整理miRNAqRT.docx

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整理miRNAqRT

miRNAqRT-PCR引物

Bulge-Loop™miRNAqRT-PCR是锐博生物开发的成熟miRNA检测方法，不需荧光探针，只要SYBRGreen即可，具有高灵敏度和特异性的优点。

检测包括两个步骤：

（1）基于茎凸环结构引物的逆转录反应和

（2）实时荧光定量PCR。

茎凸环结构的逆转录引物能与miRNA3'端部分结合，在逆转录酶的作用下进行逆转录反应，然后特异的正反向引物和SYBRGreen荧光染料共同参与的定量PCR反应体系，实现对逆转录产物进行定量检测。

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Bulge-Loop™miRNAqRT-PCRPrimer

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miRNA是一类内源性非编码小RNA分子，长约20-23个核苷酸，预测有1/3的人类基因被miRNA调控，并且在物种间有非常高的同源性。

研究表明，miRNA参与了几乎所有生命活动，包括细胞增殖和凋亡、器官生成、个体发育、造血、脂肪代谢等。

目前，miRNA检测方法包括Biochip，qPCR，NorthernBlots和micro-array。

虽然qPCR是高灵敏性的方法之一，但是基于荧光探针的qPCR检测价格昂贵。

Bulge-LoopTMmiRNAqRT-PCR是锐博生物开发的成熟miRNA检测方法，不需荧光探针，只要SYBRGreen即可，具有高灵敏度和特异性的优点。

检测包括两个步骤：

（1）基于茎凸环结构引物的逆转录反应和

（2）实时荧光定量PCR。

茎凸环结构的逆转录引物能与miRNA3端部分结合，在逆转录酶的作用下进行逆转录反应，然后特异的正反向引物和SYBRGreen荧光染料共同参与的定量PCR反应体系，实现对逆转录产物进行定量检测。

◇       特异性—hsa-let-7家族成员同源性极高（表1），彼此之间仅有单个或数个碱基的差异。

传统检测方法对此无能为力，无法区分各个家族成员。

但Bulge-LoopTMmiRNA定量PCR方法采用了具有茎凸环结构的逆转录引物以及高特异的miRNA引物套装，保证了该方法的高度特异性，即使是高度同源的miRNA也能被准确检测。

表1：

hsa-let-7家族：

红色标示的是与hsa-let-7a不同的碱基

图1 Bulge-LoopTMmiRNA定量检测has-let-7家族成员的融解曲线

针对hsa-let-7家族7个miRNA成员的Bulge-LoopTMmiRNA定量PCR结果分析表明，hsa-let-7家族各成员的特异性引物对其他成员的干扰极小，绝大部分均可以区分开来（下表：

以7个化学合成的miRNA为模板，归一化处理后的定量检测结果）。

      与一般的miRNA检测方法不同，Bulge-LoopTM茎凸环结构引物可以在同一个试管进行1-45个逆转录反应，而不影响检测效果。

Bulge-LoopTMmiRNA实时定量PCR具有检测范围广、更快速，更灵敏，更省钱的优点；既能够准确定量低至0.1pg总RNA中5个拷贝数的miRNA，也能够实现从1µg总RNA中精确定量检测高拷贝数的miRNA，即miRNA的拷贝数在7个数量级的动态变化范围内，均可实现准确定量的目的。

◇高灵敏度—能够准确定量0.1pg总RNA中，最低量至5个拷贝的目标miRNA，具有一个7个数量级的动态变化范围。

比传统的miRNA定量检测方法（如Northernblot和micro-array）具有更宽广的动态变化范围，无需担心因样品量少或者miRNA表达量低而无法精确检测。

图3 高灵敏度：

低至5个拷贝的目标miRNA都能被检测出来

 ◇准确性—Bulge-LoopTMmiRNA实时定量PCR可以验证微阵列表达谱数据的准确性。

尽管只有少量的样品，该方法也能有效地检测出miRNA的表达量，而且重复性高。

图2以化学合成的has-let-7a为模板，进行梯度稀释后的定量检测

         Bulge-LoopTMmiRNAqPCRPrimerSet是一个包含了miRNA特异的逆转录引物，以及PCR正反向引物的套装。

具有茎凸环结构状的miRNA特异逆转录引物以及高度特异的正反向引物使得Bulge-LoopTMmiRNAqPCR反应避免了miRNA前体的干扰，而反应的模板可以是总RNA或已纯化的miRNA分离物。

通常U6snRNA或5SrRNA作为miRNA检测的内参，适用于单个或多个样品不同miRNA的相对定量，而当您想知道一个细胞中miRNA的绝对数量时，可以使用化学合成的

miRNA

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miRNAinhibitor

miRNAinhibitor是化学修饰的miRNA抑制物，通过特异地靶向抑制某个miRNA分子，可以削弱内源miRNA的基因沉默效应，提高蛋白表达量，进行功能缺失性（loss-of-function）研究，可以用来筛选miRNA靶位点，筛选调控某一基因表达的miRNA，筛选影响细胞发育过程的miRNA。

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miR-Ribo™miRNAinhibitor

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miRNAinhibitor是化学修饰的miRNA抑制物，通过特异性抑制某个miRNA分子，可以削弱细胞中miRNA的基因沉默效应，进行功能缺失性（loss-of-function）研究。

它们可以用来筛选miRNA靶位点，筛选调控某一基因表达的miRNA，筛选影响细胞发育过程的miRNA。

图1运用EdU方法检测miRNAinhibitor对细胞周期的影响

miR-Ribo™miRNAinhibitorNegativeControl

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miR-Ribo™miRNAinhibitorNegativeControl选用的是C.elegans的miRNA，经过BLAST分析表明其与人、小鼠、大鼠的基因组，以及miRBase14.0中所有miRNA具有最小的同源性，适用于人、小鼠、大鼠的miRNA实验阴性对照。

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客户设计的miRNAinhibitor，可以加上各种修饰

miRNAPrecusor

miRNAPrecusor是化学方法制备的miRNA前体分子，可以进行荧光标记。

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miRNA一般由发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过酶加工后形成具有功能的miRNA成熟分子，锐博生物能够为您化学合成70nt以下的miRNAPrecusor。

miRNAagomir

Agomir是经过甲基化、硫代、胆固醇修饰的miRNA激动剂，在动物体内具有更高的稳定性。

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miR-Ribo™miRNAagomir

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Agomir是经过甲基化、胆固醇等特殊化学修饰的特殊的miRNAmimics，在动物体内具有更高的稳定性和抑制效果。

miR-Ribo™miRNAagomirNegativeControl

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miR-Ribo™miRNAagomirNegativeControl选用的是C.elegans的miRNA，经过BLAST分析表明其与人、小鼠、大鼠的基因组，以及miRBase14.0中所有miRNA具有最小的同源性，适用于人、小鼠、大鼠的miRNA实验阴性对照。

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miRNAantagomir

Antagomir是经过甲基化、硫代、胆固醇修饰的miRNA拮抗剂，在动物体内具有更高的稳定性和抑制效果。

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miR-Ribo™miRNAantagomir

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Antagomir是经过甲基化、硫代、胆固醇修饰的miRNA拮抗剂，适用于动物实验。

miR-Ribo™miRNAantagomirNegativeControl

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miR-Ribo™miRNAantagomirNegativeControl选用的是C.elegans的miRNA，经过BLAST分析表明其与人、小鼠、大鼠的基因组，以及miRBase14.0中所有miRNA具有最小的同源性，适用于人、小鼠、大鼠的miRNA实验阴性对照。

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miRNALibrary

公司提供miRbase14.0中人的所有miRNAmimics和miRNAinhibitors，经济实惠，使用方便。

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miR-Ribo™miRNAmimicsLibrary（Rat）

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 miR-Ribo™miRNAmimicsLibrary（Rat）包含miRBase14.0中Rat的388个miRNAmimics，于96孔板储存。

miR-Ribo™miRNAmimics和inhibitor文库可加速生物通路中miRNA的功能研究，这些生物通路包括：

∙代谢途径（MetabolicPathways）

∙生物发育（DevelopmentalPathways）

∙细胞生长（CellGrowth）

∙组织发育（TissueDevelopment）

∙癌细胞分化和增殖（CancerCellDifferentiationandDevelopment）

∙干细胞分化（StemCellDifferentiation）

miR-Ribo™miRNAinhibitorLibrary（Rat）

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 miR-Ribo™miRNAmimicsLibrary（Rat）包含miRBase14.0中Rat的388个miRNAinhibitor，于96孔板储存。

miR-Ribo™miRNAmimics和inhibitor文库可加速生物通路中miRNA的功能研究，这些生物通路包括：

∙代谢途径（MetabolicPathways）

∙生物发育（DevelopmentalPathways）

∙细胞生长（CellGrowth）

∙组织发育（TissueDevelopment）

∙癌细胞分化和增殖（CancerCellDifferentiationandDevelopment）

∙干细胞分化（StemCellDifferentiation）

miR-Ribo™SelectionmiRNASet-20miRNAinhibitor

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锐博生物可以根据您的需要定制miRNA组合文库（包含miRBase12.0中人、小鼠、大鼠的所有miRNA，需20个以上miRNA起订）

miR-Ribo™miRNAinhibitorLibrary（Mouse）

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 miR-Ribo™miRNAmimicsLibrary（Mouse）包含miRBase14.0中Mouse的710个miRNAinhibitor，于96孔板储存。

miR-Ribo™miRNAmimics和inhibitor文库可加速生物通路中miRNA的功能研究，这些生物通路包括：

∙代谢途径（MetabolicPathways）

∙生物发育（DevelopmentalPathways）

∙细胞生长（CellGrowth）

∙组织发育（TissueDevelopment）

∙癌细胞分化和增殖（CancerCellDifferentiationandDevelopment）

∙干细胞分化（StemCellDifferentiation）

miR-Ribo™miRNAmimicsLibrary（Mouse）

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 miR-Ribo™miRNAmimicsLibrary（Mouse）包含miRBase14.0中Mouse的710个miRNAmimics，于96孔板储存。

1.建设项目环境影响报告书的内容miR-Ribo™miRNAmimics和inhibitor文库可加速生物通路中miRNA的功能研究，这些生物通路包括：

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∙4.广泛参与原则。

代谢途径（MetabolicPathways）

∙生物发育（DevelopmentalPathways）

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（2）可能造成轻度环境影响的建设项目，编制环境影响报告表，对产生的环境影响进行分析或者专项评价；细胞生长（CellGrowth）

∙组织发育（TissueDevelopment）

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∙专项规划工业、农业、畜牧业、林业、能源、水利、交通、城市建设、旅游、自然资源开发有关的专项规划。

环境影响报告书癌细胞分化和增殖（CancerCellDifferentiationandDevelopment）

∙干细胞分化（StemCellDifferentiation）

B.可能造成重大环境影响的建设项目，应当编制环境影响报告书

miR-Ribo™miRNAinhibitorLibrary（Human）

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∙三、规划环境影响评价产品说明

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∙（3）评价单元划分应考虑安全预评价的特点，以自然条件、基本工艺条件、危险、有害因素分布及状况便于实施评价为原则进行。

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（1）前期准备工作。

包括明确评价对象和评价范围，组建评价组，收集国内外相关法律、法规、规章、标准、规范，收集并分析评价对象的基础资料、相关事故案例，对类比工程进行实地调查等内容。

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三、规划环境影响评价 miR-Ribo™miRNAmimicsLibrary（Human）包含miRBase14.0中Human的904个miRNAmimics，于96孔板储存。

miR-Ribo™miRNAmimics和inhibitor文库可加速生物通路中miRNA的功能研究，这些生物通路包括：

∙代谢途径（MetabolicPathways）

∙生物发育（DevelopmentalPathways）

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∙『正确答案』B细胞生长（CellGrowth）

∙组织发育（TissueDevelopment）

∙癌细胞分化和增殖（CancerCellDifferentiationandDevelopment）

∙干细胞分化（StemCellDifferentiation）

miR-Ribo™miRNAmimicsLibrary（Human）

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 miR-Ribo™miRNAmimicsLibrary（Human）包含miRBase14.0中Human的904个miRNAmimics，于96孔板储存。

miR-Ribo™miRNAmimics和inhibitor文库可加速生物通路中miRNA的功能研究，这些生物通路包括：

∙代谢途径（MetabolicPathways）

∙生物发育（DevelopmentalPathways）

∙细胞生长（CellGrowth）

∙组织发育（TissueDevelopment）

∙癌细胞分化和增殖（CancerCellDifferentiationandDevelopment）

∙干细胞分化（StemCellDifferentiation）

miR-Ribo™SelectionmiRNA

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锐博生物可以根据您的需要定制miRNA组合文库（包含miRBase14.0中人、小鼠、大鼠的所有miRNA，需20个以上miRNA起订）