天然药化常见的鉴别反应.docx

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天然药化常见的鉴别反应

天然药化常见的鉴别反应（部分）

一、颜色反应的对比

（一）、三萜类的颜色反应

反应将样品溶于乙酸酐中，加浓硫酸-乙酸酐（1：

20）数滴，可产生黄→红→紫→蓝等颜色变化，最后褪色。

反应将样品的氯仿或醇溶液点于滤纸上，喷20%五氯化锑的氯仿溶液（或三氯化锑饱和的氯仿溶液），干燥后60℃～70℃加热，显蓝色、灰蓝色、灰紫色等多种颜色。

反应将样品溶液滴在滤纸上，喷25%三氯乙酸乙醇溶液，加热至100

℃，呈红色，逐渐变为紫色。

反应

将样品溶于氯仿，加入浓硫酸后，在硫酸层呈现红色或蓝色，氯仿层有绿色荧光出现。

反应

将样品溶于冰乙酸中，加乙酰氯数滴及氯化锌结晶数粒，稍加热，则呈现淡红色或紫红色。

（二）、甾体类化合物的颜色反应

反应将样品溶于氯仿中，加浓硫酸-乙酸酐（1：

20）数滴，可产生红→紫→蓝→绿→污绿等颜色变化，最后褪色。

也可将样品溶于冰乙酸，加试剂产生同样的反应。

反应将样品的氯仿或醇溶液点于滤纸上，喷20%五氯化锑的氯仿溶液，干燥后60℃～70℃加热，样品斑点显蓝色、灰蓝色、灰紫色等多种颜色。

反应将样品溶液滴在滤纸上，喷25%三氯乙酸乙醇溶液，加热至60

℃，呈红色，逐渐变为紫色。

反应

将样品溶于氯仿，加入浓硫酸后，在硫酸层呈现红色或蓝色，氯仿层有绿色荧光出现。

反应

将样品溶于冰乙酸中，加乙酰氯数滴及氯化锌结晶数粒，稍加热，则呈现淡红色或紫红色。

二、强心苷的颜色反应

位上不饱和内酯环的颜色反应

甲型强心苷在碱性醇溶液中，五元不饱和内酯环上的双键移位产生C22活性亚甲基，能与活性亚甲基试剂作用而显色。

乙型强心苷在碱性醇溶液中，不能产生活性亚甲基，无此类反应。

所以，利用此类反应可区别甲、乙型强心苷。

（1）Legal反应：

又称亚硝酰铁氰化钠试剂反应。

取样品1～2mg，溶于吡啶2～3滴中，加3%亚硝酰铁氰化钠溶液和2mol/L氢氧化钠溶液各1滴，反应液呈深红色并渐渐退去。

（2）Raymond反应：

阳性反应是反应液呈紫红色。

（3）Kedd反应：

又称3,5-二硝基苯甲酸试剂反应。

阳性反应是反应液呈红色或紫红色。

（4）Baljet反应：

又称碱性苦味酸试剂反应。

阳性反应是反应液呈现橙色或橙红色。

2.α-去氧糖颜色反应

（1）Keller-Kiliani（K-K）反应：

此反应在冰乙酸溶液中进行，如有α-去氧糖，乙酸层显蓝色。

界面的颜色随苷元羟基、双键的位置和数目不同而异，可显红色、绿色、黄色等。

注意此反应只对游离的α-去氧糖或α-去氧糖与苷元连接的苷显色，对α-去氧糖和葡萄糖或其他羟基糖连接的二糖、三糖及乙酰化的α-去氧糖不显色。

因它们在此条件下不能水解出α-去氧糖。

此反应阳性可肯定α-去氧糖的存在，但对此反应不显色的有时未必具有完全的否定意义。

（2）呫吨氢醇反应：

反应试剂为呫吨氢醇试剂，此反应极为灵敏，只要分子中有α-

去氧糖即显红色，且分子中的α-去氧糖可定量地发生反应，故还可用于定量分析。

（3）对-二甲氨基苯甲醛反应：

分子中若有α-去氧糖可显灰红色斑点。

（4）过碘酸-对硝基苯胺反应：

此反应可在滤纸或薄层板上进行，反应过程是先喷过碘酸钠水溶液，再喷对硝基苯胺试液，则迅速在灰黄色背底上出现深黄色斑点，置紫外灯下观察则为棕色背底上出现黄色荧光斑点。

再喷以5%氢氧化钠甲醇溶液，则斑点转为绿色。

三、醌类化合物的颜色反应

醌类的颜色反应主要基于其氧化还原性质以及分子中的酚羟基性质。

（1）Feigl反应：

所有醌类衍生物在碱性条件下经加热能迅速与醛类及邻二硝基苯反应生成紫色化合物。

（2）无色亚甲蓝显色试验：

无色亚甲蓝溶液为苯醌类及萘醌类的专用显色剂。

蓝色斑点，与蒽醌类化合物相区别。

（3）Borntrger反应：

羟基醌类在碱性溶液中发生颜色改变，会使颜色加深。

多呈橙、红、紫红及蓝色。

羟基蒽醌以及具有游离酚羟基的蒽醌苷均可呈色，但蒽酚、蒽酮、二蒽酮类化合物则需氧化形成羟基蒽醌类化合物后才能呈色也就是不显色。

（4）Kesting—Craven反应（活性亚甲基）：

苯醌及萘醌类化合物当其醌环上有未被取代的位置时，可在碱性条件下与一些含有活性次甲基试剂（如乙酰乙酸酯、丙二酸酯、丙二腈等）的醇溶液反应，生成蓝绿色或蓝紫色。

萘醌的苯环上如有羟基取代，此反应即减慢反应速度或不反应。

蒽醌类化合物因醌环两侧有苯环，不能发生该反应，故可加以区别。

（5）与金属离子的反应：

在蒽醌类化合物中，如果有α-酚羟基或邻二酚羟基结构时，则可与Pb2+、Mg2+等金属离子形成络合物。

反应灵敏，生成的颜色因分子中羟基的位置不同而不同，有助于识别羟基位置显的颜色不同：

环上有1个α-羟基——橙色

邻二酚羟基——蓝紫色

对二酚羟基——显紫到紫红色

各有1个α-羟基或还有间位羟基——橙红色至红色

（6）对亚硝基二甲苯胺反应：

9位或10位未取代的羟基蒽酮类化合物，尤其是1,8-二羟基衍生物，其羰基对位的亚甲基上的氢很活泼，可与%对亚硝基-二甲苯胺吡啶溶液反应缩合而产生各种颜色。

本反应可作为蒽酮类化合物的定性鉴别反应，不受蒽醌类、黄酮类、香豆素类、糖类及酚类化合物的干扰。

四、香豆素的颜色反应

（1）异羟肟酸铁反应

香豆素类成分具有内酯结构，在碱性条件下开环，与盐酸羟胺缩合生成异羟肟酸，在酸性条件下再与Fe3+络合而显红色。

此反应为香豆素的检识或结构鉴定。

（2）酚羟基反应香豆素类成分常具有酚羟基取代，可与三氯化铁溶液反应产生绿色至墨绿色沉淀。

常利用与三氯化铁溶液的反应判断酚羟基的有无。

四、黄酮类颜色反应

①HCl-Mg：

多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类化合物显红～紫红色；

②四氢硼钠还原反应：

二氢黄酮类化合物专属性较高；

③锆盐-枸橼酸反应：

3-OH，5-OH；

④氨性氯化锶反应：

邻二酚羟基；

⑤五氯化锑：

查耳酮。

1.还原反应

（1）盐酸-镁粉反应

①鉴定黄酮类化合物最常用的颜色反应；

②多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类化合物显红～紫红色，少数显蓝色或绿色，分子中特别是当B-环上有-OH或-OCH3取代时，呈现的颜色亦即随之加深。

③查耳酮、橙酮、儿茶素类无该显色反应；

④异黄酮类除少数例外，也不显色。

⑤注意事项：

利用此反应进行黄酮类化合物的鉴别时，需注意花色素类及部分橙酮、查耳酮类等单纯在浓盐酸酸性下也会发生颜色变化，出现假阳性结果。

操作：

必要时需预先作空白对照实验，即在供试液中不加镁粉，而仅加入浓盐酸进行观察，若产生红色，则表明供试液中含有花色素类或某些橙酮或查耳酮类。

（2）钠汞齐还原反应

黄酮、二氢黄酮、异黄酮、二氢异黄酮类显红色；黄酮醇类显黄～淡红色；二氢黄酮醇类显棕黄色。

（3）四氢硼钠还原反应

①四氢硼钠（NaBH4）是对二氢黄酮类化合物专属性较高的一种还原剂，此反应可在试管中或滤纸上进行。

②现象：

二氢黄酮类或二氢黄酮醇类被还原产生红～紫红色，其他黄酮类均为负反应。

③应用：

可用于鉴别二氢黄酮类、二氢黄酮醇类和其他黄酮类化合物。

2.与金属盐类试剂的络合反应

具有3-羟基、4-羰基或5-羟基、4-羰基或邻二酚羟基等结构，则可以与许多金属盐类试剂如铝盐、锆盐、锶盐等反应，生成有色的络合物或有色沉淀，有的还产生荧光。

（1）三氯化铝反应

生成的络合物多呈黄色，置紫外灯下显鲜黄色荧光，但4′-羟基黄酮醇或7，4′-二羟基黄酮醇显天蓝色荧光。

（2）锆盐-枸橼酸反应

①应用：

利用此反应鉴别黄酮类化合物分子中3-或5-OH的存在与否。

②若出现黄色，说明3-OH或5-OH与锆盐生成了络合物。

继之再加入枸橼酸，如黄色不减褪，示有3-OH或3，5-二OH；如果黄色显着减褪，示无3-OH，但有5-OH。

③原理：

因为5-羟基、4-羰基与锆盐生成的络合物没有3-羟基、4-羰基锆络合物稳定。

容易被弱酸分解。

此反应也可在滤纸上进行，得到的锆盐络合物斑点多呈黄绿色并有荧光。

（3）氨性氯化锶反应

如产生绿色至棕色乃至黑色沉淀，则表示有邻二酚羟基。

（4）三氯化铁反应多含有酚羟基，能与三氯化铁水溶液或醇溶液发生显色反应，可呈现紫、绿、蓝等不同颜色。

3.碱性试剂反应生成黄色、橙色或红色等。

4.硼酸显色反应5-羟基黄酮、6′-羟基查耳酮，可与硼酸反应，产生亮黄色。

①一般在草酸存在下显黄色并具有绿色荧光。

②在枸橼酸丙酮存在的条件下，则只显黄色而无荧光。

5.五氯化锑反应

①查耳酮类则生成红色或紫红色沉淀，而黄酮、二氢黄酮及黄酮醇类显黄色至橙色。

②应用：

区别查耳酮类与其他黄酮类化合物。

6.其他显色反应

①应用：

Gibb′s反应也可用于鉴别酚羟基对位是否被取代。

②方法：

酚羟基对位未被取代者在加入Gibb′s试剂后即显蓝色或蓝绿色。

1.还原反应

（1）盐酸-镁粉反应

①鉴定黄酮类化合物最常用的颜色反应；

②多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类化合物显红～紫红色，少数显蓝色或绿色，分子中特别是当B-环上有-OH或-0CH3取代时，呈现的颜色亦即随之加深。

③查耳酮、橙酮、儿茶素类无该显色反应；

④异黄酮类除少数例外，也不显色。

⑤注意事项：

利用此反应进行黄酮类化合物的鉴别时，需注意花色素类及部分橙酮、查耳酮类等单纯在浓盐酸酸性下也会发生颜色变化，出现假阳性结果。

操作：

必要时需预先作空白对照实验，即在供试液中不加镁粉，而仅加入浓盐酸进行观察，若产生红色，则表明供试液中含有花色素类或某些橙酮或查耳酮类。

（2）钠汞齐还原反应

①方法：

样品的乙醇溶液中加入钠汞齐，放置数分钟至数小时或加热，过滤，滤液用盐酸酸化。

②现象：

黄酮、二氢黄酮、异黄酮、二氢异黄酮类显红色；黄酮醇类显黄～淡红色；二氢黄酮醇类显棕黄色。

（3）四氢硼钠还原反应

①四氢硼钠（NaBH4）是对二氢黄酮类化合物专属性较高的一种还原剂，此反应可在试管中或滤纸上进行。

②现象：

二氢黄酮类或二氢黄酮醇类被还原产生红～紫红色，其他黄酮类均为负反应。

③应用：

可用于鉴别二氢黄酮类、二氢黄酮醇类和其他黄酮类化合物。

2.与金属盐类试剂的络合反应

黄酮类化合物分子中若具有3-羟基、4-羰基或5-羟基、4-羰基或邻二酚羟基等结构，则可以与许多金属盐类试剂如铝盐、锆盐、锶盐等反应，生成有色的络合物或有色沉淀，有的还产生荧光。

（1）三氯化铝反应

①方法：

此反应可在滤纸、薄层上或试管中进行。

②现象：

生成的络合物多呈黄色，置紫外灯下显鲜黄色荧光，但4′-羟基黄酮醇或7，4′-二羟基黄酮醇显天蓝色荧光。

（2）锆盐-枸橼酸反应

①应用：

利用此反应鉴别黄酮类化合物分子中3-或5-OH的存在与否。

②方法：

是取样品～1mg，用甲醇10ml溶解，加2%二氯氧锆甲醇溶液1ml，若出现黄色，说明3-OH或5-OH与锆盐生成了络合物。

继之再加入2%枸橼酸甲醇溶液，如黄色不减褪，示有3-OH或3，5-二0H；如果黄色显着减褪，示无3-OH，但有5-OH。

③原理：

因为5-羟基、4-羰基与锆盐生成的络合物没有3-羟基、4-羰基锆络合物稳定。

容易被弱酸分解。

此反应也可在滤纸上进行，得到的锆盐络合物斑点多呈黄绿色并有荧光。

（3）氨性氯化锶反应

黄酮类化合物的分子中如果有邻二酚羟基，则可与氨性氯化锶试剂反应，如产生绿色至棕色乃至黑色沉淀，则表示有邻二酚羟基。

（4）三氯化铁反应多数黄酮类化合物分子中含有酚羟基，能与三氯化铁水溶液或醇溶液发生显色反应，可呈现紫、绿、蓝等不同颜色。

3.碱性试剂反应

①现象：

黄酮类化合物与碱性溶液可生成黄色、橙色或红色等。

②应用：

对于鉴别黄酮类化合物的结构类型有一定意义。

还可帮助鉴别分子中某些结构特征。

4.硼酸显色反应

5-羟基黄酮、6′-羟基查耳酮类化合物在无机酸或有机酸存在条件下，可与硼酸反应，产生亮黄色。

①一般在草酸存在下显黄色并具有绿色荧光。

②在枸橼酸丙酮存在的条件下，则只显黄色而无荧光。

5.五氯化锑反应

①方法：

样品的无水四氯化碳溶液，加2%五氯化锑的四氯化碳溶液，若为查耳酮类则生成红色或紫红色沉淀，而黄酮、二氢黄酮及黄酮醇类显黄色至橙色，

②应用：

查耳酮类与其他黄酮类化合物。

6.其他显色反应

①应用：

Gibb′s反应也可用于鉴别黄酮类化合物酚羟基对位是否被取代。

②方法：

将样品溶于吡啶中，酚羟基对位未被取代者在加入Gibb′s试剂后即显蓝色或蓝绿色。

显色总结：

①HCl-Mg：

多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类化合物显红～紫红色；

②四氢硼钠还原反应：

二氢黄酮类化合物专属性较高；

③锆盐-枸橼酸反应：

3-OH，5-OH；

④氨性氯化锶反应：

邻二酚羟基；

⑤五氯化锑：

查耳酮。

胆汁酸类除具有甾体母核的颜色反应外，尚具有以下颜色反应：

（1）Pettenkofer反应：

取胆汁加蒸馏水及l0%蔗糖溶液摇匀，沿试管管壁加入浓硫酸，则在两液分界处出现紫色环。

其原理是蔗糖经浓硫酸作用生成羟甲基糠醛，后者可与胆汁酸结合成紫色物质。

（2）GregoryPascoe反应：

取胆汁加45%硫酸及%糠醛，水浴加热，胆酸存在的溶液显蓝色。

本反应可用于胆酸的定量分析。

（3）Hammarsten反应：

取少量样品，用20%铬酸溶液（20gCrO3在少量水中，用乙酸加至100m1）溶解，温热，胆酸为紫色，鹅去氧胆酸不显色。

Molish反应--是糖和苷类的检识反应。

样品+浓硫酸+a萘酚=界面处紫色环。

碳苷和糖醛酸与Molish阴性。

Smith降解—检测糖的种类，连接方式，氧环大小·特点：

反应条件温和、易得到原苷元适用：

苷元不稳定的苷和碳苷，不适合苷元上有邻二醇羟基或易被氧化的基团的苷。

样品（含稀醇）+NaIO4=糖开裂成醛+NaBH4=伯醇，再调pH=2，放置。

Smith裂解获得连一个醛基的苷元

异羟肟酸铁反应---鉴定内酯环的存在：

碱性条件下，香豆素内酯开环，并与盐酸羟胺缩合成异羟肟酸，再在酸性条件下与三价铁离子络合成盐而显红色。

酚羟基反应：

具酚羟基取代的香豆素类在水溶液中可与三氯化铁试剂络合而产生不同的颜色。

酚羟基的对位未被取代，6-位上没有取代，内酯环碱化开环后，可与Gibb’s试剂、Emerson试剂反应。

Gibb’s反应：

2,6-二氯（溴）苯醌氯亚胺试剂蓝色。

Emerson反应：

2%的4-氨基安替匹林和8%的铁氰化钾试剂红色。

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Feigl反应碱性加热与醛类及邻二硝基苯紫色化合物。

无色亚甲基蓝显色反应—苯醌及萘醌类的专用显色剂（蓝色斑点）与蒽醌区别。

Borntrāger`s反应，羟基醌碱性溶液颜色加深，多呈橙，红，紫红色，蓝色。

活性次甲基试剂的反应（K-C法）苯醌及萘醌类环上有未被取代的位置氨碱性==蓝绿色或蓝紫色。

与金属离子的反应（α-酚羟基、邻位二酚羟基；Pb2+,Mg2+）。

盐酸-镁（锌）粉反应黄酮（醇）二氢（醇）红色至紫红色

异黄酮、查尔酮无色四氢硼钠（钾）反应---二氢（醇）专属反应（红色、紫红色）

锆盐-枸椽酸显色反应。

区别3，5-OH3-OH+ZrOCl2黄色褪5-OH+ZrOCl2黄色不褪氯化锶（SrCl2）。

具邻二酚羟基生成绿-棕色、黑色沉淀

Sabety反应：

挥发油1滴→1ml氯仿＋5%溴的氯仿溶液→产生蓝紫色或绿色

与Ehrlich试剂（对-二甲胺基苯甲醛浓硫酸）反应产生紫色或红色

浓硫酸-醋酐（L-B反应）：

三萜-红甾体-绿

三氯化锑反应：

三萜显黄色、灰蓝、灰紫斑点，UV下蓝紫色荧光。

甾体UV黄色荧光。

三氯醋酸（Rosen-Heimer反应）红紫色斑点

氯仿-浓硫酸（Salkowsk反应）三萜样品溶于氯仿，滴加浓硫酸，氯仿层血红色或青色，硫酸层绿色荧光。

甾体：

毛地黄毒苷类、黄色。

羟基毛地黄毒苷类、蓝色。

异羟基毛地黄毒苷类、灰蓝色

泰尔登反应-亚硝酰氯，鉴定萜类，蓝、绿色D-A反应：

带共轭双键的萜类，得到结晶性加成产物

Vitali反应：

发烟硝酸鉴别莨菪碱呈深紫色樟柳碱阴性氯化汞反应：

莨菪碱黄红色东莨菪碱白色