11.方法局限性
白细胞分类只能定性到三分类:
淋巴细胞、中间细胞、中性粒细胞。
而单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞不能鉴别出来。
12.参考文献
KX-21中文操作手册及临床基础检验学。
13.校准
校准品:
由仪器厂家提供的配套校准品。
校准频率:
QC、EQA及病人结果有问题时。
14.临床意义
1.RBC:
(1)增多:
1)相对性增多:
血浆中水分丢失,血液中有形成分也相对的有所增加,可因连续呕吐,严重腹泻、多汗、多尿,大面积烧伤或晚期消化道肿瘤患者。
2)绝对性增多:
慢性肺心病,某些肿瘤及某些紫钳型先天性心脏病。
③真性红细胞增多症:
是原因不明的造血系统增殖性疾病。
(2)减少:
由于各种病因导致周围血红细胞减少,即病理性贫血。
按病因可将贫血分成造血不良,红细胞过度破坏和失血三大类。
2.WBC:
(1)中性粒细胞增多:
1)急性感染:
急性化脓性感染如感染很局限且轻微,白细胞总数仍可正常,但分类检查时可见分叶核百分率有所增高,中度感染时,WBC总数常增高大于10×1012/L以上,且伴有明显的核象左移。
2)严重组织损伤或大量血细胞破坏:
在较大手术后12-36H,白细胞常达10×1012/L以上,其增多的细胞万分以中性分叶核粒细胞为主。
3)急性大出血:
在脾破
袭或宫外孕输卵管破裂后,白细胞迅速增高。
4)急性中毒:
化学药物如安眠药,敌敌畏等中毒时。
(2)中性粒细胞减少:
1)某些感染:
某些革兰氏阴性杆菌如伤寒,副伤寒杆菌感染时;2)某些血液病:
如典型再生障碍性贫血时,呈三少表现。
3)慢性理化损伤:
4)自身免疫性疾病。
5)脾功能抗进。
(3)淋巴细胞增高:
1)某些病毒或细胞所致的急性传染病。
2)某些慢性感染;3)肾移植术后,4)淋巴细胞性白血病,白血性淋巴肉瘤;5)再生障碍
性贫血。
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(4)淋巴细胞减少:
主要见于接触放射线及应用肾上腺皮质激素或促肾上
腺皮质激素时。
3.HGB:
(1)生理性增加:
新生儿高原居住者
(2)病理性增加:
真性红细胞增多症、代偿性红细胞增多症。
(3)减少:
各种贫血、白血病、产后、手术后大量失血。
4.PLT:
(1)血小板减少:
1)血小板生成障碍:
再生障碍性贫血,急性白血病、急性放射性病;2)血小板破坏增多:
原发性血小板减少性紫瘢,脾功能亢进;3)血小板消耗过多:
DIC。
4)家庭性血小板减少。
(2)血小板增多:
1)骨髓增生综合征、慢性粒细胞性白血病、真性红细胞增多症;2)急性反应:
急性感染、急性失血、急性溶血;3)其他:
脾切除后。
5.HCT:
(1)增高:
大面积烧伤,各种原因引起的红细胞与血红蛋白增多、脱水等。
(2)减低:
各种贫血时随红细胞数的减少而有程度不同的降低。
6.MCH,MCV,MCHC:
可从不同侧面反映红细胞的病理变化,根据三个指数的变化情况,可将贫血分为大细胞性贫血,正常细胞性贫血,小细胞低色素性贫血及单纯小细胞性贫血。
详解见下表:
7.RDW:
(1)鉴别缺铁性贫血和β-珠蛋白生成障碍性贫血。
由于HB合成障碍,缺铁性贫血和轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血均可表现为小细胞低色素性贫血。
(2)诊断缺铁性贫血:
鉴于95%以上的缺铁性贫血的RDW均为异常。
(3)进行贫血的新形态学分类。
8.MPV:
(1)血小板数低而MPV值升高,骨髓自身正常,但外周血小板破坏增多造成血小板降低的刺激后反应性增生时,巨核细胞DNA倍体数及细胞大小都增加,MPV也增高。
(2)血小板数高,MPV正常:
骨髓增生性疾病如血小板增多,红细胞增多但MPV正常。
(3)血小板与MPV值均下降:
AIDS病毒直接影响巨核细胞并导致血小板减少,大约2/3的病人血小板数降低,92%病人MPV值下降,与骨髓受抑时的血小板状态相似。
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(4)MPV值与血小板数都升高:
反应性血小板增多症的病人,中其MPV值升高,反应性血小板增多症病人中,其MPV值升高,因血液流失如体内损伤造成的急性大失血可使血小板增多。
(5)MPV值升高,而血小板正常:
慢性髓细胞性白血病,骨髓纤维化,脾切除均可导致MPV升高,慢性髓细胞性白血病和骨髓纤维化主要致使骨髓增生异常,两种疾病中,血小板体积经常增大并大小不均。
9.PDW:
是反映血小板体大小的异质性参数。
增大:
急非淋化疗后,巨功细胞性贫血,慢粒、脾切除、巨大血小板综合征、血栓性疾病等。
15:
镜检标准
1.新生儿:
(1)复检条件:
首次检测标本;
(2)复检要求:
涂片镜检;
2.WBC、RBC、Hb、PLT、网织红细胞(Ret):
(1)复检条件:
超出线性范围;
(2)复检要求:
稀释标本后重新测定;
3.WBC、PLT:
(1)复检条件:
低于实验室确认的仪器线性范围;
(2)复检要求:
按实验室标准操作规程(SOP)进行;
4.WBC、RBC、Hb、PLT:
(1)复检条件:
无结果;
(2)复检要求:
①检查标本是否有凝块;②重测标本;③如结果维持不变,用替代方法计数;
5.WBC:
(1)复检条件:
首次结果<4.0×109/L或>30.0×109/L;
(2)复检要求:
涂片镜检;
6.WBC:
(1)复检条件:
3天内Delta值超限,并<4.0×109/L或>30.0×109/L;
(2)复检要求:
涂片镜检;
7.P