生物制品课件2.ppt

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nn第三节第三节第三节第三节制造生物制品的条件制造生物制品的条件制造生物制品的条件制造生物制品的条件nn一、基本条件一、基本条件一、基本条件一、基本条件nn11、相应的厂房和动物舍、相应的厂房和动物舍、相应的厂房和动物舍、相应的厂房和动物舍nn22、相应的生产设备、相应的生产设备、相应的生产设备、相应的生产设备nn33、一一一一定定定定比比比比例例例例的的的的专专专专业业业业技技技技术术术术人人人人员员员员，包包包包括括括括能能能能掌掌掌掌握握握握生生生生产产产产技术和实验技术的专业人员。

技术和实验技术的专业人员。

技术和实验技术的专业人员。

技术和实验技术的专业人员。

nn44、具具具具有有有有防防防防止止止止散散散散毒毒毒毒的的的的设设设设施施施施和和和和隔隔隔隔离离离离条条条条件件件件，具具具具有有有有良良良良好好好好的卫生环境。

的卫生环境。

的卫生环境。

的卫生环境。

nn55、具有良好的消毒和排污设施、具有良好的消毒和排污设施、具有良好的消毒和排污设施、具有良好的消毒和排污设施nn66、水、电供应、水、电供应、水、电供应、水、电供应nn77、具有稳定的合乎标准要求的菌毒种、具有稳定的合乎标准要求的菌毒种、具有稳定的合乎标准要求的菌毒种、具有稳定的合乎标准要求的菌毒种nn（11）合合合合格格格格的的的的实实实实验验验验动动动动物物物物及及及及细细细细菌菌菌菌、病病病病毒毒毒毒的的的的培培培培养养养养基质基质基质基质nn（22）国家有关部门批准取得生产许可证。

）国家有关部门批准取得生产许可证。

）国家有关部门批准取得生产许可证。

）国家有关部门批准取得生产许可证。

nn二、生物制品生产的申报与审批二、生物制品生产的申报与审批nn1、实验室实验、实验室实验nn2、田间实验、田间实验nn3、中间实验、中间实验nn4、区域实验、区域实验nn5、申报、申报nn6、审批、审批nn7、新制品试生产、新制品试生产nn8、申请转为正式生产、申请转为正式生产nn9、经经兽兽药药评评审审委委员员会会再再评评价价后后，建建设设列列入规程的，发给正式生产批准文号入规程的，发给正式生产批准文号nn第第四四节节我我国国兽兽医医生生物物制制品品事事业业的的慨慨况况与与成成就就nn1951年年，成成立立了了兽兽医医生生物物制制品品监监察察所所（1982年改名中国兽药监察所）。

年改名中国兽药监察所）。

nn猪瘟兔化弱毒苗属世界领先地位，猪瘟兔化弱毒苗属世界领先地位，nn马马传传贫贫弱弱毒毒苗苗、牛牛瘟瘟疫疫苗苗、鸭鸭瘟瘟疫疫苗苗、小鹅瘟疫苗、仔猪副伤寒苗属国际水平。

小鹅瘟疫苗、仔猪副伤寒苗属国际水平。

nn与发达国家相比仍有许多不足。

与发达国家相比仍有许多不足。

nn一、生物制品菌、毒种的概念与分类一、生物制品菌、毒种的概念与分类nn凡凡应应用用于于生生物物制制品品生生产产、鉴鉴定定和和研研究究的的细细菌菌菌菌种种、病病毒毒毒毒种种以以及及分分类类地地位位在在原原虫虫以以下下的的生生物物种种都都属属于于生生物物制制品品的的菌菌种种和和毒毒种种范围。

范围。

nn按按用用途途分分类类：

1、生生产产用用菌菌、毒毒种种，A、直接生产用直接生产用B、免疫用免疫用C、加工用加工用nn2、鉴鉴定定用用菌菌、毒毒种种，4、标标准准菌菌株株（参参考菌株）考菌株）第二章第二章生物制品的菌种与毒种生物制品的菌种与毒种nn二、生物制品菌毒种的一般要求二、生物制品菌毒种的一般要求nn1、来源（历史）清楚、来源（历史）清楚，资料完整，资料完整nn由由中中监监所所或或中中监监所所委委托托分分管管的的单单位位负负责责供应供应nn2、生物学特性比较典型、生物学特性比较典型1.1.菌、毒种的形态特征，培养特性，菌、毒种的形态特征，培养特性，nn对对动动物物的的病病原原性性特特点点，引引起起细细胞胞病病变变的的特征特征nn生物化学、免疫学及血清学特性生物化学、免疫学及血清学特性nnnn3、血清型相符、血清型相符nn与疫苗使用区的流行病原相符与疫苗使用区的流行病原相符nn4、遗传性状稳定、遗传性状稳定nn保保存存、传传代代、使使用用过过程程中中受受各各种种因因素素影影响容易变异响容易变异nn三、菌种鉴定三、菌种鉴定nn

（一）毒力鉴定

（一）毒力鉴定nn规程规程规定有具体标准规定有具体标准nn

（二）免疫原性鉴定

（二）免疫原性鉴定攻毒保护试验攻毒保护试验（三）稳定性试验（三）稳定性试验nn毒力是否稳定、是否反强毒力是否稳定、是否反强四、毒种鉴定四、毒种鉴定nn强强毒毒毒毒种种和和弱弱毒毒毒毒种种要要根根据据各各自自的的特特性性制订相应的标准。

制订相应的标准。

nn五、菌毒种的保存五、菌毒种的保存nn避免变异避免变异nn真真空空冷冷冻冻干干燥燥（冻冻干干），冻冻干干的的菌菌种种4，毒种，毒种-20以下以下.第三章第三章细菌培养细菌培养nn第一节第一节细菌繁殖的营养要求细菌繁殖的营养要求一、水一、水nn二、碳源二、碳源nn三、氮源三、氮源nn四、无机盐四、无机盐五、生长因子：

某些微生物不能利用普通碳五、生长因子：

某些微生物不能利用普通碳源、氮源自身合成，而需要从外界得到补充，源、氮源自身合成，而需要从外界得到补充，又是它生长繁殖所必需的有机物质。

又是它生长繁殖所必需的有机物质。

nn第二节第二节培养基的主要成分与功用培养基的主要成分与功用nn一、肉浸汁一、肉浸汁nn二、蛋白胨二、蛋白胨nn三、明胶三、明胶nn四、琼脂四、琼脂nn五、酵母浸汁五、酵母浸汁nn第三节第三节培养基的种类与用途培养基的种类与用途nn天然培养基天然培养基nn合成培养基合成培养基nn固体培养基固体培养基nn液体培养基液体培养基nn半固体培养基半固体培养基nn选择培养基：

根据某一种类微生物的特选择培养基：

根据某一种类微生物的特殊营养要求或对某些物理、化学因素的殊营养要求或对某些物理、化学因素的抗性设计的一类培养基。

抗性设计的一类培养基。

nn鉴别培养基：

含有特定指示剂的培养基。

鉴别培养基：

含有特定指示剂的培养基。

nn第四节第四节培养基的制备程序培养基的制备程序nn第五节第五节常用培养基常用培养基nn第六节第六节细菌的繁殖细菌的繁殖nn一、细菌群体的繁殖规律一、细菌群体的繁殖规律nn

（一）迟缓期

（一）迟缓期原因、特点原因、特点nn

（二）对数期

（二）对数期原因、特点原因、特点nn（三）稳定期（三）稳定期原因、特点原因、特点nn（四）衰亡期（四）衰亡期原因、特点原因、特点二、影响细菌繁殖的因素二、影响细菌繁殖的因素nn

（一）营养

（一）营养

（二）温度

（二）温度接近最适生长温度时繁殖最接近最适生长温度时繁殖最快快nn（三）氢离子浓度（三）氢离子浓度（PH）nnPH69PH7.07.6nn（四）二氧化碳四）二氧化碳自养菌自养菌nn（五）通气（五）通气O2nn（六）渗透压六）渗透压第七节第七节大量生产细菌培养方法大量生产细菌培养方法nn一、固体表面培养法一、固体表面培养法nn二、液体静置培养法二、液体静置培养法nn三、液体深层通气培养法三、液体深层通气培养法nn四、透析培养法四、透析培养法nn五、连续培养法五、连续培养法第四章第四章病毒培养病毒培养nn病毒增殖的特点：

病毒增殖的特点：

nn活活细细胞胞内内寄寄生生缺缺乏乏完完备备的的酶酶系系统统和和合合成成蛋白质的场所；蛋白质的场所；nn病毒增殖方式为复制病毒增殖方式为复制；nn病病毒毒增增殖殖过过程程分分为为吸吸附附、侵侵入入、脱脱壳壳、生物合成、装配及释放。

生物合成、装配及释放。

第一节第一节动物培养动物培养nn一一.动物的选择：

动物的选择：

nn对病毒易感，健康，最好为对病毒易感，健康，最好为SPF动物动物nn二二.动物接种方法：

动物接种方法：

nn1.皮皮下下2皮皮内内3静静脉脉4腹腹腔腔5脑内脑内6鼻腔滴入等鼻腔滴入等nn三三.接接种种后后动动物物的的饲饲养养管管理理和和收收获获病病毒毒三三.接种后动物的饲养管理和收获病毒接种后动物的饲养管理和收获病毒在有良好隔离装置场地饲养在有良好隔离装置场地饲养不同组分开饲养不同组分开饲养接种动物出现典型症状者才能收获病接种动物出现典型症状者才能收获病毒毒第二节第二节鸡胚培养鸡胚培养nn一、鸡卵的选择与孵育：

一、鸡卵的选择与孵育：

nn应来自健康鸡群，最好是应来自健康鸡群，最好是SPF鸡群鸡群nn无母源抗体无母源抗体nn用浅色鸡蛋用浅色鸡蛋l二、鸡胚接种：

二、鸡胚接种：

l1.绒毛尿囊膜接种绒毛尿囊膜接种l2.尿囊腔接种尿囊腔接种l3.卵黄囊接种卵黄囊接种l4.羊膜腔接种羊膜腔接种l5.静脉、脑内接种静脉、脑内接种l三、收获三、收获l鸡胚放鸡胚放4C下过夜，消毒蛋壳下过夜，消毒蛋壳nn包括组织块培养、器官培养和细胞培养。

包括组织块培养、器官培养和细胞培养。

nn一般指细胞培养一般指细胞培养nn原代细胞：

用新鲜组织制备。

原代细胞：

用新鲜组织制备。

nn二二倍倍体体细细胞胞：

含含双双倍倍的的染染色色体体，能能传传50-100代。

代。

nn传代细胞：

能够在体外无限传代的细胞。

传代细胞：

能够在体外无限传代的细胞。

第三节第三节组织培养组织培养nn培养液：

培养液：

培养液：

培养液：

基础培养液，有基础培养液，有基础培养液，有基础培养液，有RPMI-1640RPMI-1640、MEMMEM等等等等生长液：

加生长液：

加生长液：

加生长液：

加5-10%5-10%小牛血清小牛血清小牛血清小牛血清维持液：

加维持液：

加维持液：

加维持液：

加1-2%1-2%血清血清血清血清nn影响细胞生长的因素影响细胞生长的因素影响细胞生长的因素影响细胞生长的因素nn11温度温度温度温度3737nn22pHpH值值值值7.0-7.46.8-7.67.0-7.46.8-7.6nn33气体气体气体气体OO22、COCO22nn44细胞接种量细胞接种量细胞接种量细胞接种量nn55无菌条件无菌条件无菌条件无菌条件单细胞的制备单细胞的制备nn1.机械分散法机械分散法nn2.酶消化法酶消化法nn0.25%胰蛋白酶胰蛋白酶nn3.螯合剂分散法螯合剂分散法nnEDTA0.01%EDTA+0.025%胰胰蛋蛋白白酶酶混合液混合液nn细胞培养关键：

细胞培养关键：

1、细胞的冻存与复苏、细胞的冻存与复苏用用DMSO做保护剂做保护剂用慢冻快融法用慢冻快融法2、细胞培养污染控制、细胞培养污染控制细菌污染、支原体污染、细菌污染、支原体污染、病毒污染病毒污染五五.细胞培养法细胞培养法

（一）单层细胞静止培养或转瓶培养

（一）单层细胞静止培养或转瓶培养nn1.原代细胞培养原代细胞培养nn2.传代细胞培养传代细胞培养

（二）细胞悬浮培养

（二）细胞悬浮培养淋淋巴巴样样细细胞胞、癌癌细细胞胞、sf-9、sf-21细胞细胞nn1.快速旋转管和充气摇动瓶法快速旋转管和充气摇动瓶法nn2.发酵罐法发酵罐法nn（三）微载体培养法（三）微载体培养法