常用的溶剂组合有:
Petroleumether/Ethylacetate,Petroleumether/Acetone,Petroleumether/Ether,
Petroleumether/CH2Cl2,CH2Cl2/ethylacetate,ethylacetate/MeOH,CHCl3/ethylacetate
展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂,就首先尝试使用该类展开剂,然后不断尝试比例,直到找到一个别离效果好的展开剂。
很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来到达最正确效果。
我在实验中,为了实现一个配体与其他杂质有效别离,曾经尝试了所有的溶剂用来两两组合后,最后才找到petroleumether/THF这类不常见的混合溶剂。
一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例,到达最正确效果,如果没有分开的迹象,最好是换溶剂。
对于在硅胶中这种酸性物质上易分解的物质,在展开剂里往往加一点点三乙胺,氨水,吡啶等碱性物质来中和硅胶的酸性。
当然,选择所添加的碱性物质,还必须考虑容易从产品中除去,氨水无疑是较好的选择。
这里要特别强调的一点是:
别离效果的好坏和所用硅胶和溶剂的质量很有关系。
不同厂家生产的硅胶可能含水量以及颗粒的粗细程度,酸性强弱不同,从而导致产品在某个厂家的硅胶中别离效果很好,但在另一个厂家的就不行。
溶剂的含水量和杂质含量对别离效果都有明显的影响。
温度对别离效果影响也很明显。
我们实验室没有空调,我在实验过程发现,在夏天别离相同的产品,所需的淋洗剂极性要比在冬天小很多,这一点大家也是可以理解的。
鉴于此,使用的硅胶,不用时一定要密封,防止吸潮。
TLC所用的硅胶板一定要保存在干燥器里面,或使用前在红外烘箱里干燥一段时间。
在利用TLC跟踪反应时,在点板的时候往往是反应体系的混和溶液点一个点A,每种难挥发的原料各点一个点B,C,D等等,然后所有的原料和反应体系的混合溶剂再共同点一个混合点X,这些点在板上的位置如下图:
这样的好处是展开后可以清楚地看见每个点的位置,把A这个点展开后的各个层份的点与B,C,等原料比较,从而判断原料消失没有,点混合点X的目的在于,方便观察,因为有时候,板展开后,各点的位置有些变形,或者由于边缘效应等等,使得判断不易。
利用TLC判断物质的纯度时,往往要和NMR相结合,因为某种样品在这种展开剂中只显示一个点,并不等于在别的展开剂中也只显示一个点。
但有趣的是,由于H1NMR可鉴别的纯度也就在95%左右,有时候H1NMR现示较纯的东西,一点板就会发现有几个点。
所以,两者要结合使用。
但是自己以前的样品,则可以只通过点板来判断纯度。
〔四〕纠正以下几个错误:
1、“由于层析柱和薄板的不同,即使两者使用的硅胶都相同,但是在把TLC分析得到的展开剂用在柱层析时,也显得极性偏大,所以要稀释一倍”,如果使用手工铺的TLC摸条件,则不必将洗脱剂的洗脱强度减小一倍,这种说法仅适用于使用预制高效板〔HPTLC〕的情况。
2、“对于在硅胶中这种酸性物质上易分解的物质,在展开剂里往往加一点点三乙胺,氨水,吡啶等碱性物质来中和硅胶的酸性。
当然,选择所添加的碱性物质,还必须考虑容易从产品中除去,氨水无疑是较好的选择”,这应区分是柱层还是TLC,对于柱层添加二乙胺比较好,对于分析TLC添加三乙胺或用氨水薰〔不是加到展开剂里〕都可以。
有机TLC板显色问题的讨论
专属性显色剂
由于化合物种类繁多,因此专属性显色剂也是很多的,现将在各类化合物中最常用的显色剂列举如下:
(1)烃类
①硝酸银/过氧化氢
检出物:
卤代烃类。
溶液:
硝酸银O.1g溶于水lml,加2-苯氧基乙醇lOOml,用丙酮稀释至200ml,再加30%过氧化氢1滴。
方法:
喷后置未过滤的紫外光下照射;
结果:
斑点呈暗黑色。
②荧光素/溴
检出物:
不饱和烃。
溶液:
I.荧光素0.1g溶于乙醇lOOml;
Ⅱ.5%溴的四氯化碳溶液。
方法:
先喷(I),然后置含溴蒸气容器内,荧光素转变为四溴荧光素(曙红),荧光消失,不饱和烃斑点由于溴的加成,阻止生成曙红而保留荧光,多数不饱和烃在粉红色背景上呈黄色。
③四氯邻苯二甲酸酐
检出物:
芳香烃。
溶液:
2%四氯邻苯二甲酸酐的丙酮与氯代苯(10:
1)的溶液。
方法:
喷后置紫外光下观察。
④甲醛/硫酸
检出物:
多环芳烃。
溶液:
37%甲醛溶液O.2ml溶于浓硫酸l0ml。
(2)醇类
①3,5一二硝基苯酰氯
检出物:
醇类。
溶液:
I.2%本品甲苯溶液;
Ⅱ.0.5%氢氧化钠溶液;
Ⅲ.O.002%罗丹明溶液。
方法:
先喷(I),在空气中干燥过夜,用蒸气薰2min,将纸或薄层通过试液(Ⅱ)30s,喷水洗,趁湿通过(Ⅲ)15s,空气干燥,紫外灯下观察。
②硝酸铈铵
检出物:
醇类。
溶液:
I.1%硝酸铈铵的0.2mol/L硝酸溶液;
Ⅱ.N,N-二甲基-对苯二胺盐酸盐1.5g溶于甲醇、水与乙酸(128m1+25m1+1.5m1)混合液中,用前将(I)与(Ⅱ)等量混合。
喷板后于105oC加热5min。
③香草醛/硫酸
检出物:
高级醇、酚、甾类及精油。
溶液:
香草醛1g溶于硫酸lOOml。
方法:
喷后于120oC加热至呈色最深。
④二苯基苦基偕肼’
检出物:
醇类、萜烯、羰基、酯与醚类。
溶液:
本品15mg溶于氯仿25ml中。
方法:
喷后于110oC加热5~lOmin。
结果:
紫色背景呈黄色斑点。
(3)醛酮类
①品红/亚硫酸
检出物:
醛基化合物。
溶液:
I.0.01%品红溶液,通入二氧化硫直至无色;
Ⅱ.0.05mol/L氯化汞溶液;
Ⅲ.O.05mol/L硫酸溶液。
方法:
将I、Ⅱ、Ⅲ以1:
1:
10混合,用水稀释至l00ml。
②邻联茴香胺
检出物:
醛类、酮类。
溶液:
本品乙酸饱和溶液。
③2,4-二硝基苯肼
检出物:
醛基、酮基及酮糖。
溶液:
I.0.4%本品的2mol/L盐酸溶液;
Ⅱ.本品O.1g溶于乙醇l00ml中,加浓盐酸lml。
方法:
喷溶液I或Ⅱ后,立即喷铁氰化钾的2mol/L盐酸溶液。
结果:
饱和酮立即呈蓝色;饱和醛反应慢,呈橄榄绿色;不饱和羰基化合物不显色。
④绕丹宁
检出物:
类胡萝卜素醛类。
溶液:
I.1%~5%绕丹宁乙醇溶液;
Ⅱ.25%氢氧化铵或27%氢氧化钠溶液。
方法:
先喷溶液I,再喷溶液Ⅱ,干燥。
(4)有机酸类
①溴甲酚绿
检出物:
有机酸类。
溶液:
溴甲酚绿0.1g溶于乙醇500ml和0.1mol/L氢氧化钠溶液5ml。
方法:
浸板。
结果:
蓝色背景产生黄色斑点。
②高锰酸钾/硫酸
检出物:
脂肪酸衍生物。
溶液:
见通用显色剂酸性高锰酸钾。
③过氧化氢
检出物:
芳香酸。
溶液:
0.3%过氧化氢溶液。
方法:
喷后置紫外光(365nm)下观察。
结果:
呈强蓝色荧光。
④2,6-二氯苯酚-靛酚钠
检出物:
有机酸与酮酸。
溶液:
0.1%本品的乙醇溶液。
方法:
喷后微温。
结果:
蓝色背景呈红色。
(5)酚类
①Emerson试剂(4-氨基安替比林/铁氰化钾(Ⅲ))
检出物:
酚类、芳香胺类及挥发油。
溶液:
I.4-氨基安替比林1g溶于乙醇100ml;
Ⅱ.铁氰化钾(Ⅲ)4g溶于水50ml,用乙醇稀释至100ml。
方法:
先喷溶液I,在热空气中干燥5min,再喷溶液Ⅱ,再于热空气中干燥5min,然后将板置含有氨蒸气(25%氨溶液)的密闭容器中。
结果:
斑点呈橙-淡红色。
挥发油在亮黄色背景下呈红色斑点。
②Boute反应
检出物:
酚类、氯、溴、烷基代酚。
方法:
将薄层置有NO2蒸气(含浓硝酸)的容器中3~10min,再用NH2蒸气(浓氨液)处理。
③氯醌(四氯代对苯醌)
检出物:
酚类。
溶液:
1%本品的甲苯溶液。
④DDQ(二氯二氰基苯醌)试剂
检出物:
酚类。
溶液:
2%本品的甲苯溶液。
⑤TCNE(四氰基乙烯)试剂
检出物:
酚类、芳香碳氢化物、杂环类、芳香胺类。
溶液:
0.5%~1%本品的甲苯溶液。
⑥Gibb’s(2,6-二溴苯醌氯亚胺)试剂
检出物:
酚类。
溶液:
2%本品的甲醇溶液。
⑦氯化铁
检出物:
酚类、羟酰胺酸。
溶液:
1%~5%氯化铁的0.5mol/L盐酸溶液。
结果:
酚类呈蓝色、羟酰胺酸呈红色。
(6)含氮化合物
①FCNP(硝普钠/铁氰化物)试剂
检出物:
脂 肪族含氮化物,如氨基氰、胍、脲与硫脲及其衍生物,肌酸及肌酐。
溶液:
10%氢氧化钠溶液、10%硝普钠溶液、10%铁氰化钾溶液与水按1:
1:
1:
3混合,在室温至少放置20min,冰箱保存数周,用前将混合液与丙酮等体积混合。
②Dragendorff(碘化铋钾试剂)试剂
检出物:
芳香族含氮化合物,如生物碱类、抗心律不齐药物。
溶液:
I.碱式硝酸铋0.85g溶于10ml冰醋酸及40ml水中;
Ⅱ.碘化钾8g溶于水20ml中。
.
将上述溶液I及Ⅱ等量混合,置棕色瓶中作为储备液,用前取储备液lml、冰醋酸2ml与水l0ml混合。
结果:
呈橘红色斑点。
③4-甲基伞形酮
检出物:
含氮杂环化合物。
溶液:
本品0.02g溶于乙醇35ml,加水至100ml。
方法:
喷板后置25%氨水蒸气的容器中,取出后于紫外灯(365nm)下观察。
④碘铂酸钾
检出物:
生物碱类及有机含氮化物。
溶液:
10%六氯铂酸溶液3ml与水97ml混合,加6%碘化钾溶液,混匀。
临用前配制。
⑤硫酸高铈铵/硫酸
检出物:
生物碱及含碘有机化物。
溶液:
硫酸铈1g混悬于4ml水中,加三氯乙酸1g,煮沸,逐滴加入浓硫酸直至混浊消失。
方法:
喷后薄层于1l0oC加热数分钟。
结果:
阿朴吗啡、马钱子碱、秋水仙碱、罂粟碱、毒扁豆碱与有机碘化物均能检出。
⑥Ehrlich(对二甲氨基苯甲醛/盐酸)试剂
检出物:
吲哚衍生物及胺类。
溶液:
1%本品的浓盐酸溶液与甲醇按1:
1混合。
方法:
喷后板于50oC加热20min。
结果:
呈不同颜色的斑点。
(7)胺类
①硝酸/乙醇
检出物:
脂肪族胺类。
溶液:
50滴65%硝酸于乙醇100ml中。
方法:
需要时120oC加热。
②2,6-二氯醌氯亚胺
检出物:
抗氧剂、酰胺(辣椒素)、伯、仲脂肪胺、仲、叔芳香胺、芳香碳氢化物、药物、苯氧基乙酸除草剂等。
溶液:
新鲜制备的0.5%~2%本品乙醇溶液。
方法:
喷后薄层于110oC加热10min,再用氨蒸气处理。
③茜素
检出物:
胺类。
溶液:
O.1%本品的乙醇溶液。
④丁二酮单肟/氯化镍
检出物:
胺类。
溶液:
I.丁二酮单肟1.2g溶于热水35ml中,加氯化镍0.95g,冷却后加浓氨水2ml;
Ⅱ.盐酸羟胺0.12g溶于200ml水中。
方法:
将溶液I及Ⅱ混合,放置1天,过滤。
⑤Pauly(对氨基苯磺酸)试剂
检出物:
酚类、胺类和能偶合的杂环化合物。
溶液:
磺酸4.5g溶于温热的12mol/L盐酸45ml中,用水稀释至500ml,取lOml于冰中冷却,加4.5%亚硝酸钠冷溶液lOml,于OoC放置15min。
用前加等体积10%碳酸钠溶液。
⑥硫氰酸钴(Ⅱ).
检出物:
生物碱、伯、仲、叔胺类。
溶液:
硫氰酸铵3g与氯化钴1g溶于水20ml。
结果:
白色至粉红色背景上呈蓝色斑点,2h后颜色消退。
假设将薄层喷水或放入饱和水蒸气容器内,可重现色点。
⑦1,2-萘醌-4-磺酸钠
检出物:
芳香胺类。
溶液:
本品0.5g溶于95ml水,加乙酸5ml,滤去不溶物即得。
方法:
喷后反应30min显色。
⑧葡萄糖/磷酸
检出物:
芳香胺类。
溶液:
葡萄糖2g溶于85%磷酸l0ml与水40ml混合液中,再加乙醇与正丁醇各30ml。
方法:
喷后于115℃加热l0min。
(8)硝基及亚硝基化合物
①α-萘胺
检出物:
3,5一二硝基苯甲酸酯、二硝基苯甲酰胺。
溶液:
I.O.5%α-萘胺乙醇溶液;
Ⅱ.10%氢氧化钾甲醇溶液。
方法:
先喷溶液I,再喷溶液Ⅱ。
结果:
呈红褐色斑点。
②二苯胺/氯化钯
检出物:
亚硝胺类。
溶液:
1.5%二苯胺乙醇溶液与0.1g氯化钯的0.2%氯化钠溶液lOOml,按5:
1混合。
方法:
喷后置紫外光(254nm)下观察。
结果:
显紫色斑点。
(9)氨基酸及肽类
①茚三酮
检出物:
氨基酸、胺与氨基糖类。
溶液:
本品O.2g溶于乙醇l00ml中。
方法:
喷后于110oC加热。
结果:
呈红紫色斑点。
②茚三酮/乙酸镉
检出物:
氨基酸及杂环胺类。
溶液:
茚三酮1g及乙酸镉2.5g溶于l0ml冰醋酸中,用乙醇稀释至500ml。
方法:
喷后于120oC加热20min。
③1,2-萘醌-4-磺酸钠
检出物:
氨基酸。
溶液:
临用前将本品O.02g溶于5%碳酸钠l00ml中。
方法:
喷后室温干燥。
结果:
不同氨基酸呈不同色点。
④靛红/乙酸锌
检出物:
氨基酸与某些肽类。
溶液:
靛红1g与乙酸锌1g溶于95%异丙醇l00ml中,加热至80oC,冷却后加乙酸1ml,冰箱保存。
方法:
喷后于80~85"C加热30min。
.
⑤茚三酮/冰醋酸
检出物:
二肽及三肽。
溶液:
1%茚三酮吡啶溶液与冰醋酸按5:
1混合。
方法:
喷后于l00oC加热5min。
⑥香草醛
检出物:
氨基酸及胺类。
溶液:
I.本品1g溶于丙醇50ml中;
Ⅱ.1mol/L氢氧化钾溶液lml,用乙醇稀释至lOOml。
方法:
先喷溶液I后于110oC干燥l0min,再喷溶液Ⅱ,于110oC再干燥l0min,于紫外光(365nm)下观察。
(10)甾类
①香草醛/硫酸
检出物:
甾体激素。
溶液:
1%香草醛浓硫酸溶液。
方法:
喷后于105℃加热5min。
②氯化锰
检出物:
雌激素类。
溶液:
氯化锰0.2g溶于含硫酸2ml的甲醇60ml中。
方法:
喷后置紫外光(365nm)下观察。
③高氯酸
检出物:
甾体激素。
溶液:
5%高氯酸甲醇溶液。
方法:
喷后于110oC加热5min,置紫外光(365nm)下观察。
④三氯化锑/乙酸
检出物:
甾类与二萜类。
溶液:
三氯化锑20g溶于乙酸20ml与氯仿60ml混合液中。
方法:
喷后于100oC加热5min,紫外光长波下观察。
结果:
二萜类斑点呈红黄-蓝紫色。
⑤对甲苯磺酸
检出物:
甾族化合物、黄酮类与儿茶酸类。
溶液:
20%本品的氯仿溶液。
方法:
喷后于100oC加热数分钟,紫外光长波下观察。
结果:
斑点呈荧光。
⑥氯磺酸/乙酸
检出物:
三萜、甾醇与甾族化合物。
溶液:
氯磺酸5ml在冷却下加乙酸l0ml溶解。
方法:
喷后于130oC加热5~l0min,置紫外光长波下观察。
结果;斑点显荧光。
(11)糖类
①茴香胺、邻苯二酸试剂
检出物:
碳氢化合物。
溶液:
1.23g茴香胺及1.66g邻苯二酸于l00ml95%乙醇中的溶液。
方法:
喷雾或浸渍。
结果:
己糖呈绿色、甲基戊糖呈黄绿色、戊糖呈紫色、糖醛酸呈棕色。
②四乙酸铅/2,7一二氯荧光素
检出物:
甙类、酚类、糖酸类
溶液:
I.2%四乙酸铅的冰醋酸溶液;
Ⅱ.1%2,7一二氯荧光素乙醇溶液。
取溶液I、Ⅱ各5ml混匀,用干燥的苯或甲苯稀释至200ml,试剂溶液只能稳定2h。
方法:
浸板。
⑧邻氨基联苯/磷酸
检出物:
糖类。
溶液:
O.3g邻氨基联苯加85%磷酸5ml与乙醇95ml。
方法:
喷板后llOoC加热15~20min。
结果:
斑点呈褐色。
④苯胺/二苯胺/磷酸
检出物:
复原糖。
溶液:
4g二苯胺、4ml苯胺与20ml85%磷酸共溶于200ml丙酮中。
方法:
喷后于85℃加热l0min。
结果:
产生各种颜色。
1,4-己醛糖、低聚糖呈蓝色。
⑤双甲酮/磷酸
检出物:
酮糖。
溶液:
双甲酮(5,5-二甲基环己烷-1,3-二酮)10.3g溶于90ml乙醇与l0ml85%磷酸中。
方法:
喷板后于110oC加热15~20min。
结果:
日光下观察,白色背景上呈黄色斑点,紫外光长波下呈蓝色荧光。
⑥联苯胺/三氯乙酸
检出物:
糖类。
溶液:
0.5g联苯胺溶于l0ml乙酸,再加10ml40%三氯乙酸水溶液,用乙醇稀释至l00ml。
方法:
喷后置紫外光下照射15min。
结果:
斑点呈灰棕-红褐色。
⑦对二甲氨基苯甲醛/乙酰丙酮
检出物:
氨基糖类。
溶液:
I.5ml50%氢氧化钾溶液与20ml乙醇混匀,取此溶液0.5ml,加乙酰丙酮0.5ml与正丁醇50ml的混合液l0ml,此两种溶液均需新鲜配制,临用前混合;
Ⅱ.1g对二甲氨基苯甲醛溶于30ml乙醇中,再加30ml浓盐酸,需要时此溶液可用正丁醇180ml稀释。
方法:
先喷I后于105oC加热5min,再喷Ⅱ,然后于90℃干燥5min。
结果:
斑点呈红色。
(12)杀虫剂
①甲基黄
检出物:
氯化杀虫剂及抗菌化合物。
溶液:
O.1g甲基黄于70ml乙醇中,加25ml水并用乙醇稀释至l00ml。
方法:
喷板后于室温干燥,并在无滤光片紫外光下照射5min。
结果:
黄色背景上呈红色斑点。
②溴/四氯化碳
检出物:
有机磷杀虫剂。
溶液:
10%溴的四氯化碳溶液。
方法:
薰溴蒸气。
③锰/水杨醛
检出物:
有机硫代磷杀虫剂。
溶液:
I.100mg氯化锰溶于100ml80%乙醇;
Ⅱ.溶解1.3g2-肼喹啉于小量热乙醇中,溶1g水杨醛于5ml乙醇并加1~2滴冰醋酸,合并两溶液并回流30min,冷却后析出水杨-2-醛-2-喹啉腙沉淀,并用乙醇重结晶。
用50mg此衍生物溶于100ml乙醇中。
方法:
等量溶液I及Ⅱ混合后,喷板。
④二苯胺/氯化锌
检出物:
氯化杀虫剂(DDT、CPCA、氯-DDT、克菌丹、甲氧氯、毒杀芬)。
溶液:
二苯胺及氯化锌各0.5g溶于100ml丙酮中。
方法:
喷后200oC加热5min。
⑤溴/荧光素/硝酸银
检出物:
杀虫剂。
溶液;I.5%溴的四氯化碳溶液;
Ⅱ.1ml0.25%荧光素的二甲基甲酰胺溶液,用乙醇稀释至50ml;
Ⅲ.1.7g硝酸银溶于5ml水中,加2-苯氧基乙醇,用丙酮稀释至200ml。
方法:
展开后的薄层置试液I容器中薰30s,取出先喷溶液Ⅱ,再喷溶液Ⅲ,再置紫外光下7min。
(13)黄酮类
①乙醇胺二苯硼酸盐
检出物:
黄酮类。
溶液:
I.1%乙醇胺二苯硼酸盐的甲醇溶液;
Ⅱ.5%聚乙二醇的乙醇溶液。
方法:
先喷溶液I,再喷溶液Ⅱ使荧光稳定,再在紫外光长波下照射2min。
结果:
紫外灯下观察荧光。
②三氯化锑
检出物:
黄酮类。
溶液:
10%三