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整理食品防腐剂研究进展

食品防腐剂的分析研究进展

许丽君

（重庆科技学院化学与生物工程学院 商品质量检测技术2003级）

摘要：

综述了近几年来国内外有关食品防腐剂的分析研究状况，分析方法包括高效液相色谱法、气相色普法、分光光度法、薄层色谱法、荧光光谱分析等。

关键词：

分析方法，食品防腐剂，综述。

中图分类号：

       文献标示码：

防腐剂是食品在物理、生物化学和有害微生物等因素的作用下，会失去其固有的色、香、味、形而腐烂变质，而有害微生物的作用是导致食品腐败变质的主要因素；它也是一类以保护食品原有性质和营养价值为目的的食品添加剂[1]。

目前食品防腐剂的种类很多，主要分为合成和天然防腐剂；常用的合成防腐剂以山梨酸及其盐、苯甲酸及其盐和尼泊金酯类等为代表，它门的特性特点我简单的介绍一下：

（1）山梨酸类有山梨酸、山梨酸钾和山梨酸钙三类品种。

山梨酸除不溶于水外，使用时须先将其溶于乙醇或硫酸氢钾中，使用时不方便且有刺激性，故一般不常用；山梨酸钙FAO/WHO规定其使用范围小，所以也不常使用；山梨酸钾则没有它们的缺点，易溶于水、使用范围广，我们经常可以在一些饮料、果脯、罐头等食品看到它的身影；在这里我重点介绍一下山梨酸钾：

它为不饱和六碳酸；一般市场上出售的山梨酸钾呈白色或浅黄色颗粒，含量在98%--102%；无臭味、或微有臭味，易吸潮、易氧化而变褐色，对光、热稳定，相对密度1.363，熔点在270℃分解，其1%溶液的PH：

7—8。

山梨酸钾为酸性防腐剂，具有较高的抗菌性能，抑制霉菌的生长繁殖；其主要是通过抑制微生物体内的脱氢酶系统，从而达到抑制微生物的生长和起防腐作用，对细菌、霉菌、酵母菌均有抑制作用；其效果随PH的升高而减弱，PH达到3时抑菌达到顶峰，PH达到6时仍有抑菌能力，但最底浓度（MIC）不能底于0.2%，实验证明PH：

3.2比PH2.4的山梨酸钾溶液浸渍，未经杀菌处理的食品的保存期短2—4倍。

山梨酸、山梨酸钾和山梨酸钙它们三种的作用机理相同，毒性比苯甲酸类和尼泊金酯要小，日允许量为25mg/Kg，苯甲酸5倍，尼泊金酯的2.5倍是一种相对安全的食品防腐剂；在我国可用于酱油、醋、面酱类、果酱类、酱菜类、罐头类和一些酒类等等食品。

（2）苯甲酸类有苯甲酸和苯甲酸钠二类；苯甲酸又称为安息香酸，故苯甲酸钠又称安息香酸钠。

苯甲酸在常温下难溶于水，在空气（特别是热空气）中微挥发，有吸湿性，大约常温下0.34g/100ml；但溶于热水；也溶于乙醇、氯仿和非挥发性油。

而苯甲酸钠在都使用苯甲酸钠；苯甲酸和苯甲酸钠的性状和防腐性能都差不多。

我简单介绍一下苯甲酸钠：

苯甲酸钠大多为白色颗粒，无臭或微带安息香气味，味微甜，有收敛性；易溶于水（常温）53.0g/100ml左右，PH在8左右；苯甲酸钠也是酸性防腐剂，在碱性介质中无杀菌、抑菌作用；其防腐最佳PH是2.5-4.0，在PH5.0时5%的溶液杀菌效果也不是很好。

苯甲酸钠亲油性较大，易穿透细胞膜进入细胞体内，干扰细胞膜的通透性，抑制细胞膜对氨基酸的吸收；进入细胞体内电离酸化细胞内的碱储，并抑制细胞的呼吸酶系的活性，阻止乙酰辅酶A缩合反应，从而起到食品防腐的目的。

苯甲酸类在我国可以使用在面酱类、果酱类、酱菜类、罐头类和一些酒类等食品中，现在国家明确规定苯甲酸类不能使用在果冻类食品中；苯甲酸类毒性较大，国家限制了苯甲酸及其盐的使用范围，许多国家已用山梨酸钾取代。

（3）尼泊金酯类（即对羟基苯甲酸酯类）有对羟基苯甲酸甲脂、对羟基苯甲酸乙脂、对羟基苯甲酸丙脂、对羟基苯甲酸丁脂等;其中对羟基苯甲酸丁脂防腐作用最好，我国主要使用对羟基苯甲酸乙脂和丙脂，在日本使用最多的是对羟基苯甲酸丁脂。

尼泊金酯类最大的特点是系列产品多，抑菌谱广；防腐机理是破坏微生物的细胞膜，使细胞内的蛋白质变性，并能抑制细胞的呼吸酶系和电子传递酶系的活性。

尼泊金酯的抗菌活性成分主要是分子态起作用，由于起分子内的羟基已被脂化，不在电离，而对位的酚基的电离常数很小，在溶液PH为8时，仍有60%以上呈分子状态存在，因此尼泊金酯类的抑菌作用在PH4—8较宽的范围内均有良好的效果。

由于尼泊金酯类都难溶于水，所以通常是它们先溶于氢氧化钠、乙酸、乙醇中，然后使用。

为更好发挥防腐作用，最好是将两种或两种以上的该脂类混合使用。

对羟基苯甲酸乙脂一般用于酱油和醋中，而对羟基苯甲酸丙脂一般使用在一些水果饮料和果蔬保鲜。

使用时可以添加、浸渍、涂布、喷雾使用，将其涂于表面或使其吸附在内部。

有无芽孢子和孢子等情况对防腐剂的防腐效果都有很大的影响。

在使用等量的防腐剂条件下，食品污染越严重，原始菌数越多，防腐效果越差。

相关资料显示从微生物的增殖过程来看，开始是缓慢的诱导期，过了诱导期，就急聚进入对数期，增殖非常旺盛。

由于食品添加剂的作用和用量世界各国都有限制，它通常只是抑制微生物，延长微生物增殖过程中的诱导期。

因此防腐剂的使用为食品防腐提供了有效、简便、经济的方法。

因此对食品中防腐剂的测定有重要意义。

测定防腐剂的方法很多，如高效液相色谱法、气相色普法、分光光度法、薄层色谱法、两点电位滴定法直接测定法等，本文对食品中防腐剂的常用测定方法进行了评述。

1 高效液相色谱法

1.1 LHJ增溶剂法

邢沛然等[2]用LHJ增溶剂溶解样品测定山梨酸含量为0．27g/kg，而用水溶解样品其含量仅0．08ug/ml，提高三倍。

也就是说用水作溶剂不能将果冻中的山梨酸和苯甲酸完全溶解在水溶液中，其测定结果与真值相差甚远。

样品精密度实验山梨酸为5．9％，苯甲酸为20％。

该方法山梨酸和苯甲酸回收率分别为96．7％、90．7％；最低检出限浓度为0.00015mg/ml。

以上各项指标均符合分析化学要求，并且用LHJ增溶剂能将液相色谱仪管道柱子粘浮的有机物或无机物溶解，缩短了冲洗柱子的时间。

许辉等[3]采用三氯甲烷从样品中直接一次提取山梨酸．再以碳酸氢钠一次反萃取净化，在254nm处直接测定样品吸光度·并与标准进行比较定量·可快速得到测定结果，此法具有操作简单、快速、测定精密度高等特点。

适用于水果汁、果酱、罐头、软饮料等食品中山梨酸及其钾盐的快速测定。

1.2 双检测器HPLC

甜密索、苯甲酸、塘精和山梨酸是食品分析中的常规项目[4]。

祁广建，沈国英等[5]采用双检测器HPLC同时测定甜密素，苯甲酸，糖精和山梨酸四种物质含量。

本法具有操作简便，用洋量少．分析周期短。

其最小值的浓度分别为：

甜密素25ug／ml，苯甲酸2ug/ml，糖精和山梨酸各为1ug／ml可满足食品卫生监督检测的需要。

李秀婷[6]建立HPLC测定糖浆剂、舍剂中防腐剂（苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸乙酯）的方法。

方法在酸性条件下，用乙醚提取糖浆剂、合剂中的防腐剂，提取液浓缩后采用液相色谱法进行测定。

结果线性关系良好，分别为r=0．9999、r=0．9998、r=0．9996；平均回收率分别为98．1％、95．4%、97．0%；RSD分别为：

1.14%、2.31%、1.76%。

结论测定方法简单，专属性强，结果准确，重现性良好。

1.3 高效液相色谱分离法

山梨酸，苯甲酸广泛地用作各种食品的防腐剂，使用量一般在0．5～2g／kg。

单独测定食品中的山梨酸、苯甲酸有多种方法[7]，但操作繁琐，分析时间长。

许多文献报道了山梨酸、苯甲酸的气相色谱测定方法及苯甲酸、山梨酸的液相色谱测定方法，但因山梨酸、苯甲酸的极性较强，色谱峰易产生拖尾现象，且分离效果也受到影响。

为此，周毅刚等[8]将样品用乙醚一石油醚萃取，在60℃水浴上蒸馏除去乙醚一石油醚，再在酸性介质中酯化，用高效液相色谱分离与测定。

刘庆峰、张坤梅等[9]根据实际工作的需要，探讨高效液相色谱法同时测定食品中山梨酸钾、尼泊金乙酯和尼泊金丙酯的方法。

张莉,张英宣[10]测定糕点类食品中的防腐剂、甜味剂。

孙燕、张红宇[11]采用高效液相色谱法测定酱油中苯甲酸含量时利用两种前处理方法提取测定。

结果表明直接稀释进样回收率为98．8～103．5，乙醚提取回收率为95．4～98．4，两种方法相对偏差小于1O。

虽有一定差异，但均符合检验要求。

黄方取[12]采用乙酸铅、草酸钾一磷酸氢二钾沉淀体系预处理样品，建立了同时测定复杂样品中4种添加剂的方法，获得满意的结果。

黎其万等[13]使用乙腈／水混合溶剂萃取苯甲酸、山梨酸和糖精钠，用正己烷去酯，再结合固相萃取（SPE—C18）新技术，建立了一种操作简单，准确可靠的高油样品的处理方法。

刘渭萍等[14]将酱油、醋样品定量稀释后，用针筒式水膜过滤器处理后，直接进样，进行液相色谱定量分析。

用此方法进行了不同水平的加标回收率测试，证明方法快捷可靠，非常适用于大量样品的快速测定。

顾蕴华等[15]研究将苯甲酸、山梨酸、咖啡因、糖精钠四种食品添加剂一次进样同时分析，节省了分析时间，省去了配制多种流动相的不便，同时提高了工作效率，经过对多种类型软饮料的测定，得到了令人满意的实验效果。

张鹏、郑卫东等[16]研究采用高效液相色谱法同时测定面粉中过氧化苯甲酰和苯甲酸含量，直接用甲醇超声波提取面粉中过氧化苯甲酰和苯甲酸，过滤后即可直接进样同时分析，方法简便快速。

戴维杰等[17]应用高效液相色谱法分离测定饮料、冷髓、蜜饯、糕点、酱菜等样品中糖精钠、苯甲酸钠、山梨酸钾3种添加剂的用量，这种方法具有分析速度快，分离效率高，测定结果准确等优点。

林小葵[18]建立高效液相色谱同时测定酱油、醋、饮料中苯甲酸，山梨酸，对羟基苯甲酸酯类（乙酯和丙酯）的方法可供同行参考。

用液相色谱法测定酱油、饮料、醋中苯甲酸，山梨酸，对羟基苯甲酸酯类等常用防腐剂，样品处理过程简单，分析方法的灵敏度高，精密度及回收率均可满足实际工作的要求，应用于酱油、醋、饮料等产品的卫生质量监测，效果满意。

2    气相色普法

2.1 毛细柱气相色谱法

国际GB／T5009．29一l996规定测定饮料中防腐剂山梨酸、苯甲酸采用的第一法气相色谱法中使用的色谱柱是玻璃柱，但在实际工作中采用这种柱子进行分析检测时，色谱柱流失较大，并且溶剂峰拖尾也较严重，使得溶剂峰与山梨酸峰分离效果不好，从而造成最终定量结果不理想。

高晓杉等[19]提出用OVl701毛细柱检测饮料中山梨酸、苯甲酸．使得溶剂峰与山梨酸、苯甲酸峰能够彻底分开，不但分离效果好，分析速度也快，而且重现性也好，灵敏度高，定量也准确。

本法山梨酸、苯甲酸测定的检出限为0．1mg／kg，相对标准偏差小于3％，样品加标回收率为89％～99％。

肖力,李关兵[20]用高效毛细管电泳法测定酱油中山梨酸的含量。

殷德荣[21]研究的毛细管气相色谱法同时测定食品中山梨酸、苯甲酸、脱氢乙酸、尼泊金丙酯具有操作简便、分离效果好、检出限低、精密度高、结果准确的特点，能用于果汁、果酱、饮料、酱油、醋、酸奶等食品中防腐剂的测定。

苯甲酸和山梨酸是常用于酱油中的食品添加剂，具有抑制或杀灭微生物的作用，我国食品卫生标准严格规定了苯甲酸和山梨酸的使用限量。

目前测定食品中苯甲酸和山梨酸普遍使用的国标法是填充柱气相色谱法[22]，也有采用内标法测定苯甲酸和山梨酸的报道，这些方法都是采用低极性低沸点的乙醚一石油醚混合液作为溶解萃取物残渣和配制标准溶液的溶剂。

也有文献报道了使用毛细管柱气相色谱法测定食品中山梨酸和苯甲酸。

由于毛细管色谱柱管径小，为避免过载，一般都要进行分流。

而分梳后大部分被测物流失，大大降低了方法的灵敏度。

而王文芳、董春洲[23]采用的FFAP石英毛细管柱，无水乙醇作溶解提取物溶剂，采用先不分流后分流的进样模式，既避免了被测物的大量流失，也避免了色谱柱过载。

经对溶剂进行优化，改用极性较大沸点较高的乙醇作为溶解萃取物残渣和配制标准溶液的溶剂。

不仅使方法的灵敏度高，准确性好，也大大提高了方法的精密度。

样品平行测定的相对标准偏差均<4．38，加标回收率均>87．5％。

该方法可适用于酱油中苯甲酸和山梨酸的测定。

赵笑虹等[24]采用毛细管气相色谱外标法测定酱油中防腐剂苯甲酸和山梨酸，样品回收率均在97．4％--103．1％之间，标准线性关系良好，样品测定的相对标准偏差小，本方法具有简便、快速、准确的特点。

本实验还表明，采用气相色谱外标法在产品监测方面，准确度、精密度、回收率、线性范围均能满足实际需要，而且与内标法相比，缩短了分析时间，是一种快速、灵敏、分离效果好，定量准确的定量分析方法。

食品防腐剂具有杀灭或抑制微生物增殖的作用而被广泛应用在各类食品、饮料中。

在食品中添加适量的防腐剂虽然可防止变质，延长食品的保质期，但过量食用对人体有一定毒性。

利用气相色谱法测定食品中脱氢乙酸、丙酸、苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸酯类（尼泊金酯）已有报道，但方法大多采用水蒸气蒸馏或低沸点溶剂提取，外标法定量其中的单一组分，并且操作繁琐费时费溶剂。

目前尚未见到一次性同时简便、快速、准确测定食品中8种防腐剂的文献报道。

鲍忠定等[25]探讨了用毛细管气相色谱内标法一次性同时测定8种防腐剂的可行性，结果令人满意。

迪丽努尔·马立克等[26]用毛细管气相色谱法实现了液状食品中4种防腐剂（对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯）的分离测定，以甲醇作为萃取剂和溶剂，采用毛细管气相色谱法分析食品中的对羟基苯甲酸酯类防腐剂，采用程穿升温条件可在4min之内实现快速分离和测定。

其中测得各组分回收率为91.15～107.7，检出限为0.5pg／mL，线性范围为0.2ug／mL～80ug／mL．线性相关系数大于0.999。

分离效率高，抗干扰能力强且定量较准确，是检测这几种防腐剂的一种较为理想的方法。

胡美珍等[27]采用毛细管电泳一紫外检测法，考察了波长，电压，缓冲试剂、浓度、pH对山梨酸、苯甲酸、糖精分离的影响，得到了优化的实验条件．以硼砂20mmol／L（pH=7．5）为运行缓冲溶液，20kV为分离电压，检测波长为230nm的电泳条件下，进样时间为10s，山梨酸、苯甲酸、糖精可在12min内实现分离．山梨酸在5mg／L一50mg／L，苯甲酸在5mg／L一50mg／L，糖精在15mg／L一150mg／L范围内呈良好线性关系，迁移速度、峰面积相对标准偏差均小于4．5％，（n=5）．用上述方法对实际样品进行测定，回收率在95％以上，方法简单、快速，相对于其他分析方法，具有预处理简便，检测成本低等特点．由此可见，毛细管电泳法在食品分析领域有良好的应用前景。

2.2 气相色谱法

为准确测定食品中所台防腐剂是否超标，李树茂[28]采用气相色谱法检测食品中防腐剂含量．即用附氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分离测定，得出防腐剂的峰高，再与标准曲线比较定量，结果准确可靠。

此方法与其他常用方法．如滴定法、紫外光分析法、薄层色谱法等比较，尽管存在设备投入成本高和违规操作易燃易爆的隐患，但此设备使用范围广，使用寿命长，使用效率高而足以消除设备投入成本高的问题，并且通过严格操作规则完全能消除易燃易爆的隐患。

更重要的是．由于采用了计算机等自动化处理仪器，使它比其他常用方法更简便、更灵敏、更精确．刘敏红等[29]将样品酸化后用乙醚提取山梨酸、苯甲酸，用带有氢火焰离于检测器的气相色谱仪进行分离测定．保留时间定性．培高定量。

徐春祥[30]采用气相色谱法测定食品中的苯甲酸、山梨酸，通过对样品前处理过程的改进，以达到快速、准确地测定其含量的目的。

气相色谱法测定饮料中的苯甲酸[31]具有出峰侠，蜂形对称无拖尾，灵敏度高，定量准确之特点。

张艾华、张丽萍[32]测定食品中苯甲酸，灵敏度较高，选择性好，试剂和样品用量少，精密度和准确度均较高，有推广价值。

应用气相色谱法测定食品中的苯甲酸。

其测定值的变异系数在3．3％～6．7％之间，加标回收率为80．6～ll5．O％之间，最小检出量为1．0Fg。

本法灵敏度较高、选择性好、分析速度较快。

庞楠楠，迪丽努尔·马力克等[33]建立了一种分离测定食品中6种常见防腐剂（山梨酸，苯甲酸，对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯）的简单、准确的快速气相色谱方法，采用长10m，内径100／an的HP一5熔融石英毛细管柱，在快速程序升温条件下，6种常见防腐剂的分析时间为1．3rnin。

各组分平均回收率（n=3）为96．45％；检出限为1．2～l0g／mL；线性相关系数大于0．994。

该方法已用于实际食品中防腐剂的检测。

在色谱分离中[34]，如果该组分的疏水性与环糊精空腔相近，且它们空间相匹配，客体组分就能紧密地嵌入环糊精空腔，产生较大的束缚力，相当于环糊精固有极性增强，故使组分分离效果好。

可见，以p一环糊精聚台物作固定相，分离分析具有苯环的防腐剂，能够发挥独特的作用。

由于干扰物质的存在及该方法技术条件的缺点，造成检验结果不准确，有时原样品中根本没有添加苯甲酸及其钠盐，检测结果却检出强阳性。

刘士江,刘建生[35]介绍了一种气相色谱法测定肉制品中山梨酸、苯甲酸的方法，对现行国标法的相关色谱条件进行了改进。

改进方法分析结果准确，分析时间短，能将山梨酸、苯甲酸杂质完成分离。

2.3 气相色谱内标法

陈希中[36]在不改变国标中规定色谱条件下．经大量实验筛选，用正癸酸作为内标物．以内标法同时定量测定山梨酸和苯甲酸，标准回收率均在96～103之间，样品测定的变异系数小，山梨酸为0．529%，苯甲酸为0．311%。

方法简便可靠，减少因萃取、进样、溶剂损失等带来的误差。

3 色普法

3.1 纸色谱法快速分离液相色谱法

在测定食品中苯甲酸钠或山梨酸钾时，常常要将它们与其它组分进行分离，目前对苯甲酸钠和山梨酸钾进行分离的方法主要有蒸馏法、萃取分离法和液相色谱法[37-39]。

液相色谱法的分离效果虽较好，却必须要有液相色谱的分离设备，或填装色谱柱；蒸馏法和萃取分离方法不需要设备，但手续较为繁琐，而且分离效果稍差些。

对一些含油脂较高的食品（如月饼、糕点等），单用萃取法进行萃取分离时，萃取液中将含有大量的油脂，易污染色谱柱，不宜直接用于高效液相色谱进行测试。

这类食品必须用蒸馏法分离或先用蒸馏法分离脂肪再用萃取法进行萃取浓缩。

因此，杨达生、丘慧澄[40]根据混合物的各成分性质和结构上的不同，在滤纸上固定相和流动相间产生的吸附作用不同，这种物理化学现象的差异，用纸色谱法对食品中苯甲酸（钠）和山梨酸（钾）进行了测定。

3.2 薄层色谱分离

样品经盐酸酸化后，用乙醚提取其中的苯甲酸、山梨酸。

杨国光[41]将样品提取液浓缩、薄层色谱分离、展开后．与标准比较，根据薄层板t苯甲酸、山梨酸的比移值进行定性和概略定量测定。

经长期工作实践验证．本方法灵敏度较高，重现性好，成本低，试验过程简便易操作．适合于食醋中苯甲酸、山梨酸的测定。

对羟基苯甲酸酯类是重要的防腐剂。

广泛应用于食品、医药、调味品等．朱玉、李永红[42]在总结前人工作的基础上．以普通的硅胶60GF254为固定相．苯：

乙酸乙酯：

冰醋酸（24：

5：

0.3）作展开剂．采用薄层色谱法成功地将对羟基革甲酸甲酯（I）．乙酯（I）、丙酯（I）．丁酯（Ⅳ）合成产物中未反应的酸与其酯分开．并测定了各合成产物中酯的产率．方法简单、快速．

4         液相色普法

4.1 液相色谱检测法

液相色谱检测方法[43]在IDF139：

1987的基础上，乳制品中的山梨酸、苯甲酸从偏碱性的样品水体系中通过沉淀的方法去除脂肪和蛋白质后，先用甲醇稀释，然后过滤。

采用液相色谱方法，在反相色谱柱和紫外检测器于227nm处进行分离测定。

与气相色普法相比，两者处理方法难易程度相当，相同水平的标准溶液添加回收，气相色谱法的回收率偏低；液相色谱法所用的紫外检测器灵敏度比气相色谱所用的FID检测器灵敏度高，可进行更低含量的检测；液相色谱在完全相同的样品步骤和仪器条件下，可以同时完成糖精钠项目的检测。

仲岳桐[44]对方法进行改进，利用碱性溶液浸泡样品，用亚铁氰化钾和乙酸锌对油脂成分进行沉淀，最后过滤样品液后可以直接在液相色谱仪上进行测定，大大简化前处理步骤，检测结果的精密度、准确度等都符合《全国卫生防疫工作规范》的要求，而且在前处理过程中完全避免了有机试剂的使用，对于工作人员的安全保护也有积极作用，可以在各类食品检测实验室中得到广泛的应用。

刘青等[45]采用液相色谱方法，测定中药合剂、糖浆剂中苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸酯类防腐剂的含量，方法操作简便，稳定性好，精密度及回收率均可满足实际工作的要求，可以作为中药日常生产流程中质量控制的重要依据。

4.2 反相液相色谱方法

 赵榕等[46]建立同时测定抗氧化剂、防腐剂和甜味剂的反相液相色谱方法，以50mmol／L磷酸二氢钾溶液作为流动相，采用梯度洗脱。

结果：

可在30min内将I1种组分完全分离并且测定。

方法的线性范围：

甜味剂0.5—150ug/ml（r=0．9997—0．9999）；防腐剂和抗氧化剂1．0—300ug/ml（r=0.9996—0.9999），回收率：

78．0％一106．7％，相对标准偏差为2.2％一12.7％，定性检出限：

0.04—0.18mg／kg，定量检出限：

0.13—0.60mg／kg。

5 离子色谱法

苯甲酸、山黎酸等是最普遍的防腐剂。

对它们的测定相当方便，也有很多方法而尼泊金系列的防腐剂．如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯．对羟基甲酸丁酯，虽然应用的范围没有苯甲酸、山梨酸那么广泛，但是在某些地方，它们却是不可替代的。

因此，准确地测定它们的含量也是我们要解决的问题。

由于离子色谱十分简单、方便。

蒋银土、朱岩等[47]故采用离子色谱紫外检测法进行测定．并用于实际样品分析。

6分光光度法

6.1紫外分光光度法

食品防腐剂苯甲酸的测定，通常采用乙醚提取碱滴定法和水蒸气蒸馏紫外分光光度法测定，这两种方法测定程序复杂且周期长，回收率也较低。

而葛会奇[48]在前人工作的基础上采用乙醚萃取紫外分光光度法测定。

样品分析结果表明：

该方法简便准确、快速可行。

经样品处理检验，该方法最小检出限为0．0010mg／ml回收率达98％，测定全过程在1小时左右即可完成，可见，紫外分光光度法比较简便、准确、快速。

苯甲酸和山梨酸均为共轭型有机化合物。

在近紫外光区具有较强的吸收。

高效液相色谱法显示。

并通过实测证实。

苯甲酸在230nm、山梨酸在263nm处具有最大吸收。

另一方面。

苯甲酸和山梨酸在水中具有适当的溶解度。

苯甲酸在10℃时溶解度为0．21g／100ml水，在20℃时为0．28g／100ml水；山梨酸在20℃时溶解度为0．21g／100ml水。

在30℃时为0．25g／100ml水。

因此可将标样和样品处理成水溶液。

采用紫外分光光度计[49]。

通过标准曲线法而实现酸性食品中苯甲酸（钠）和山梨酸（钾）含量的联合测定；该方法具有简便、快速的特点，可作为企业自控和商品检测的参考方法。

李永飞，许敏燕等[50]研究了尼泊金复合酯作为防腐剂在酱油中的应用，结果表明在酱油中尼泊金复合酯的含量达到150ppm就能起到有效的抑茵作用，而且其浓度并不随时间的延长而减少。

王淑军等[51]用分光光度法和滤纸图片法研究7种尼泊金丁醋对四种细菌、四种酵母菌和两种霉菌的抑制作用。

结果表明，尼泊金丁醋对食品中常见污染菌有明显的抑制作用，其中对酵母、霉菌的抑制作用较强，而对细菌尤其是芽抱轩菌抑制作用较弱，其抑菌的MIC为0.01，该防腐剂热稳定性较好，120℃30min处理仍有良好的抑菌效果。

石艳静，郑丽云[52]在应用GB／T5009．29—2003食品中山梨酸、苯甲酸的测定方法进行样品测定时，发现该方法的前处理繁琐且提取中易损失待测成分。

为此，她们于2004年3月对该方法进行了改进，及用紫外分光度法测保健食品中谷胱甘肽标准曲线呈良好的线性关系r=0．9991～0．9994。

选取三种样品平行测定7次，相对标准偏差都小于5％。

高、中、低三种浓度的加标回收率为98.2%～104．0％。

通过试验认为样品提取时间定为10min较为合适。

方法操作简单、快速、