泽泻不同提取物对高脂血症小鼠血脂及脂质过氧化的影响.docx
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泽泻不同提取物对高脂血症小鼠血脂及脂质过氧化的影响
泽泻不同提取物对高脂血症小鼠血脂及脂质过氧化的影响
（作者:
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作者：
李淑子 金在久 张善玉 【摘要】目的观察泽泻多糖、泽泻水提物及醇提物对治疗小鼠高脂血症及抗氧化的作用。
方法采用高脂饲料建立实验小鼠高脂血症模型，实验设正常对照组、模型对照组、泽泻多糖组、泽泻水提物和泽泻醇提物组，用胶股蓝片作阳性对照。
饲喂高脂饲料两周后，用泽泻提取物灌胃给药21d，检测小鼠血清总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白-胆固醇（HDL-C）、小鼠肝脏超氧化物歧化酶（SOD）活力及丙二醛（MDA）含量等指标，并通过计算脾脏、胸腺免疫器官指数值观察小鼠的免疫能力。
结果泽泻多糖、泽泻水提物及泽泻醇提物均能显著降低高脂血症模型小鼠血清中TC、TG，升高HDL-C，改善小鼠的动脉硬化指数值（AI），而且均能显著提高肝组织SOD活力，降低肝组织MDA含量，还能明显升高高脂血症肥胖小鼠的脾脏、胸腺指数值。
结论泽泻三种提取物不仅对肥胖小鼠的血脂紊乱具有良好的调节作用，而且能提高肥胖小鼠的抗氧化能力，并能增强肥胖小鼠的免疫能力。
【关键词】泽泻；多糖；脂代谢；SOD；MDA 【Abstract】ObjectiveTostudytheeffectofwaterandalcoholextractsofTalismanorientalisandpolysaccharideonbloodlipidandantioxidationofexperimentalhyperlipidemiamice.MethodsAllthemicewerefedwithfoodsabundantinhigh-fattoestablishmodelofhyperlipidemia.Theyweredividedrandomlybyweightintothemodel,control,polysaccharide,extractsofTalismanorientalisgroups,andtheJiaogulantrochegroupaspositivecontrol.Themicewerefedwithfoodsabundantinhigh-fatfor2weeks,thenadministratedorallywithextractsofTalismanorientalisfor21days.Thetotalcholesterol（TC）,triglyceride（TG）andhigh-densitylipoprotein（HDL-C）infatmice’sbloodserumandliver’sSODandliver’sMDAweredetermined.Theimmunefunctionwasobservedthroughcalculatedthemice’sspleenandthymusindex.ResultsThewaterandalchohlextractsofTalismanorientalisandpolysaccharidecandecreasetheTC,TG,increasetheHDL-CandimprovethearteriosclerosisIndex（AI）,increasetheSODvitalityanddecreasetheMDAcontentofliversignificantly,increasethefatmice’sspleenandthymusindexobservably.ConclusionTheextractsofTalismanorientaliscannotonlyaccommodatedisordersofmetabolizingbloodlipid,butalsoenhanceanti-oxidationcapacityandimmunefunctionofhyperlipidemiamice. 【Keywords】Alismanorientalis；Polysaccharide；Fatmetabolize；SOD；MDA 泽泻为泽泻科植物泽泻Alismaorientalis（Sam.）Juzep.的干燥块茎。
其性寒，味甘、淡，归肾、膀胱经。
具有利水渗湿、泄热之功效。
用于小便不利、水肿胀满、泄泻、尿少、痰饮、眩晕、热淋涩痛等症。
近年来研究表明，泽泻除具有明显的利尿作用外，还具有降血压、降血糖、抗脂肪肝、降血脂及抗动脉粥样硬化等作用［1］。
对泽泻的化学成分和实验药理学的研究也多集中在利尿和降血脂方面。
研究资料显示泽泻降血脂成分主要是泽泻醇A、泽泻醇B、乙酸泽泻醇醋酸酯等脂溶性成分，其降脂作用的机理可能是抑制胆固醇的吸收及影响胆固醇在小肠的酯化［2,3］。
近年来研究表明植物多糖具有重要的生理活性，这些多糖参与了生物体中细胞的各种活动，具有免疫调节、抗肿瘤、降血糖、降血脂、抗氧化、抗衰老、抗病毒等生物活性［4］。
为此本实验将泽泻多糖、泽泻水提物及泽泻醇提物分别灌胃高脂血症小鼠，旨在比较三种提取物对小鼠脂代谢作用影响的差 别，并进行了相关指标的测定，为泽泻的开发和应用提供理论依据。
1实验材料与仪器 1.1药品泽泻饮片（产自广西，符合2005年药典标准）；胶股蓝片（广州白云山制药股份有限公司，批号：
07021011）。
1.2试剂与仪器胆固醇、牛胆酸钠，北京奥博星生物技术责任有限公司；总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）测定试剂盒，上海荣盛生物科技有限公司；超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒、丙二醛（MDA）测定试剂盒，南京建成生物工程研究所；7600型全自动生化分析仪，HITACHI公司，日本；紫外-可见分光光度计，上海激光技术有限公司。
1.3实验动物分组及饲养昆明系清洁级小鼠72只，体质量（20±2）g，雌雄各半，由延边大学医学部动物实验科提供。
在实验环境下，适应性饲养3d，按体质量随机分成6组，每组12只。
正常对照组（喂普通饲料）、模型对照组（肥胖造型，喂高脂饲料）、泽泻多糖组（肥胖造型，喂高脂饲料，泽泻多糖）、泽泻水提物组（肥胖造型，喂高脂饲料，泽泻水提物）、泽泻醇提物组（肥胖造型，喂高脂饲料，泽泻醇提物）、胶股蓝片组（肥胖模型，喂高脂饲料，胶股蓝片），除正常对照组饲喂普通饲料外，其余各组均饲喂高脂饲料，各组小鼠自由进食饮水，室温为20℃~23℃。
2方法 2.1药物的制备参照中药制剂常规方法，将泽泻饮片用常水冲洗后再用蒸馏水冲洗，50℃干燥，研磨成粗粉，用石油醚浸泡去除杂质，抽滤后阴干，备用。
2.1.1泽泻水提物的制备取100g泽泻粗粉，加入蒸馏水煎3次，每次加水600ml，煎煮1h后过滤，收集滤液，以2000转/min，离心15min，取上清液，低温静置过夜后过滤，入旋转蒸发仪中浓缩至50ml，制成2g/ml生药溶液，备用。
2.1.2泽泻醇提物的制备取100g泽泻粗粉加入80%乙醇回流提取3次，每次加入乙醇600ml，第一次回流提取2h后过滤，第二、三次分别回流提取1h后过滤，滤液以2000转/min，离心15min，取上清液，入旋转蒸发仪中回收乙醇，并浓缩至50ml，制成2g/ml生药溶液，备用。
2.1.3泽泻多糖的制备取泽泻粗粉300g，用80%乙醇回流提取2次，第一次加入6倍量乙醇，回流提取3h，过滤；第二次4倍量，2h，过滤，将药渣50℃干燥，加2000ml蒸馏水于90℃温浸提3h，过滤；药渣再用蒸馏水1000ml于90℃温浸提取2h，过滤，再用蒸馏水500ml重复一次，合并滤液，减压浓缩至600ml，以3000转/min，离心10min去除沉淀，上清液，过滤，滤液中加入5倍量的95%乙醇，低温静置过夜，沉淀多糖并过滤，滤饼依次用无水乙醇、丙酮、乙醚多次洗涤，50℃干燥，得泽泻粗多糖（用蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量为69.16%），将泽泻多糖制成25mg/ml多糖溶液，备用。
2.2肥胖小鼠给药正常对照组饲喂普通饲料，其余各组均饲喂高脂饲料（高脂饲料的制备：
胆固醇2%，牛胆酸钠0.5%，猪油8%，普通饲料粉89.5%，将上述原料混合均匀，加水适量制成块状）。
2周后正常对照组和模型对照组均灌胃0.3ml生理盐水；泽泻水提物组和泽泻醇提物分别灌服0.3ml泽泻水提物和泽泻醇提物（均是2g/ml生药溶液，即生药30g/kg剂量）；泽泻多糖组灌服0.3ml的泽泻多糖溶液（25mg/ml，多糖375mg/kg剂量）；胶股蓝片组灌服100mg/kg的胶股蓝片溶液（按胶股蓝片总皂苷计）。
口服灌胃给药，1次/d，连续给药21d。
实验期间正常对照组继续饲喂普通饲料，其余各组继续饲喂高脂饲料。
2.3生化指标的测定①末次给药后，经颈动脉取血，以3500转/min，离心15min,用生化分析仪分别测定血清TC、TG、HDL-C，并按公式计算动脉硬化指数［AI=（TC-HDL-C）/HDL-C］和HDL-C/TC的值；②摘取肝脏0.5g，在生理盐水中冲洗，滤纸吸干，入匀浆器中用生理盐水匀浆，制成10%的肝匀浆液，离心（4000r/min），上清液采用化学比色法，按SOD和MDA试剂盒测定方法测定小鼠肝脏SOD、MDA含量；③摘取脾脏、胸腺称重，计算胸腺、脾脏指数［脾脏指数=脾脏质量（g）/小鼠体质量（g）×100%］，胸腺指数表示方法同脾脏指数。
2.4统计学方法数据处理和统计分析采用SPSS10.0软件，进行t检验。
3结果 3.1泽泻不同提取物对高脂血症小鼠血脂的影响 表1结果显示，模型对照组TC、TG含量与正常对照组比较差异显著（P0.01），表明模型建立成功。
①从肥胖小鼠血清TC浓度降低程度与模型对照组比较，泽泻多糖组﹑泽泻水提物组﹑泽泻醇提物组均明显降低（P0.05），分别下降了14.14%﹑16.37%﹑15.77%；泽泻多糖组﹑泽泻水提物组和泽泻醇提物组三组之间差异无统计学意义（P0.05）。
②从肥胖小鼠血清TG浓度降低程度与模型组比较，泽泻多糖组﹑泽泻水提物组﹑泽泻醇提物组均明显降低（P0.01），分别降低了47.86%、57.69%、67.95%。
③从各组小鼠血清中HDL-C的浓度与模型对照组比较，泽泻三种提取物组小鼠的HDL-C含量显著升高（P0.05或P0.01）；④泽泻的三种提取物组的小鼠血清中的HDL-C/TC值与模型组比较均有显著提高（P0.01），并显著降低动脉硬化指数（AI）值（P0.01或P0.05）。
3.2小鼠肝组织SOD及MDA含量及对脾脏、胸腺指数的影响 表2结果显示，泽泻多糖、水提物和醇提物组的小鼠肝组织SOD的活性显著高于模型对照组（P0.05或P0.01）；MDA含量显著低于模型组（P0.01）。
泽泻不同提取物组与模型组小鼠的免疫器官指数值作比较，小鼠的脾脏指数和胸腺指数均有不同程度的提高,其中泽泻多糖组的脾脏指数和胸腺指数与模型组比较差异有统计学意义（P0.01），泽泻醇提物组的胸腺指数与模型组比较差异有统计学意义（P0.05）。
4讨论 高脂饮食可以导致高脂血症和肝脏脂代谢紊乱，而高脂血症是动脉粥样硬化，高血压，冠心病和糖尿病等疾病的危险因素，由此而引起的心脑血管疾病严重危害人类健康和生命。
由于高脂血症是血液里的TC、TG和LDL-C升高，同时HDL-C降低所致，因此降低TC、TG的浓度，同时升高HDL-C浓度是治疗高脂血症的关键。
现代医学研究证明泽泻有利尿、降压、降糖、降脂及抗动脉粥样硬化、抗脂肪肝、免疫调节等多种作用［1］。
泽泻所含化学成分较多，其中有治疗脂肪肝作用的活性成分主要是胆碱和卵磷脂；而泽泻醇A，B及其单醋酸酯和泽泻醇C单醋酸酯等5种三萜类成分具有降低血浆和肝脏中胆固醇的作用［3］；Hikino等［5］报道泽泻中的某些三萜类成分，如泽泻醇A醋酸酯和泽泻醇B，具有利尿作用；还发现泽泻醇A，B和泽泻醇F具有抑制诱导型NO合成酶的作用［6］。
随着生活水平的提高，高脂类食物摄取量增多，相应的高血脂、脂肪肝患者也日益增多，研制开发更为安全方便高效的降脂、保肝护肝药物成为当前药物开发中的一个热点。
在传统的保肝药方中，泽泻的应用十分广泛，但目前对其多种提取物在脂代谢中的作用的比较鲜见报道。
本实验设计了泽泻的三种提取方法，探究三种提取物分别灌胃由高脂膳食而引起的高脂血症小鼠后对脂代谢过程中的作用差异。
结果显示泽泻的三种提取物均能显著降低小鼠血清中TC、TG的浓度，升高HDL-C的浓度，同时升高HDL-C/TC的比值，改善动脉硬化指数值（AI）。
在表1中看出，泽泻水提物和醇提物都优于泽泻多糖，表现在降低TG和升高HDL-C方面，但三种提取物对脂代谢影响并没有明显的优劣差异（P0.05）。
超氧化物歧化酶（SOD）是机体中一种重要的抗氧化酶，催化超氧自由基（O2-），歧化为H2O2和O2，消除体内过剩的超氧阴离子，阻止自由基攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，防止发生脂质过氧化，从而达到对机体组织的保护作用［7］。
丙二醛（MDA）是脂质过氧化反应链式终止阶段产生的小分子产物，间接反映了机体细胞受自由基攻击的严重程度和组织细胞的脂质过氧化程度。
胸腺和脾脏是机体最重要的中枢和外周免疫器官之一，胸腺指数和脾脏指数能反映二者的发育和功能状况，间接反映了机体的免疫水平，免疫功能的强弱与这些免疫器官的重量变化有着密切关系，伴随着重量的增加，其免疫功能必然明显加强。
本实验对肥胖小鼠肝组织的SOD和MDA的含量进行测定，并对小鼠的免疫器官重量进行观察。
结果发现泽泻多糖、水提物、醇提物组小鼠的肝组织SOD的含量显著升高，MDA的含量显著降低。
对免疫器官重量的影响实验中发现泽泻多糖组明显提高小鼠脾脏指数和胸腺指数（P0.01），而泽泻水提物和泽泻醇提物对小鼠免疫器官指数也有所提高，但差异无统计学意义（P0.05）。
表明泽泻的三种提取物均具有较强的抗氧化能力和保护肝组织细胞的作用，泽泻多糖对小鼠的机体免疫功能具有一定的增强作用。
目前对泽泻影响脂代谢的研究主要集中在脂溶性成分上，但是本研究发现，泽泻中的水溶性成分和多糖也具有良好的降脂效果。
随着研究手段不断改进，对水溶性有效成分的药理学研究也是非常重要的，并且具有良好的应用前景。
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