年高考年模拟高三生物一轮课件第讲《基因工程》.ppt

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知识一基因工程的工具与操作程序知识一基因工程的工具与操作程序一、基因工程的工具1.限制酶知识梳理知识梳理

（1）存在:

原核生物中。

（2）作用:

识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列,并使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。

（3）形成末端类型2.DNA连接酶

（1）种类

（2）功能:

将双链DNA片段“缝合”起来,恢复被限制酶切开的两个核苷c酸间的磷酸二酯键。

3.载体

（1）条件:

能在受体细胞中复制并稳定保存;具有一至多个限制酶切点;具有标记基因。

（2）种类（3）作用:

携带外源DNA片段进入受体细胞。

（4）特点:

可在细胞中进行自我复制或整合到染色体DNA上随染色体DNA进行同步复制。

1.获得目的基因（目的基因的获取）

（1）方法:

从基因文库中获取;人工合成。

（2）人工合成的方法:

反转录法和化学合成法。

（3）目的基因的扩增方法:

PCR技术。

2.基因表达载体的构建基因工程的核心

（1）目的:

使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时使目的基因能够表达和发挥作用。

（2）基因表达载体=目的基因+启动子+终止子+标记基因等。

启动子:

RNA聚合酶识别和结合的部位,驱动基因转录出mRNA。

终止子:

使转录终止的一段有特殊结构的DNA短片段。

二、基因工程的基本操作程序标记基因:

鉴定受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来。

（3）构建过程:

生物种类植物细胞动物细胞微生物细胞常用方法农杆菌转化法显微注射法转化法受体细胞体细胞受精卵原核细胞转化过程将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上导入农杆菌侵染植物细胞整合到受体细胞的DNA上表达基因表达载体受精卵新性状个体Ca2+处理细胞感受态细胞重组表达载体与感受态细胞混合感受态细胞吸收DNA分子3.将目的基因导入受体细胞4.目的基因的检测与鉴定1.萤火虫体内的荧光素酶催化的系列反应导致萤火虫发光。

如果荧光素酶存在于植物体内,也可以使植物体发光。

一直以来荧光素酶的唯一来源是从萤火虫腹部提取。

但科学家成功地通过基因工程将荧光素酶基因导入大肠杆菌体内,使其产生荧光素酶。

请分析回答下列问题:

（1）在此基因工程中,目的基因是,获得目的基因的常用方法有:

、人工合成和PCR技术扩增目的基因。

（2）将此目的基因导入受体细胞内需要载体的帮助。

下列各项在选取载体时不必考虑的是。

（用字母表示）A.能够在宿主细胞内复制并稳定保存B.具1至多个限制性核酸内切酶的切点C.具有与目的基因相同的碱基片段D.具有某些标记基因（3）在基因表达载体构建的过程中,需要、等多种酶的参与。

载体中启动子的化学本质是。

（4）在此基因工程中受体细胞为。

（5）为检测目的基因是否导入受体细胞,可利用放射性同位素标记的作探针与受体细胞基因组DNA杂交。

（6）通过基因工程来培育新品种的主要优势是。

答案

（1）荧光素酶基因从基因文库中获取

（2）C（3）限制性核酸内切酶（或限制酶）DNA连接酶DNA片段（4）大肠杆菌（5）目的基因（6）定向地改造生物的遗传性状解析

（1）要转入植物细胞内的荧光素酶基因即为目的基因。

获得目的基因的常用方法有:

从基因文库中获取、人工合成和PCR技术扩增目的基因。

（2）选择载体时一般要考虑三个因素:

能够在宿主细胞内复制并稳定保存;具有1至多个限制性核酸内切酶的切点;具有某些标记基因。

（3）基因表达载体的构建需用到限制性核酸内切酶和DNA连接酶。

（5）欲利用DNA杂交的原理检测目的基因是否导入受体细胞,则要求探针是一段能与目的基因中的一条链互补配对的DNA单链（即目的基因）。

（6）相对诱变育种而言,基因工程育种的优势在于对生物品种进行定向改造。

2.（2011海南单科,31,15分）回答有关基因工程的问题:

（1）构建基因工程表达载体时,用不同类型的限制酶切割DNA后,可能产生黏性末端,也可能产生末端。

若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接,则应选择能使二者产生（相同、不同）黏性末端的限制酶。

（2）利用大肠杆菌生产人胰岛素时,构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等,其中启动子的作用是。

在用表达载体转化大肠杆菌时,常用处理大肠杆菌,以利于表达载体进入;为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA,可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交,该杂交技术称为。

为了检测胰岛素基因转录的mR-NA是否翻译成,常用抗原抗体杂交技术。

（3）如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞,先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的中,然后用该农杆菌感染植物细胞,通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的上。

答案

（1）平相同

（2）驱动胰岛素基因转录出mRNA（其他合理答案也给分）CaCl2溶液（或Ca2+）分子杂交技术蛋白质（其他合理答案也给分）（3）T-DNA染色体DNA（其他合理答案也给分）解析

（1）DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式:

黏性末端和平末端。

当限制酶在它识别序列的中心轴两侧将DNA切开时,产生的是黏性末端,而当限制酶在它识别序列的中心轴线处将DNA切开时,产生的是平末端。

要使目的基因和质粒直接进行连接,应使用同种限制酶切割目的基因和质粒,使二者产生相同黏性末端。

（2）一个基因表达载体的组成,除含有目的基因外,还必须有启动子、终止子和标记基因等。

启动子是一段有特殊结构的DNA片段,位于基因首端,是RNA聚合酶识别和结合部位,可以驱动目的基因转录出mRNA。

在用表达载体转化大肠杆菌时,为便于表达载体进入,常用CaCl2处理大肠杆菌。

要检测目的基因是否转录出对应的mRNA,可采用分子杂交技术,即用标记的目的基因片段作探针,与mRNA杂交,如果显示出杂交带,则表明目的基因转录出了mRNA。

（3）运用农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞时,要先将目的基因插入农杆菌Ti质粒的T-DNA中,然后用该农杆菌感染植物细胞,通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的染色体DNA上。

3.（2014河北唐山一中期中,51）下图是从酵母菌获取某植物需要的某种酶基因的流程,结合所学知识及相关信息回答下列问题:

（1）图中cDNA文库基因组文库（填“大于”、“等于”或者“小于”）。

（2）过程提取的DNA需要的切割,B过程是。

（3）为在短时间内大量获得目的基因,可用扩增的方法。

目的基因获取之后,需要进行,其组成必须有以及标记基因等,此步骤是基因工程的核心。

（4）将该目的基因导入某双子叶植物细胞,常采用的方法是,其能否在此植物体内稳定遗传可以用技术进行检测。

答案

（1）小于

（2）限制酶反转录（或逆转录）（3）PCR技术基因表达载体的构建启动子、终止子、目的基因（4）农杆菌转化法DNA分子杂交解析

（1）cDNA文库小于基因组文库。

（2）提取目的基因需要限制酶,逆转录法获得目的基因需要逆转录酶。

（3）短时间内大量获得目的基因,可用PCR技术扩增的方法。

基因表达载体组成必须有目的基因、标记基因、启动子和终止子等,基因表达载体的构建是基因工程的核心。

（4）将目的基因导入某双子叶植物细胞常采用的方法是农杆菌转化法,目的基因只有整合到植物细胞的染色体DNA上才能在植物体内稳定遗传,可通过DNA分子杂交的方法对目的基因是否整合到染色体上进行检测。

知识二基因工程的应用与蛋白质工程知识二基因工程的应用与蛋白质工程一、基因工程的应用与蛋白质工程1.转基因生物

（1）概念:

是指利用基因工程技术导入外源基因培育出的能够将新性状稳定地遗传给后代的基因工程生物。

（2）优点:

运用基因工程改良动植物品种最突出的优点是能打破常规育种难以突破的物种之间的界限。

2.基因工程的应用

（1）动物基因工程:

用于提高动物生长速度从而提高产品产量;用于改善畜产品品质;用转基因动物生产药物;用转基因动物作器官移植的供体等。

（2）植物基因工程:

培育抗虫转基因植物、抗病转基因植物和抗逆转基因植物;利用转基因改良植物的品质。

（3）基因诊断:

又称为DNA诊断,是采用基因检测的方法来判断患者是否出现了基因异常或携带病原体。

（4）基因治疗:

指利用正常基因置换或弥补缺陷基因的治疗方法。

实例:

ADA基因缺陷症的基因治疗。

3.蛋白质工程

（1）概念:

以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础,通过基因修饰或基因合成,对现有蛋白质进行改造,或制造一种新的蛋白质,以满足人类的生产和生活的需求。

（2）基本途径:

预期蛋白质功能设计预期的蛋白质结构推测应有的氨基酸序列找到对应的脱氧核苷酸序列（基因）。

二、转基因生物的安全性与生物武器1.转基因生物存在安全性问题的原因

（1）目前对基因的结构、基因间的相互作用及基因的调控机制等都了解得相当有限。

（2）目的基因往往是异种生物的基因。

（3）外源基因插入宿主基因组的部位往往是随机的。

2.对转基因生物安全性的争论:

主要在食物安全、生物安全、环境安全三个方面存在激烈的争论。

3.理性对待转基因技术:

趋利避害,不能因噎废食。

4.基因身份证

（1）否定的理由:

个人基因资讯的泄露造成基因歧视,势必造成遗传学失业大军、个人婚姻困难和人际关系疏远等。

（2）肯定的理由:

一些遗传性疾病在后代中复现率很高,通过基因检测可以及早预防,适时治疗,达到挽救患者生命的目的。

（1）种类:

致病菌、病毒、生化毒剂,以及经过基因重组的致病菌。

（2）中国政府的态度:

在任何情况下不发展、不生产、不储存生物武器,并反对生物武器及其技术和设备的扩散。

5.生物武器1.胰岛素是治疗依赖型糖尿病的特效药物,但是天然胰岛素在人体内寿命只有几小时,重症病人每天得注射好几次药物。

通过蛋白质工程可改变胰岛素的空间结构,以延长胰岛素的半衰期,得到长效胰岛素;还可以在不改变胰岛素活性部位结构的前提下,增强其他部位的结合强度,使之难以被酶破坏,从而增强其稳定性,如图是用蛋白质工程设计长效胰岛素的生产过程。

能得到准确表达。

（3）用蛋白质工程生产的胰岛素,与天然胰岛素比较,显著的优点是。

（4）图解中从新的胰岛素模型到新的胰岛素基因的基本思路是什么?

。

答案

（1）蛋白质的预期功能

（2）载体大肠杆菌等受体细胞（3）具有长效性（4）根据新的胰岛素中氨基酸的序列,推测出其基因中的脱氧核苷酸序列,然后利用DNA合成仪来合成出新的胰岛素基因解析

（1）蛋白质工程的目标是根据人们对蛋白质功能的特定需求,对蛋a

（1）构建新的蛋白质模型是蛋白质工程的关键,图中构建新的胰岛素模型的主要依据是。

（2）通过DNA合成形成的新基因应与结合后转移到中才白质结构进行分子设计,因此,图中构建新的胰岛素模型的依据是胰岛素的预期功能。

（2）合成的目的基因应与载体构建成基因表达载体后导入受体细胞中才能得以表达。

（3）由题中信息可知,利用蛋白质工程技术生产的胰岛素解决了天然胰岛素在体内不能长期起作用的问题。

（4）由新的蛋白质模型构建新的基因,其基本思路是根据新的蛋白质中氨基酸的序列,推测出其基因中的脱氧核苷酸序列,然后用DNA合成仪直接合成出新的基因。

2.普通番茄细胞中含有多聚半乳糖醛酸酶基因,控制细胞产生多聚半乳糖醛酸酶,该酶能破坏细胞壁,使番茄软化,不耐贮藏。

科学家们通过基因工程技术,培育出了抗软化、保鲜时间长的番茄新品种,操作流程如图。

请回答:

（1）该过程需要的工具酶有和DNA连接酶。

（2）在番茄新品种培育过程中,将目的基因导入受体细胞采用最多的方法是,筛选含重组DNA的土壤农杆菌时通常要看质粒上的是否表达。

（3）多聚半乳糖醛酸酶基因和抗多聚半乳糖醛酸酶基因转录产生的mRNA能相互配对,导致无法合成,最终使番茄获得了抗软化的性状。

（4）转基因生物安全性主要在、和三个方面存在激烈的争论。

（5）除了图示培育方法外,还可通过蛋白质工程技术,对的结构进行特定的改变,从而获得抗软化的番茄品种,关键的操作是对进行定向改造。

（6）为防止转基因番茄通过花粉将抗多聚半乳糖醛酸酶基因传播给其他植物而造成基因污染,可将抗多聚半乳糖醛酸酶基因导入番茄植物细胞的（结构）中。

答案

（1）限制性核酸内切酶

（2）农杆菌转化法标记基因（3）多聚半乳糖醛酸酶（4）食物安全生物安全环境安全（5）多聚半乳糖醛酸酶多聚半乳糖醛酸酶基因（6）线粒体或叶绿体解析

（1）基因工程的工具酶有限制酶和DNA连接酶。

（2）