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中国药科大学本科生毕业论文（设计）

金线莲总黄酮测定方法的研究

目录

摘要…………………………………………………………………………………………3

前言………………………………………………………………………………………………5

第一章材料……………………………………………………………………………………7

1.1药物和试剂………………………………………………………………………………7

1.2主要仪器…………………………………………………………………………………7

1.3供试品……………………………………………………………………………………7

第二章HPLC分析黄酮苷成分…………………………………………………………8

2.1色谱条件…………………………………………………………………………………8

2.2检测波长的选择………………………………………………………………………8

2.3对照品的制备…………………………………………………………………………9

2.4供试品的制备…………………………………………………………………………9

2.5线性关系考察…………………………………………………………………………9

第三章紫外法测定总黄酮含量…………………………………………………………11

3.1对照品的确定………………………………………………………………………11

3.2测定波长的选择………………………………………………………………………11

3.3不同提取方法的考察………………………………………………………………12

3.4对照品的制备…………………………………………………………………………17

3.5供试品的制备…………………………………………………………………………17

3.6标准曲线的制备………………………………………………………………………17

第四章方法考察……………………………………………………………………………18

4.1稳定性试验……………………………………………………………………………18

4.2精密度试验…………………………………………………………………………20

4.3重复性试验…………………………………………………………………………22

4.4加样回收率…………………………………………………………………………23

第五章结果…………………………………………………………………………………25

5.1样品测…………………………………………………………………………………25

5.2正交试验结果和分析……………………………………………………………25

第六章讨论…………………………………………………………………………………28

参考文献…………………………………………………………………………………29

致谢………………………………………………………………………………………30

金线莲总黄酮测定方法的研究

摘要：

目的：

探讨金线莲总黄酮实验室提取工艺的最佳方法，从而为金线莲的开发研究以及实验室提取金线莲总黄酮提供相关实验数据和实验思路。

方法：

首先，通过HPLC法对金线莲黄酮苷成分进行分析定量，再通过对金线莲单因素提取方法（索氏提取、回流法、超声提取、冷浸法、温浸法），乙醇和甲醇提取溶剂的差异，提取溶剂含量和体积的差异，不等的提取时间以及不同的提取温度的考察，从中选取重要影响因素（提取温度、提取时间、溶剂含量和料液比）和最优点，制定正交试验表。

按照正交试验表所制定的实验条件，在375nm波长下进行UV法直接测定黄酮含量，获得数据，对数据进行处理，制作方差分析表和极差分析表。

结果：

提取温度、提取时间、溶剂含量和料液比对金线莲总黄酮含量影响显著，其中影响因素大小为溶剂含量>提取时间>料液比>提取温度。

结论：

该法能准确地对金线莲黄酮类含量进行分析，准确快速。

关键词：

金线莲；总黄酮；提取方法；

StudythedeterminationmethodoftotalFlavonoidsfromAnoectochilusroxburghii

Abstract：

Objective:

ToresearchthesuitableforextractionmethodinAnoectochilusroxburghii（Wall）Lindl.inordertothedevelopmentofAnoectochilusroxburghii（Wall）Lindl.researchandtatolflavonoidsextractionofAnoectochilusroxburghii（Wall）Lindl.inthelaboratoryandprovidetherelatedexperimentdataandideas.

Methods:

First,analyzingtatolflavonoidsingredientsquantitativeofAnoectochilusroxburghii（Wall）Lindl.byHPLC,throughsinglefactorextractionmethodsofAnoectochilusroxburghii（Wall）Lindl.（soxhletextraction,refluxextraction,ultrasonicextraction,coldsoakextraction,warmimmersionextraction）,thedifferenceofethanolandmethanolextractionsolvents,thecontentoftheextractionsolventandthedifferencesinvolume,theexplorationofextractiontimeandextractiontemperature,choosingtheimportantinfluencefactors（extractiontemperature,extractiontimeandsolventcontentandtheratioofmaterialandliquidthe）andthemostadvantage,andformulatingorthogonaltesttable.Accordingtoorthogonaltesttableoftheexperimentalconditions,determinatingdirectthecontentsoftatolflavonoidsunderthe375nmUV-Visspectrophotometry,andgettingthedataanddisposingofthedata,analysisingofvariancetableandextremingdifferenceanalysistable.

Results:

Extractiontemperature,extractiontime,solventcontent,andtheratioofmaterialandliquidtheonthetotalflavonoidsofAnoectochilusroxburghii（Wall）Lindl.effectsignificantly,thefactorsaffectingthesizeforthesolventcontent>extractiontime>theratioofmaterialandliquidthe>extractiontemperature.

Conclusion:

Themethodcanaccuratelyanalyzethecontentoftatolflavonoidsinlotus,fast.

Keywords:

Anoectochilusroxburghii（Wall）Lindl.;Totalflavonoids;Extractionmethod;

前言

金线莲（Wall.）Lindl.Anoectochilusroxburghii为兰科开唇兰属珍稀濒危药用植物，又名金线兰、花叶开唇兰等，民间素有“药王”、“金草”之美誉[1]，在我国福建、广西、广东、云南和台湾等省份都有分布，具有清热凉血、祛风利湿、降血压等功效。

全国最大的金线莲产区是福建省，其产区规模正在逐渐扩大，已成为福建特色中草药之一。

金线莲具有很好的药用价值，民间多用于治疗糖尿病、高血脂、乙型肝炎等疾病，由于繁殖率低、生长环境独特、鸟类嗜食等原因，野生金线莲资源日渐枯竭，随着其功效应用的扩大，需求量不断增大，人工培育的金线莲已日渐形成规模[2]。

金线莲中主要成分有黄酮类化合物、甾体类化合物、三萜类化合物、生物碱、糖类、氨基酸、微量元素等，其中黄酮类化合物有槲皮素、异鼠李素、山奈酚，甾体类化合物有豆甾醇、开唇兰甾醇、麦角甾醇、菜油甾醇等，三萜类化合物有木栓酮、琥珀酸、阿魏酸、胡萝卜苷、香豆酸、熊果酸、棕榈酸、齐墩果酸等。

自然界存在于金线莲中的总黄酮成分，大部分与葡萄糖或鼠李糖结合成糖苷，少量的为鞣质或游离态存在，所以简单的加乙醇并不能将黄酮类化合物提取出来，故在加提取溶剂的同时，加少量的盐酸，促进黄酮类化合物水解出峰。

黄酮化合物一般具有基本骨架结构C6-C3-C6。

目前，对黄酮类化合物的研究国内外已比较深入，其定量方法常用HPLC法和UV法，在生产和科研中，对黄酮单体定量常用HPLC法；HPLC法测黄酮含量，根据文献资料甲醇-水-磷酸（52:

48:

0.04）但峰间距小，不易画基线，对比例进行了调整，随着甲醇比例的减小，峰间距加大分离度加大[3]。

而对于总黄酮的测定，因为UV法具有准确、重复性好、易掌握等优势，所以该法用于测定总黄酮含量最为普遍。

UV法常用法有直接测定法和显色测定法。

直接测定法是不使用显色剂，根据黄酮自身结构，直接在其特征吸收峰出测定，该方法对于单成分样品测定准确、简便、快速;但对于中草药来说，杂质干扰大，出现误差可能性大，常采用的是碱性条件显色测定法，一般认为直接测定弱于显色测定的结果，且皂苷、多糖对试验均无干扰，但对于此次的紫外测定金线莲则由于植物自身原因，而选择了直接测定法测定总黄酮含量。

对金线莲进行现代应用研究自1990年后才开始，主要集中在组织培养、人工种植、化学成分和药理作用的研究。

《中国药典》中尚未对金线莲进行收载，故做此实验不仅完善金线莲的实验室提取工艺，而且对金线莲在药典中的收载做出些参考。

第一章材料

1.1药物和试剂

槲皮素（批号100081-200907,含量96.5%）购自中国食品药品检定研究院；

山奈酚（批号110860-201109,含量99.0%）购自中国食品药品检定研究院；

异鼠李素对照品（批号110861-200808,含量95.9%）购自中国食品药品检定研究院；

甲醇、乙醇、磷酸均为分析纯；

水为超纯水；

1.2主要仪器

Agilent1100液相色谱仪（安捷伦公司）