血细胞分析仪_精品文档.ppt

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血细胞分析仪教学目标n1、掌握血细胞分析仪的库尔特原理n2、掌握白细胞、红细胞、血小板直方图的临床意义。

n3、了解血细胞分析仪的质量控制教学重点、难点n教学重点：

1、血细胞分析仪电阻抗原理2、细胞直方图的分析n教学难点：

细胞直方图的分析授课内容授课内容n概述n血细胞分析仪检测原理n血细胞分析仪类型n血细胞分析仪检测项目n血细胞直方图1.显微镜计数显微镜计数：

原理简单、方便实用比较费时费力、影响因素较多。

2.血液分析仪血液分析仪检测项目多检测项目多速度快速度快精度高精度高信息含量大易标准化、规范化易标准化、规范化概概述述血液分析仪发明者血液分析仪发明者库尔特库尔特库尔特库尔特先生先生35岁的美国人库尔特发明了粒子计数技术；50年代初期，血细胞计数仪开始应用于临床。

科技为人类健康服务，热心社会公益事业。

库尔特先生库尔特先生1913-19981913-1998COULTER：

全自动细胞分析仪全自动细胞分析仪COULTER：

细胞分析仪细胞分析仪第一台细胞计数仪第一台细胞计数仪第一台细胞计数仪第一台细胞计数仪瓶瓶罐罐瓶瓶罐罐瓶瓶罐罐瓶瓶罐罐+管道管道管道管道+电极电极电极电极+示波器示波器示波器示波器库尔特（美国通用电气公司员工）在上海工作时所拍照库尔特（美国通用电气公司员工）在上海工作时所拍照血细胞分析发展史n1.1953年美国Coulter公司研制成功第一台电阻抗是血细胞分析仪；n2.六十年代已普遍应用到临床，当时可检测RBC、Hb、WBC、MCV、MCH、MCHC等项目；n3七十年代，增加了PLT；n4七十年代末至八十年代开发了DC及RDW及MPV等新项目；n5九十年代以来，RET、NRBC、淋巴细胞亚群分析等指标。

现代分析仪进展n1自动化程度越来越高；n2提供参数越来越多；n3精密度越来越高；n4速度越来越快；n5越来越注重环保；n6质控功能得到加强；n7智能化程度越来越高。

一一血液分析仪检测原理血液分析仪检测原理血液分析仪检测原理大致分为两类：

血液分析仪检测原理大致分为两类：

电阻抗法（库尔特原理）电阻抗法（库尔特原理）光散射法光散射法（其中其中电阻抗法是血液分析仪的设计基础电阻抗法是血液分析仪的设计基础）血液分析仪主要能完成两大功能：

血液分析仪主要能完成两大功能：

细胞计数功能细胞计数功能细胞分类功能细胞分类功能

（一）

（一）电阻抗法原理（库尔特原理电阻抗法原理（库尔特原理）11库尔特原理库尔特原理库尔特原理是利用电阻抗法测量库尔特原理是利用电阻抗法测量细胞的数量和体积。

其内容为：

血细细胞的数量和体积。

其内容为：

血细胞是电的不良导体，当一个细胞通过胞是电的不良导体，当一个细胞通过计数小孔时，会导致小孔两端电阻的计数小孔时，会导致小孔两端电阻的变化，将其转化成脉冲，感应器通过变化，将其转化成脉冲，感应器通过检测脉冲的数量及大小，从而计算出检测脉冲的数量及大小，从而计算出通过小孔的细胞数量及体积。

通过小孔的细胞数量及体积。

22库尔特原理图库尔特原理图细胞计数池中，小孔内外细胞计数池中，小孔内外两个电极和稀释液构成一两个电极和稀释液构成一个电流回路，在负压作用个电流回路，在负压作用下，细胞通过小孔，电极下，细胞通过小孔，电极能感应到一个瞬间的电阻能感应到一个瞬间的电阻变化，并将其转换成脉冲，变化，并将其转换成脉冲，脉冲的数量代表细胞数量，脉冲的数量代表细胞数量，脉冲大小反映细胞体积大脉冲大小反映细胞体积大小小。

脉冲检测器脉冲检测器33电阻抗法仪器的主要组成电阻抗法仪器的主要组成电阻抗法仪器的主要组成包括：

电阻抗法仪器的主要组成包括：

1.1.信号发生器（信号发生器（脉冲检测器）脉冲检测器）2.2.放大器（微伏放大为伏级的脉冲信号）放大器（微伏放大为伏级的脉冲信号）3.3.阈值调节（计数不同细胞有不同阈值）阈值调节（计数不同细胞有不同阈值）4.4.甄别器（除去假脉冲信号）甄别器（除去假脉冲信号）5.5.整形器（波形调整为标准一致的平顶波）整形器（波形调整为标准一致的平顶波）6.6.计数系统（不同脉冲区分出不同细胞并计数）计数系统（不同脉冲区分出不同细胞并计数）红细胞直方图红细胞直方图红红细细胞胞计计数数和和血血细细胞胞比比容容测测定定与与白白细细胞计数相似。

胞计数相似。

100200300400（fl）%WBCWBC直方图直方图血小板直方图血小板直方图随红细胞在一个系统中进行检测随红细胞在一个系统中进行检测。

直方图在228fl（不同仪器不一）。

102030（fl）102030（fl）%

（二）白细胞系检测原理n1.电阻抗法nn标本单个白细胞按体积大小分类溶血素稀释液电阻抗法淋巴细胞单个核细胞中性粒细胞仪仪器器将将体体积积为为3535450fL450fL的的血血细细胞胞，分分为为256256个个通通道道（channelchannel）。

每每个个通通道道：

1.64fl1.64fl。

根根据据细细胞胞大大小小，分分别别置置于于不不同同的的通通道道中中，显显示示血血细细胞胞体体积积分分布布直直方方图图（Histogram）（Histogram）。

白细胞检测原理白细胞检测原理根根据据电电阻阻抗抗的的原原理理，不不同同体体积积白白细细胞胞（35-450）fL（35-450）fL产生脉冲大小的明显差异而区分相应的产生脉冲大小的明显差异而区分相应的三群三群三群三群细胞：

细胞：

3590f1160fl以上90160f1经溶血素处理脱水后，血细胞体积大小发生经溶血素处理脱水后，血细胞体积大小发生了了变变化化！

以以细细胞胞的的有有形形成成分分作作为为细细胞胞的的大小大小第一群（第一群（353590fl90fl）小细胞区：

淋巴细胞小细胞区：

淋巴细胞（体积最小）（体积最小）。

第二群（第二群（9090160fl160fl）单个核细胞区，（中单个核细胞区，（中间细胞）：

单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱间细胞）：

单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、原始、幼稚细胞、异常细胞等。

性粒细胞、原始、幼稚细胞、异常细胞等。

第三群（第三群（160fl160fl以上）以上）大细胞区：

嗜中性粒细大细胞区：

嗜中性粒细胞（体积最大）胞（体积最大）。

（二）光散射法血液分析仪检测原

（二）光散射法血液分析仪检测原理理n光散射法光散射法组合应用电学、光学、细胞化学组合应用电学、光学、细胞化学多项技术检测血液细胞，可得出较准确的多项技术检测血液细胞，可得出较准确的细胞计数和分类计数的结果。

细胞计数和分类计数的结果。

nn这些测试原理的改进主要体现在对白细胞这些测试原理的改进主要体现在对白细胞分类部分的改进分类部分的改进，即电阻抗法的白细胞三分，即电阻抗法的白细胞三分群发展为多项技术对白细胞五分类。

群发展为多项技术对白细胞五分类。

11、白细胞检测、白细胞检测（11）容容量量、电电导导、光光散散射射（volume，conductivity，scatter,VCS）法法原理原理细胞体积技术细胞体积技术（测量细（测量细胞大小）胞大小）电导性技术电导性技术（测量细胞（测量细胞内部结构）内部结构）光散射技术光散射技术（测量细胞（测量细胞形态、细胞核和细胞颗形态、细胞核和细胞颗粒）。

粒）。

体积电导光散射VCSVCS可显示可显示33种细胞散点图种细胞散点图DF1DF1（体积值和散射光值）体积值和散射光值）DF2DF2（体积值和电导值）体积值和电导值）DF3DF3（体积值和电导值）体积值和电导值）（22）电电阻阻抗抗与与射射频频法法（能能透透入入细细胞胞内内，测测量核的大小及颗粒的多少）。

量核的大小及颗粒的多少）。

RF:

RF:

射频电流射频电流细胞内部结构信息细胞内部结构信息DC:

DC:

直流电直流电细胞大小的信息细胞大小的信息（33）激光与细胞化学法）激光与细胞化学法过氧化物酶检测通道过氧化物酶检测通道嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞/分叶核检测通道分叶核检测通道。

（44）多多角角度度偏偏振振光光散散射射（multi-anglepolarizedscatterseparationofwhitecell,MAPSS）法法00：

前前角角光光散散射射（1133），可可粗粗略略测定细胞大小。

测定细胞大小。

1010：

狭狭角角光光散散射射（771111），可可测测定细胞内部结构相对特征。

定细胞内部结构相对特征。

9090：

垂垂直直光光散散射射（7070110110），测测定细胞核分叶情况。

定细胞核分叶情况。

9090：

消消偏偏振振光光散散射射（7070110110），区分嗜酸性粒细胞与其他细胞。

区分嗜酸性粒细胞与其他细胞。

1红细胞计数（红细胞计数（RBC）和红细胞比积（和红细胞比积（Hct）1）RBC原理（脉冲数的多少）原理（脉冲数的多少）2）Hct/PCV原理（脉冲的高度与叠加）原理（脉冲的高度与叠加）3）白细胞数的干扰）白细胞数的干扰4）红细胞体积分布直方图）红细胞体积分布直方图100200flRBC（三）红细胞测试原理红细胞检测原理红细胞检测原理红红细细胞胞计计数数和和血血细细胞胞比比容容测测定定与与白白细细胞计数相似。

胞计数相似。

100200300400（fl）%正态分布,峰顶在8296fl电阻抗法检测红细胞要注意白细胞增高干扰：

电阻抗法检测红细胞要注意白细胞增高干扰：

稀释血液中含有白细胞，正常时，血液红细胞稀释血液中含有白细胞，正常时，血液红细胞与白细胞的比例约为与白细胞的比例约为500500：

1110001000：

ll，因此，因此，白细胞因素可忽略不计。

白细胞因素可忽略不计。

当病理情况下，如白血病时，白细胞数明显当病理情况下，如白血病时，白细胞数明显增高，同时又伴有贫血时，使所得红细胞参增高，同时又伴有贫血时，使所得红细胞参数可产生明显误差。

数可产生明显误差。

2.2.血红蛋白测定原理血红蛋白测定原理有关溶血剂有关溶血剂11ICSHICSH推荐的推荐的HICNHICN法：

最大吸收峰在法：

最大吸收峰在540nm540nm。

血红蛋白衍生物是血红蛋白衍生物是HICNHICN，试剂反应时间长，试剂反应时间长，55分钟，不适合分钟，不适合全自动仪器。

另外，氰化血红蛋白全自动仪器。

另外，氰化血红蛋白（CN-HBCN-HB）：

）：

试剂成分氰化钾（剧毒）。

试剂成分氰化钾（剧毒）。

22非氰化溶血剂（非氰化溶血剂（如如SDS-HBSDS-HB）：

）：

SDS-HBSDS-HB与与HICH-HBHICH-HB吸收光谱相似。

吸收光谱相似。

（四四）血小板检测原理血小板检测原理根据电阻抗法，血小板随红细胞在一根据电阻抗法，血小板随红细胞在一个系统中进行检测，在红细胞血小板计个系统中进行检测，在红细胞血小板计数池中计数数池中计数2fl2fl30fl30fl的颗粒。

的颗粒。

血小板检测原理血小板检测原理血小板计数（血小板计数（platelet,PLTplatelet,PLT）：

）：

随红细胞在一个系统中进行检测随红细胞在一个系统中进行检测。

直方图在230fl（不同仪器不一）。

102030（fl）102030（fl）%呈偏态，峰顶510fln血细胞分析仪工作流程二、血细胞分析仪类型二、血细胞分析仪类型

（一）单纯电阻抗法三分群血液分

（一）单纯电阻抗法三分群血液分析仪特点析仪特点

（1）

（1）检测参数：

检测参数：

约约2020项左右。

项左右。

（2）

（2）白细胞分类：

只能对白细胞进行三分白细胞分类：

只能对白细胞进行三分群。

群。

（3）（3）直方图：

直方图：

33种直方图。

种直方图。

（4）（4）报警功能：

报警功能：

以文字和以文字和（或或）图标提示图标提示异常检测结果的信息。

异常检测结果的信息。

血液细胞分析仪

（二）综合光学和电学等技术血液分析仪特

（二）综合光学和电学等技术血液分析仪特点点

（1）

（1）检测参数：

检测参数：

约约2020至至4040项左右项左右

（2）

（2）白细胞分类：

能对白细胞进行五分类。

白细胞分类：

能对白细胞进行五分类。

（3）（3）直方图和散点图：

直方图和散点图：

33种直方图和散点