酵母工艺与生产 化验室检验操作规程.docx

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酵母工艺与生产化验室检验操作规程

一、原辅材料的分析

（一）糖蜜及糖质原料分析

1、锤度

2、灰分

3、总糖

4、还原糖

5、色度

7、胶体物质

（二）化工原料分析

1、硫酸铵

2、尿素

3、磷酸氢二铵

4、硫酸

5、纯碱

（三）土豆淀粉的分析

1、水分的测定

2、灰分的测定

3、蛋白质的测定

4、斑点的测定

5、细度的测定

（四）乳化剂的分析

1、酸值的测定

2、皂化值的测定

3、羟值的测定

二、生产过程中的分析

（一）纯种培养种子分析

1、糖度

2、酸值与PH

3、残余还原糖

4、酵母湿重

5、酵母成熟标准的确定

（二）流加糖分析

1、非发酵性还原物质和可发酵性糖的测定

2、可发酵性氮

（三）发酵液分析

三、酵母成品分析

1、水分分析

2、灰分分析

3、酸度分析

4、蛋白质分析

5、五氧化二磷分析

6、海藻糖分析

7、发酵力（高糖、低糖、无糖）分析

8、粗脂肪分析

四、酵母生产废水的测定

1、总固形物

2、酸度的测定

3、化学需氧量

一、原辅材料的分析

（一）糖蜜及糖质原料分析

一、锤度

1．仪器：

比重计、糖度计

2．操作步骤：

将200g糖蜜与等重量的蒸馏水均匀混合，调节温度至20℃，补加蒸馏水至总重正好为糖蜜重量的2倍，测定温度。

将测定值（Bg或°Bx）乘以因子2即得未稀释糖蜜的密度。

糖蜜检测中视检测糖蜜的浓度，若浓度高，则还可稀释，如100g糖蜜加水至400g，这样测量值应乘以4。

由于密度和温度相关，所以表示密度应在标准温度下，即在20℃情况下，高于或低于此温度，均要加一个修正值。

二、灰分

1．仪器：

分析天平（0.1mg）、坩埚（30mL）、马弗炉（800℃）、本生灯、干燥器等

2．试剂：

浓硫酸（AR）

3．操作步骤：

（1）先把干净的坩埚放在800℃高弗炉中保温15min，取出冷至200℃左右后放在干燥器中冷却至室温。

（2）对冷却的坩埚称重，精确至0.1mg，然后称取3.0g的糖蜜。

（3）在糖蜜中加入0.5mL浓硫酸，水平振荡仪上振荡混合，使硫酸和糖蜜充分混合。

（4）用本生灯把糖蜜烧成灰烬，注意调节本生灯火焰温度，防止杯中糖蜜起泡。

（5）待杯中糖蜜灰化后，把坩埚放到约550℃的高弗炉中，直到前面形成的炭黑完全氧化，不留痕迹。

（6）从高弗炉中取出坩埚，放在空气中冷却，加入3滴浓硫酸，再把它放到800℃的高弗炉中。

（7）在800℃保温30min后，把坩埚从高弗炉中取出，放在干燥器中冷却，称重，然后再放回高弗炉中800℃保持15min，取出放在干燥器中冷却称重，直至坩埚恒重。

大多数情况下，30min的保温能使样品重量在0.5mg范围内波动。

（8）从灰分的重量数据即可计算出原糖蜜中灰分的重量百分比，这种灰分一般被认为是硫酸盐。

三、总糖

1．原理

　　首先将试样进行处理，使用中型醋酸铅和脱铅剂将试样中的可还原性的非糖分及钙盐等杂质清除干净，然后用盐酸使双糖转化为还原性单糖，单糖在一定碱度的斐林溶液中使二价铜还原为一价铜，从而求出糖蜜中的总糖。

2．仪器：

分析天平（0.1mg）、容量瓶（100mL）、吸管（5mL）、漏斗、移液管（50mL、5mL）、温度计、三角瓶（150mL）、滴定管（50mL）、电炉

3．试剂：

（1）中性醋酸铅溶液：

称取中性醋酸铅250g，加蒸馏水500mL搅拌使溶解，静置，倾去上清液，沉淀过滤，将清液及过滤液混合后，逐滴加入醋酸，使呈中性或微酸性，用石蕊试纸为指示剂

（2）脱铅剂：

称取十二水磷酸氢二钠70g和草酸钾（K2C2O4.H2O）30g,用少量蒸馏水分别溶解，并不断搅拌，溶解后，将两种溶液混合，用蒸馏水稀释至1000mL，混匀

（3）盐酸（AR，4mol/L溶液）：

量取盐酸340mL慢慢注入约600mL的蒸馏水中，混匀，然后定容至1000mL

（4）酚酞指示剂（1g/L）：

称取酚酞0.10g，溶于95%乙醇，并用乙醇稀释至100mL，混匀

（5）氢氧化钠（AR，4mol/L溶液）：

称取150gNaOH，溶于150mL蒸馏水中，混匀，装入聚乙烯容器中，密闭放置至溶液清亮，用塑料管吸上清液208mL，注入1000mL无CO2的水中，摇匀

（6）次甲基蓝指示剂（10g/L）：

称取次甲基蓝1g，加水100mL，加热使溶解，贮存于棕色瓶中

（7）斐林溶液：

①斐林氏甲液：

称取硫酸铜（CuSO4.5H2O）69.2g，加水溶解并稀释至1000mL，混匀过滤

②斐林氏乙液：

称取酒石酸钾钠346g，NaOH100g，加适量水溶解，稀释至1000mL，放置2日，如液面降低，补加水至刻度，然后过滤

（8）标准转化糖溶液（1g/100mL）：

精确称取纯蔗糖9.5000g，用少量水溶解，并转移至1000mL容量瓶中，加浓盐酸5mL，轻轻摇匀，在20℃时放置2～3d，低于20℃放置8d，然后加水至约800mL，加入2g已用水溶解的苯甲酸，再稀释至刻度，摇匀

（9）标准转化糖溶液（0.20g/100mL）：

用50mL移液管准确吸取标准糖转化溶液（1g/100mL）50.00mL于250mL容量瓶中，用NaOH溶液中和至中性，再加水至刻度，摇匀

（10）斐林溶液的标定：

用5mL移液管分别吸取斐林氏甲、乙液各5.00mL于250mL三角瓶中，摇匀，由滴定管加入0.2g/100mL的标准转化糖24mL，轻轻摇匀，于电炉加热至溶液沸腾，再准确煮沸2min，加入次甲基蓝指示剂2滴，在糖液保持沸腾的情况下小心从滴定管继续加转化糖，至次甲基蓝的蓝色刚消失为止，即为终点。

整个滴定过程溶液必须保持沸腾，且滴定终点应在加入次甲基蓝后1min内达到

斐林氏溶液浓度系数按下式计算：

　　　　　　　　　　　　　K=V

25.00

式中：

K——斐林氏溶液浓度系数

V——标准转化糖溶液（0.2g/100mL）的用量，mL

4．操作步骤：

（1）试液的准备：

用分析天平称取糖蜜试样2.0g（称准至0.0001g），用蒸馏水溶解于100mL容量瓶中，加入中性醋酸铅溶液2.0mL～2.5mL，加水至刻度，摇匀后放置1～2min，摇匀，过滤，弃去少量初滤液，继续收集滤液，用50mL移液管吸取滤液50mL放入100mL容量瓶中，加入脱铅剂5mL后，再加水至刻度，摇匀，过滤，弃去少许初滤液，继续收集滤液，用50mL移液管吸取此滤液50mL放入100mL容量瓶内。

（2）试液的转化及中和：

在上述容量瓶中加入盐酸（4mo1/L）10mL，用少许蒸馏水清洗其颈部的盐酸，插入0～100℃温度计，摇匀后在水浴中加热，待瓶内温度达到68℃时起计算转化时间，控制在66～68℃之间转化10min，转化期间应间断摇动。

转化完毕后，用流动冷水冷却至室温，取出温度计，温度计所附着的糖液用少量蒸馏水洗入容量瓶内，加入酚酞指示剂（1g/L）2滴，用NaOH（4mo1/L）中和至微红，再冷却至室温，加水至100mL，摇匀备用。

（3）试液的滴定：

用试液将移液管内壁冲洗两次，然后加入试液备用。

用5mL移液管准确吸取斐林氏甲、乙液各5.00mL于250mL的三角瓶中，然后加入蒸馏水约25mL（加水量应使滴定完毕后的总容量为60mL，如预滴定试液为25mL，斐林氏混合液为10mL，则加水量为25mL，如预滴定试液为20mL，则加水量为30mL），用滴定管加入相当还原物质50mg左右的检液（可用上次分析结果来预测）。

在电炉上加热至沸腾并准确保持沸腾2min，然后立即加入次甲基蓝指示液（10g/L）2滴，（此时应呈蓝色，若为红色，即为滴入试液过多，应重新滴定），在沸腾状态下，从滴定管徐徐滴入试液，使沸腾的试液由蓝色变为紫色，再变为红色，即为终点。

此项滴定操作在1min内完成，使整个煮沸时间控制在3min内，记下滴定耗用试液的毫升数。

此项滴定操作应重复两次，第一次预滴定是试液的大约数，第二次为滴定试液滴定数，第二次于煮沸前加入三角瓶的试液数量比第一次预滴定量少0.5～1.0mL作为终点滴定之用。

5．结果计算：

试样中总糖的含量按下式计算：

　　　　　　　　　　X1=0.05×F×100

　　　　　　　　　V×G/400

式中：

X1——糖蜜中总糖的百分含量，%

0.05——10mL斐林氏混合液相当的总糖的质量，g

F——斐林氏混合液的浓度系数

V——滴定耗用试液的量，mL

G——试样质量，g

G/400——（G/100）·（50/100）·（50/100）

6．注意事项：

中性醋酸铅用量应以沉淀完全、获得清晰透明的溶液为准。

过多、过少均影响分析结果的准确性，一般情况每克糖蜜用量1mL左右即可。

过剩的铅和钙均影响分析结果偏低，所以必须完全除净铅和钙。

操作时在加入脱铅剂以后，静置3～4min，然后于上清液中再添加1～2滴脱铅剂，若发生浑浊即脱铅剂用量不足，若不发生浑浊即表示脱铅剂用量合适。

转化时，要注意掌握转化时酸的浓度和用量、温度和时间，过高过低均影响分析结果。

如温度超过69℃，果糖就要破坏。

反应时温度需要一致，电炉温度恒定后才能进行加热，并控制在2min内沸腾，否则煮沸时间就会改变，引起蒸发量的改变，使反应液浓度发生变化，从而引入误差。

次甲基蓝易被还原为无色，但与空气接触又氧化成蓝色，所以在滴定过程中，应保持沸腾状态，使瓶内不断逸出水蒸气，以防止空气进入瓶内氧化次甲基蓝而影响终点的判断。

次甲基蓝是氧化—还原反应的指示剂，本身能参加反应，即一定量的还原糖能还原一定量的次甲基蓝溶液，所以过早加入与加量过多也会引入滴定误差。

斐林试剂吸量要准确，特别是甲液，因起反应的是二价铜，吸量不准就会引入较大误差。

滴定产物中氧化亚铜极不稳定，易被空气氧化而增加耗糖量，故滴定时不能随意摇动三角瓶，更不能从电炉上取下后再进行滴定。

滴定速度需一致，一般以4～5s一滴的速度进行。

滴定速度过快，消耗糖量增加，反之消耗糖量减少。

试样水解后应立即冷却，并用碱中和，因在强酸性或强碱性溶液中会有部分糖被分解。

四、还原糖

1．原理

样品经除蛋白质后，在加热条件下,直接滴定已标定过的斐林氏液，斐林氏液被还原析出氧化亚铜后，过量的还原糖立即将次甲基蓝还原，使蓝色褪色。

根据样品消耗体积，计算还原糖量。

2．试剂：

（1）斐林氏甲液：

称取15g硫酸铜（CuSO4·5H2O）,及0.05g次甲基蓝，溶于水中并稀释至1L。

（2）斐林氏乙液：

称取50g酒石酸钾钠与75gNaOH，溶于水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000mL，贮存于橡胶塞玻璃瓶内

（3）乙酸锌溶液：

称取21.9g乙酸锌，加3mL冰乙酸，加水溶解并稀释至100mL

（4）亚铁氰化钾溶液：

称取10.6g亚铁氰化钾，用水溶解并稀释至100mL

（5）盐酸

（6）葡萄糖标准溶液：

精密称取1.000g经过98～100℃干燥至恒量的纯葡萄糖，加水溶解后加入5mL盐酸，并以水稀释至1L。

此溶液相当于1mg/mL葡萄糖

3．操作步骤：

（1）样品处理：

称取2.0g（称准至0.0002g）样品，置于250mL容量瓶中，加入50mL蒸馏水，溶解后边摇边慢慢加入5mL乙酸锌溶液及5mL10.6%亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，混匀。

静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液20mL，滤液供测定用。

（2）标定斐林氏液溶液：

吸取5.0mL斐林氏甲液及5.0mL乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加约9mL葡萄糖标准溶液，控制在2min内加热至沸，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录消耗的葡萄糖标准溶液总体积，平行操作三份，取其平均值，计算每10mL（甲、乙液各5mL）斐林氏溶液相当于葡萄糖的质量（mg）。

（3）样品溶液预测：

吸取5mL斐林氏甲液及5.0mL乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，控制在2min内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加样品溶液，并保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以每秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色褪去为终点。

如果样品液颜色较深，滴定终点则为蓝色褪去，出现明亮颜色（如亮红），记录消耗样液的总体积。

（4）样品溶液测定：

吸取5.0mL斐林氏甲液及5.0mL乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，从滴定管中滴加比预测体积少1mL的样品溶液，使在2min内加热至沸，然后趁沸继续以每两秒1滴的速度滴定直至终点。

记录消耗样液的总体积，同法平行操作2～3份，得出平均消耗体积。

4．结果计算：

还原糖的计算：

　　　　　　X1=C×V1×V×100

m×V2×1000

式中：

X1——样品中还原糖的含量（以葡萄糖计），%

C——葡萄糖标准溶液的浓度，mg/mL

V1——滴定10mL斐林氏溶液（甲、乙液各5mL）消耗葡萄糖标准溶液的体积，mL

V2——测定时平均消耗样品溶液的体积，mL

V——样品定容体积，mL

m——样品质量，g

五、总氮

1．原理：

糖蜜与浓硫酸在催化剂作用下加热消化，有机物发生分解，其中氮先生成氨再与浓硫酸作用生成硫酸铵，硫酸铵在碱性溶液中加热放出氨，用硼酸溶液接收，最后用硫酸标准溶液滴定，以此计算总氮的含量。

2．仪器：

消化装置、凯氏定氮仪、滴定装置、分析天平（0.1mg）、消化管、容量瓶（100mL）、三角瓶（250mL）、移液管（25mL）

3．试剂：

消化粉Se:

K2SO4=0.1:

100（W）

H2SO4（AR）

NaOH（30%）

硼酸（3%）

甲基红—溴甲酚绿混合指示溶液：

1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合

硫酸标准溶液：

C（1/2H2SO4）=0.1mol/L

4．操作步骤：

（1）称取试样5g（称准至0.0002g）于凯氏烧瓶中，加入消化粉2.5g，沿壁缓缓加入20mL硫酸，然后置电炉上缓缓加热，使溶液的温度保持在沸点以上，等泡沸停止，调高温度至沸腾，消化至溶液澄清。

（2）取下凯氏烧瓶，稍冷，冷却，用30mL蒸馏水冲洗瓶颈，放冷，然后移入100mL容量瓶中，用少量蒸馏水冲洗消化管3次，洗液并入容量瓶中，最后加蒸馏水至刻度，摇匀，即得消化液。

该消化液在糖蜜中总磷的检测时将会用到。

（3）用25mL移液管准确吸取消化液25mL至凯氏定氮仪蒸馏管中，连接好定氮仪装置，打开冷却水。

在三角瓶加入25mL3%硼酸，加入4～5滴混合指示剂，作为接收液，将接收氨液的导管伸入液面以下。

而凯氏定氮仪蒸馏管中加入25mL30%NaOH溶液，加热蒸馏，直到三角瓶中收集液达到150～200mL时，停止加热，用蒸馏水吹洗冷凝管，同时将洗涤液收集在接收液中。

用0.1mol/L硫酸标准溶液滴定颜色由绿色变为红色，即为终点。

（4）按以上方法做空白样。

5．结果计算：

试样中总氮含量按下式计算：

X=C（V1—V2）×0.01401×100

W×25

100

式中：

X——试样中总氮百分含量，%

C——硫酸标准溶液的浓度，mol/L

V1——试样消耗硫酸标准溶液的体积，mL

V2——空白消耗硫酸标准溶液的体积，mL

0.01401——与1.00mL硫酸标准溶液相当的以克表示的氮的质量，g

W——试样的质量，g

在检测过程中注意，在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值，不得超过算术平均值的1%。

六、总磷（以P2O5计）

1．原理：

糖蜜中的有机磷经消化后生成无机磷，无机磷与钼酸铵及还原剂在一定条件下生成一种蓝色溶液，符合郎伯—比尔定律，于分光光度计700nm处测定吸光度，以此计算磷的含量。

2．仪器：

721分光光度计、5mL刻度吸管、容量瓶（100mL）

3．试剂：

（1）钼酸铵溶液（6%）

（2）还原剂：

将0.2%米吐尔溶液、1%亚硫酸钠溶液、30%焦硫酸钠溶液等体积混合，摇匀

（3）磷标准液：

精确称取0.191g于105℃烘至恒重的磷酸氢二钾，加水溶解后移至500mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，此溶液1mL相当0.2mgP2O5。

4．操作步骤：

（1）取3个100mL容量瓶，按空白、标准、样品分别编号，再按下面顺序称取试剂分别放于三个容量瓶中。

见表：

空白

标准

样品

加磷标准液3.0mL

加消化液5.0mL

（前面测总氮时的消化液）

加2.5mol/L的硫酸3mL

同空白

加水至约50mL

同空白

同空白

加钼酸铵溶液3mL

同空白

同空白

加还原剂3mL

同空白

同空白

加水定容至100mL

同空白

同空白

（2）摇匀，于暗处放置1h，以空白做对照，于721分光光度计700nm处测吸光度。

5、结果计算：

试样中的总磷含量按下式计算：

X=E1/E2×3×0.2×100

W×5/100×1000

式中：

X——试样中五氧化二磷的百分含量，%

E1——试样的吸光度

E2——P2O5标准的吸光度

3——吸取P2O5标准溶液的量，mL

0.2——P2O5标准溶液的浓度，g/L

W——试样的质量，g

5/100——试样稀释系数

七、胶体物质

1．仪器：

离心机、电炉、干燥箱等

2.操作步骤：

（1）充分混匀原糖蜜样，如果糖蜜太稠，可用60℃的水浴加热搅匀。

（2）取混匀的100mL原糖蜜样，加入100mL蒸馏水，搅匀，在3000r/min离心机上离心20min。

（3）离心后将上清液放入300mL三角瓶的烧杯中用H2SO4调PH至5.0，把此混合物加热至沸腾，然后冷却至室温。

（4）混合物离心，倒掉上清液，用50mL蒸馏水洗涤沉淀物,再离心,倒掉上清液,将沉淀用8mL蒸馏水洗出倒入一事先称重的10mL的离心管中，再离心，离心后倾去上清液，将离心管放入105℃干燥箱干燥后称重，然后减去离心管重量，再换算,结果即为糖蜜中的胶体物质含量。

（二）化工原料分析

一、硫酸铵（N源）

一般使用的硫酸铵氮含量＞20.8%，水分≤1.0%，砷含量≤0.5mg/kg，铅含量≤5mg/kg。

检测方法：

1．外观：

白色或浅色结晶（无结块）。

2．水分的测定：

（1）仪器：

电热干燥箱、称量瓶、干燥箱、分析天平等

（2）操作步骤：

用烘干至恒重的称量瓶称取样品5g（准确至0.0002g），置于（103±2）℃电热干燥箱中，烘干2h，取出，加盖，放入干燥器内，冷却至室温，称重。

（3）结果计算：

X=（m1-m2）×100

m1-m

式中：

X——样品的干燥失重，%

m——称量瓶的质量，g

m1——干燥前，称量瓶加样品的质量，g

m2——干燥后，称量瓶加样品的质量，g

所得结果表示至少一位小数。

允许误差，平行实验测定值之差不超过0.05%。

3．总氮的测定:

（1）原理：

硫酸铵在碱性溶液中蒸馏出氨，用3%的硼酸溶液吸收，在指示剂存在下，用硫酸标准溶液滴定。

（2）试剂：

200g/LNaOH溶液

0.5mol/L硫酸标准溶液

甲基红—溴甲酚绿混合指示剂

3%硼酸：

称取硼酸3.0g，溶于蒸馏水中，并稀释至100mL

（3）操作步骤：

准确称取0.7g试样（称准至0.0002g）于凯氏定氮仪蒸馏管中，连接好定氮仪装置，打开冷却水。

在三角瓶加入25mL3%硼酸，加入4～5滴混合指示剂，作为接收液，将接收氨液的导管伸入液面以下。

向凯氏定氮仪蒸馏管中加入25mL200g/LNaOH溶液，加热蒸馏，直到三角瓶中收集液达到150～200mL时，停止加热，用蒸馏水吹洗冷凝管，同时将洗涤液收集在接收液中。

将三角瓶中溶液摇匀，用0.5mol/L硫酸标准溶液滴定，直至指示剂绿色变为酒红色。

滴定时要仔细摇动，以保证溶液充分混匀。

按上述步骤进行空白实验，除不加入样品外，其它操作与测定样品时相同。

（4）结果计算：

硫酸铵中氮（N）含量（以干基）的质量百分数表示，由下式计算：

N%=（V2-V1）×C×0.01401×100

m×100-X

100

式中：

V1——滴定空白用去硫酸标准溶液的体积，mL

V2——滴定试样用去硫酸标准溶液的体积，mL

m——试样的质量，g

C——硫酸标准溶液的浓度，mol/L

0.01401——与1mL硫酸标准溶液【C（1/2H2SO4）=0.1mol/L】相当于氮的质量，g

X——试样中水分的含量，%

允许误差：

平行测定结果的绝对差值≤0.1%。

4．砷的测定：

按GB/T5009-11《食品中总砷及无机砷的测定》进行测定。

5．铅的测定：

按GB/T5009-12《食品中总铅的测定》进行测定。

二、尿素（N源）

一般使用的尿素氮含量＞46%，砷含量≤1mg/kg，铅含量≤10mg/kg。

检测方法：

1．外观：

白色或浅色颗粒或结晶（无结块）。

2．总氮的测定：

（1）原理：

有硫酸铜存在下，在浓硫酸中加热使试料中的氮转化为氨，蒸馏并用过量硫酸溶液吸收，在指示剂的存在下，用氢氧化钠标准滴定溶液滴定。

（2）试剂：

NaOH溶液：

约450g/L

浓硫酸

硫酸溶液：

【C（1/2H2SO4）=0.5mol/L】或【C（1/2H2SO4）=1.0mol/L】

甲基红—亚甲基蓝混合指示剂

五水硫酸铜（CuSO4·5H2O）

NaOH标准滴定溶液：

C（NaOH）=0.5mol/L

（3）样液制备：

称取约5g样品，称准至0.001g，移入凯氏烧瓶中。

在盛有试样的凯氏烧瓶中加入25mL水，50mLH2SO4，0.5gCuSO4·5H2O，在通风橱内缓慢加热，使CO2逸尽，然后逐步提高加热温度，直至冒白烟，再继续加热20min，取下待冷却后小心地加入300mL水，冷却。

把凯氏烧瓶中的溶液定量地转入500mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀。

（4）蒸馏：

从容量瓶中移取50.0mL溶液于蒸馏瓶中。

移取40.0mL【C（1/2H2SO4）=0.5mol/L】或20mL【C（1/2H2SO4）=1.0mol/L】硫酸溶液至锥形瓶中，加入4～5滴混合指示剂。

连接好蒸馏装置，将接收氨液的导管稍稍伸入接收液面以下。

向烧瓶中加入NaOH溶液，以中和溶液并过量25mL，与冷凝管接好。

加热蒸馏，直到锥形瓶中收集液达到250～300mL时，停止加热，用蒸馏水吹洗冷凝管，同时将洗涤液收集在接收液中。

（5）滴定：

将接收液摇匀，用NaOH标准滴定溶液滴定，直至指示液呈灰绿色。

滴定时要使溶液充分混匀。

（6）按上述步骤进行空白实验，除不加入样品外，其它操作与测定样品时相同。

（7）结果计算：

总氮（N）含量以重量百分数表示，由下式计算

N%=（V2-V1）×C×0.01401×100

50×G

500

式中：

V1——滴定用去NaOH标准滴定溶液的体积，mL

V2——空白试验时，用去NaOH标准滴定溶液的体积，mL

G——尿素试样的质量，g

C——NaOH标准滴定溶液的浓度，mol/L

0.01401——与1mLNaOH标准滴定溶液【C（NaOH）=1.0000mol/L】相当的，以克表示的氮的质量

取平行结果的算术平均值作为测定结果，所得结果表示至二位小说。

（8）允许误差：

平行测定结果的绝对差值≤0.10%；不同实验室测定结果的绝对差值≤0.15%。

3．砷的测定：

按GB/T5009-11《食品中总砷及无机砷的测定》进行测定。

4．铅的测定：

按GB/T5009-12《食品中总铅的测定》进行测定。

三、磷酸氢二铵（P源）

一般使用的（NH4）2HPO4含量≥98%，砷含量≤1mg/kg，铅含量≤10mg/kg。

检测方法：

1．外观：

无色结晶。