Waters e2695高效液相色谱仪操作规程.docx
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Waterse2695高效液相色谱仪操作规程
Waterse2695高效液相色谱仪操纵规程之袁州冬雪创作
1目标
指导和规范Waterse2695高效液相色谱仪的操纵.
2适用范围
该操纵规程适用于Watere2695高效液相色谱仪的操纵.
3职责
检验员应按操纵规程停止仪器操纵,质量监督员负责监督该操纵规程的正确执行.
4操纵
本仪器由Waterse2695分离单元、Waters2998二极管阵列检测器、WatersELSD2424
蒸发光散射检测器、Empower3色谱工作站和打印机组成.
Waterse2695分离单元包含四元梯度洗脱的溶剂输送系统,四通道在线真空脱气,可
容纳120个样品瓶的自动分离单元,柱温箱,内置的柱塞杆密封垫清洗系统,溶剂瓶托盘;
显示器,键盘用户界面.
4.1.2.1依次接通Waterse2695分离单元、检测器、计算机和打印机的电源.
4.1.2.2接通Waterse2695分离单元后,约20s仪器开端自检,约3mn内各部件的
初始化完成,待主屏幕上方题目区出现“Idle”时,仪器进入待命状态.
确认所有溶剂管路都充满溶剂,按[Menu/Status】,进入“Status
(1)”屏幕,光标选
“Degasser”,按[Enter】.
当色谱仪流路没有溶剂或系统中有空气时,需停止干灌注(DryPrime),注入活动相.
否则,停止湿灌注(WetPrime)以驱除气泡.干灌注:
按主机面板上[Menu/Status】,进入
“Status
(1)”显示,按[DirectFunction】,选择“DryPrime”,选溶剂通道,如OpenA,选
“DurationIIi按数字键输入5分钟,按”COntinue”,待限定时间竣事后,重复操纵,使所需
的溶剂通道注满活动相.湿灌注:
进入“Status
(1)”显示,选溶剂通道,输入100%,按[Direct
Function],选“WetPrime”,按【OK】,根据面板提示设置流速及时间(默许流速为7.5ml
/min,一般不必更改,时间可设置为5min),按【0K】.
在“status
(1)”,屏幕下,光标选“Composition”,输入活动相的组成.按【DirectFunction],
光标选“PurgeInjector”,按【Enter],显示“PurgeInjector”屏幕,输入“SampleLoopVolumes
6.0”,光标下移“CompressionCheck”,按任意数字键,按【OK].
在主屏幕下,按【Diag],显示“Diagnostics”屏幕,按【PrimeNdlWash】,显示“PrimeNeedleWash”屏幕,按[Start],30s内应见溶剂从废液排放口流出.按【Close】、【Exit】.
在主屏幕下,按【Diag],显示”Diagnostics”屏幕,按【PrimeSealWash】,显示“PrimeSealWash”屏幕,按[Start],30s内应见溶剂从废液排放口流出.按【Close】、【Exit】.待排放口有水流出,按【Half】、【Close】、【Exit】.
打开样品舱门,显示"DoorisOpen"屏幕,将样品盘取出,把样品瓶拔出样品盘后,装
入样品盘,按【Next】直至所有样品盘装毕,关好舱门.
换上检验所需的色谱柱和活动相,进入"Status
(1)”显示,选择流路、设定流速、柱温,
按【Enter】开端注入活动相,通常情况下约15~30分钟色谱柱可达到平衡,可以开端进样,
收集数据.
5Empower3软件的应用
5.1建数据收集方法
5.1.1双击电脑屏幕上的"Empower"快捷图标,出现Empower登录界面,输入用户名
和暗码.
5.1.2单击高级键,选择用户类型和QuickStart界面.
5.1.3选择QuickStart界面,点击“确定”,然后选择选定的操纵项目以及色谱系统(仅
检查数据可选择色谱系统中的“没有系统”),单击“确定”.
5.1.4登录Empower的QuickStarlt界面.
5.2编辑仪器方法和方法组(以e2695_2998为例).
5.2.1.收集栏单击“方法组编辑向导”:
5.2.2选择“新建”选项.
5.2.3弹出仪器方法编辑器.
5.2.4单击“2695”,弹出2695编辑界面.
5.2.4.1Aliance系统(包含2695、2795和2695D)通用编辑页面中,可选择“单次输送
体积”,请针对分歧的流速选定适当的单次输送体积,以确保最佳的流速精度与准度.
5.2.4.2检查脱气选项,确认设置正确.
5.2.4.3流量选项中设置“泵形式”、“总流量”以及活动相配比.
5.2.5单击2998,弹出2998编辑界面.
5.2.5.13D数据收集:
在通用栏中选择启用3D数据,输入检测波长的范围;
5.2.5.2收集2D数据,点击“2D通道”,最多可同时收集8个分歧波长的通道的数据.
5.2.6点击“文件”,选择“另存为”:
输入仪器方法称号,点击“保管”;点击“文件”,
选择“退出”.
5.2.7在被选项中选择所需的仪器方法称号,点击“下一步(N)”.
5.2.8在下拉菜单中选择所需的处理方法和陈述方法(如果没有合适的方法选择“无处
理”、“无陈述”),点击下一步.
5.2.9输入方法组称号,单击“完成”.
点击进入“平衡系统/监视基线”界面,选择相应的仪器方法,点击“平衡/监视器,
在监视窗口监视基线至系统平衡,停止系统监视状态,点击“进样”.
5.3.1.单进样:
点击,进入“定义单进样参数”编辑界面,输入样品名、功能、方法组
等参数,点击“进样”.
5.3.2使用向导建立样品组和样品组方法.
5.3.2.1选择“运行样品”,然后单击“样品队列”,进入样品列表.
5.3.2.2单击“新建样品组向导”,建立样品组.
5.3.2.3选择创建样品组方法类型为“Lc或PDA”,然后点击“定义样品板”.
5.3.2.4在“选择尺度进样在那边开端”中选择合适的选项.检查开端加载样品瓶的位置
是否正确,点击“下一步”.
5.3.2.5在描绘标样中需要设置一下内容:
样品组中的标样数:
×;每瓶标样进样次数:
X;进样体积:
x;运行时间:
XX;方法组XXX;点击“选项”:
输入下一进样延迟时间X;点击
下一步.
5.3.2.6样品数:
X;每瓶样品进样次数:
X;进样体积:
X;运行时间:
X;方法组X;点
击选项:
输入下一进样延迟时间X;点击下一步.
5.3.2.7在识别尺度样界面中,输入标样称号,增量后缀使用1.在识别样品界面中,输入样品称号,增量后缀使用a.点击下一步.
5.3.2.8运行形式选项中选择“只测试”.检查摘要,点击下一步.【注:
弹出组分编辑器,输入标样中每一个组分的称号(内标不需要输入含量).可以直接关闭该窗口,在处理数据的时候再添加】.
5.3.2.9点击完成,在菜单栏中选择文件.
5.3.2.10为方法组定名并保管样品组方法.
5.3.2.11单击“样品队列”,打开运行样品窗口,点击运行当前样品组方法键,选择运行.
5.3.2.11选择需运行的样品组称号,点击运行.
5.3.2.13样品组运行过程中,在“正在运行”栏中正在运行以及运行完毕的样品以红色
显示.(注:
以向导建立的样品组首行功能一般为清除校正,一般在运行样品前删除该行或
改为“平衡”.)
5.4.12D数据处理方法
5.4.1.1单击“阅读项目”键,在“样品组”中选择方针样品组.
5.4.1.2在样品组上点击鼠标右键选择“检查相关→通道”,样品组在单个通道中显示.
5.4.1.3选择定最低浓度的标样,点击鼠标右键,选择下拉菜单中的检查,会显示未处
理的色谱图形.
5.4.1.4点击处理方法向导快捷键,选择创建新处理方法,点击确定.
5.4.1.5确认处理类型为LC,积分方式可选择为传统,再点击使用处理方法向导,选择
确定.
5.4.1.6常按鼠标左键,选择色谱图上最窄峰.(注:
在色谱图区域方可以放大某个需
要监测的峰.点击鼠标右键全视图可以还原色谱图.)
5.4.1.7在色谱图的积分界面选择一段典型基线作为积分的阈值,点击下一步.
5.4.1.8常按鼠标左键,在基线上选取积分的起止时间点.
5.4.1.9建议选择最小峰高,选择所要积分的高度最小峰(或键入相应数值).小于此
峰高90%的峰将不被积分.点击下一步.
5.4.1.10定量方法选择面积,组分信息选择含量,校正类型选择线性.点击下一步.
5.4.1.11跨通道内标样界面点击否.
5.4.1.12因为选择的是标样,点击峰1可以看到一个下拉菜单选择相应的组分称号或
者键入运行样品相应的称号.添加组分称号相匹配的尺度含量,然后点击下一步.
5.4.1.13如果是多点校正样品,跳过添加含量的窗口直接点击下一步.(单点校正可在
这里添加含量).
5.4.1.14选择外标法:
5.4.1.15选择单一内标样,需要在下拉菜单中选择或键入内标相应的称号,然后点击
下一步.
5.4.1.16选择多重内标需要输入所有内标的称号.
5.4.1.17为处理方法定名,点击完成.色谱图界面会显示该处理方法应用后的色谱结
果,包含积分.
5.4.1.18如需为积分方法添加积分事件,鼠标右键点击色谱图窗口,选择添加积分事件.积分事件所示功能会立即应用于处理方法中.
5.4.1.19编辑处理方法的高级功能需要选择快捷键.有任何更改均需再次保管处理方
法.
5.4.1.20点击峰表底部可预览2D通道和峰.
5.4.1.21点击“阅读项目”键,选择“通道”或“样品组”标签栏,右键点击方针样
品组或通道并选择处理.
5.4.1.22在处理界面,选择使用指定的处理方法,选择相应的处理方法称号,点击清
除校正,选择校正并定量.
5.4.1.23点击确定,数据处理,发生成果.可在成果栏中检查.
5.4.2.1点击“阅读项目”键,在“样品组”中选择方针样品组.
5.4.2.2在样品组上点击鼠标右键选择检查相关通道,样品组中各个数据在单个通道中
显示.
5.4.2.3选择定量最低浓度的标样,点击鼠标右键,选择下拉菜单中的检查.
5.4.2.4在预览界面选择“轮廓线”标签栏,会显示未处理的轮廓图.
5.4.2.5从处理或右键下拉菜单中选择提取色谱选项.
5.4.2.6键入所需要提取的波长,按回车键,得到该波长的色谱图.
5.4.2.7点击处理方法快捷键,选择创建新处理方法,确认处理类型为PDA,积分方式
可选择为传统,再点击使用处理方法向导,点击确定.
5.4.2.8常按鼠标左键,选择色谱图上最窄峰.(注:
在色谱图区域内可以放大某个需
要监测的峰.点击鼠标右键选择全视图可以还原色谱图.)
5.4.2.9在色谱图的积分界面选择一段平滑的基线作为积分的阈值,点击下一步.
5.4.2.10常按鼠标左键,在基线上选取积分的起止时间点.
5.4.2.11建议选择最小峰高,选择所要积分的高度最小峰(或键入相应数值).小于此
峰高90%的峰将不被积分.点击下一步.
5.4.2.12定量方法选择面积,组分信息选择含量,校正类型选择线性.点击下一步.
5.4.2.13跨通道内标样界面点击否.
5.4.2.14因为选择的是标样,点击峰1可以看到一个下拉菜单选择相应的组分称号或
者键入运行样品相应的称号.添加组分称号相匹配的尺度含量,然后点击下一步.
5.4.2.15如果是多浓度点的一组标样,跳过添加含量的窗口直接点击下一步.(单一浓
度可以在这里添加含量).
5.4.2.16选择外标法:
5.4.2.17选择内标法单一内标样校正,需要在下拉菜单中选择或键入内标相应的称号,
然后点击下一步.
5.4.2.18选择多重内标需要输入所有内标的称号.
5.4.2.19PDA纯化及匹配选项:
5.4.2.20为处理方法定名,点击完成.色谱图界面会显示该处理方法应用后的色谱结
果,包含积分.
5.4.2.21在“文件”下拉菜单中选择“另存为”方法组,将该处理方法存入方法组.(注:
3D数据必须用方法组处理.)
5.4.2.22如需为积分方法添加积分事件,鼠标右键点击色谱图窗口,选择添加积分事
件.积分事件所示功能会立即应用于处理方法中.
5.4.2.23编辑处理方法的高级功能需要选择快捷键.
5.4.2.24点击“阅读项目”键,选择“通道”或“样品组”标签栏,右键点击方针样品组或通道并选择处理.
5.4.2.25在处理界面,选择使用指定的处理方法,选择相应的处理方法称号,点击清
除校正,选择校正并定量.
5.4.2.26点击确定,数据处理,发生成果.可在成果栏中检查.
6检查成果和视图筛选
6.1选择“成果”标签栏,使用视图筛选器从下拉菜单中选择明天.
6.2选择需检查的成果,右键点击选择检查.
6.3检查成果点击快捷键,检查每一个组分的校正曲线.切换至主窗口点击.
7预览成果并创建陈述方法
7.1点击“预览项目”切换回成果表显示状态.
7.2选中一个或多个成果,点击鼠标右键选择预览.
7.3若选取一个成果,在预览窗口选择使用一下方法:
使用缺省单个陈述,单击确定.
7.4预览陈述并检查数据.点击“编辑方法”键修改陈述方法.
7.5双击色谱图或峰成果表编辑陈述属性.
7.6点击文件,选择保管,为新建的陈述方法定名.点击预览陈述.
7.7如需将陈述保管为PDF格式,点击.
8方法组的建立
以上讲解了如何建立仪器方法、处理方法和陈述方法,组合可以得到一个方法组.
8.1监视区单击方法组编辑向导:
8.2弹出新方法组:
选择仪器方法界面.选择相应的仪器方法,点击下一步.
8.3选择缺省方法界面选择相应的处理方法和陈述方法,导出方法缺省.点击下一步.
8.4定名方法组,点击完成.
8.5在运行样品时,方法组/陈述方法中调用该方法组,可以自动完成收集、处理、报
告数据流程.
9数据管理
9.1.1在QuickStart界面,选择菜单“管理一备份当前项目”.
9.1.2出现“项目备份向导”,点击下一步.
9.1.3出现“项目备份向导一选择目标地’’通过阅读选择目标地,建议选择在非操纵系
统装置的硬盘分区内.选择完成,单击“确定”关闭后,回到项目备份窗口,单击“下一步”.
9.1.4出现“项目备份向导一备份显示”.确认数据的复制已经成功,再单击“下一步”.
9.1.5出现备份数据向导一开端界面.点击完成,竣事备份.
9.2.1在QuickStart界面,选择菜单“管理”,下拉菜单中选择“还原项目”.
9.2.2出现“还原项目向导”.通过“阅读”选择被还原的项目所在的途径,单击“确
定”.
9.2.3单击下一步.
9.2.4如出现近似以下内容的对话框(项目名test已经被使用.请输入另外一个项目名),
则需为还原的项目另起一个名字.
9.2.5在“输入磁盘空间配额’’页中,输入项目名,并注意此处的“表空间配额”应不
得小于欲还原的项目原有的配额(数据文件大小),然后单击“下一步”.
9.2.6如果需要,可以在此页面中,选择该项目是否属于某个父项目.
9.2.7在“还原显示’’中,如果出现如下对话框(还原的项目需要被更新到下一个版本),
单击“确定”.(注:
当还原由Millennium或Empower的先前版本创建的项目时,需要为该项目选择时区.)
9.2.8在“还原显示”中,等待数据还原竣事后,单击“完成”.(注:
提示:
在重装Empower
软件之后,可以通过还原项目将相关的项目数据停止还原.)
10项目管理
10.1.1进入到Empower3的QuickStart界面.在菜单中选择“管理一创建新项目”.
10.1.2出现“新项目向导”的对话框,选择新建项目标父项目:
10.1.3单击“下一步”,弹出“新建项目向导一表空间”,表空间50MB为默许设置,可
根据需要增减.
10.1.4出现“新建项目向导一选项”页.选择用于本项目标选项,如果无法确定适当的
设置,请承受默许选项.单击“下一步”.
10.1.5新建项目向导一访问节制:
根据需要选择设置对您所创建的项目具有访问权限的
用户和用户组,或者承受缺省的选项,然后单击“下一步”.
10.1.6新建项目向导一复制所选项:
需要选择复制的项目,一般选择Defaults项目.
(注:
此页的复制是指从另外一个项目复制现有设置,可以复制项目标“视图筛选器”、
“白定义字段”、“方法”和“参数”.所以,一般不允许更改或使用Defaults项目中的任何
数据.)
在建立了新项目以后,可以根据需要在分歧的项目之间停止切换.
10.2.1进入Empower3的Quick$tart界面,选择菜单“管理一改变系统/项目”.
10.2.2改变系统/项目:
根据需要停止选择项目或者选择系统(如果存在二个或者二个
以上的系统).选择完毕后,单击确定.
如果选择了“在该窗口切换项目/系统”,当前的项目/系统会被新选中的项目/系统所替代,如果选择了“为项目/系统打开新窗口”,则会为选中的项目重新打开别的一个
QuiekStart的界面.
10.2.3在新的项目/系统的QuickStart界面内即可停止下一步的操纵.
10.3.1在QuickStart界面,选择菜单“视图一系统”,检查系统.
10.3.2出现系统信息窗口.
在该窗口中,可以在地址栏中检查显示的地址是否与仪器的设置相同.此外,可从“仪
器”选项卡里的“正常?
”一栏中检查仪器状态,在正常状态下,应显示“是”字样.
如有仪器在“正常?
”一栏出现“否”,可单击“扫描仪器”停止检查.如检查后显示
“是”,即恢复正常.(注:
当仪器联机出现错误,或者出现“仪器出错”字样的时候,即可
通过收集服务器属性来检查仪器状态,断定能够引起该问题的原因.)
10.3.3.1在QuickStart界面,选菜单“管理一新建系统”.
10.3.3.2出现“新建色谱系统向导一输入类型”页面,选择系统类型为“新建系统”.
然后单击“下一步”.
10.3.3.3出现“新建色谱系统向导一选择系统”页面,在“可用仪器”组中,选中新系
统的组件,然后用鼠标拖拽至右侧“新系统仪器”组中.选择完毕,单击“下一步”.如有
误选,则如法,将误选的新系统仪器,用鼠标拖拽回“可用仪器”组中.(注:
可重复使用
已配置系统中的仪器,但一次只能有一个使用共享仪器的系统可以在线.)
10.3.3.4出现“新建色谱系统向导一访问节制”页面.(注:
您创建系统时,您即为系
统的所有者.系统创建后,可以修改系统的属性及更改所有者、访问权限和配置等详细信息.)11关机
11.1使用完毕,按规定用适当的溶剂冲洗色谱柱、系统管路、自动进样器、进样针和
柱塞杆密封垫,确保2695分离单元已完全冲洗干净后,关闭电源开关.
11.2数据收集完毕后,关闭所用检测器的电源开关.
11.3数据处理并打印陈述后,关闭计算机和打印机电源开关.
11.4试验竣事,在仪器使用记录表上登记,仪器管理人员审核签字.
12仪器维护与调养
12.1每次使用前后,检查分离单元上各溶剂瓶中溶剂的量,及时补偿各瓶中相应的溶
剂.
12.2每次使用前后,打开分离单元最下面的分离泵的舱门,检查各管路接口,有无缓
冲盐析出的情况.如出现白色盐渍,应拆下其所在的部件,先后用水和甲醇超声清洗,并安
装好.
12.3随时检查仪器的使用记录.
12.4如长时间不使用该仪器,则需每半年依照《高效液相色谱仪期间核查规程》检查一次,并做好维护记录.